氨基酸测定方法

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国家标准检测食品中的氨基酸是采用先将食品中蛋白质经盐酸水解成为游离氛基酸,经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后,与印三酮溶液产生颜反应,再通过分光光度计比浏定氨基酸含量
其实不仅是报告与否的问题。还涉及到结果重复性、操作简便性、单样成本(总体成本)等问题,更为重要的是,在HPLC系统中,有些氨基酸根本不能分开,像AQC法中,精氨酸与磺基丙氨酸就完全重合,容易导致错误的判断(如果出报告,就更危险了)
氨基酸分析仪价钱和维护都比较昂贵,如果不是经常大批量检验的话从成本考虑不合算.但它比较准确,仲裁的话一般用该法.HPLC法在不经常分析样品的情况下相对便宜,但如果是经常大量分析样品,单次成本反不如氨基酸分析仪,且它的重现性不如后者
谷物籽粒氨酸测定法
1 适用范围  本标准适用于测定谷物籽粒氨酸含量。
2 原理  谷物蛋白质碱解后,降解成肽和游离的氨基酸。在酸性介质中,有硝酸盐存在条件下,氨酸吲哚环与对二甲胺基苯甲醛反应,生成蓝化合物,在一定范围内颜深浅与氨酸含量成正比。
3 仪器、设备
中国野人之谜3.1 分析天平,感量0.1mg。
3.2 实验室用粉碎机。
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3.3 721型分光光度计,或相当的仪器。
3.4 离心机,4000r/min。
3.5 培养箱。
3.6 20ml具塞刻度玻璃试管(须校准)。
4 试剂  除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。
4.1 浓盐酸(GB 622—77),比重1.19。
4.2 10%盐酸溶液:22.7ml浓盐酸加水至100ml。
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4.3 5%对二甲胺基苯甲醛(HGB 3486—62)溶液:5g 对二甲胺基苯甲醛溶于10%盐酸中,并定容100ml。
4.4 1%硝酸钠(GB 636—77)水溶液(m/V)。
注:4℃冰箱中保存,一周内使用有效。
4.5 10%氢氧化钾(GB 2306—80)水溶液(m/V)。
4.6 L-氨酸,层析纯。
4.7 L-氨酸标准溶液:准确称25mgL-氨酸(105℃干燥2h),加少量0.1mol/L氢氧化钠(GB 629—81)使之溶解,定量地转移到250ml棕容量瓶中,用水定容。浓度为100μg/ml。
注:4℃冰箱中保存,一个月内使用有效。
5 试样的选取与制备
5.1 选取具有代表性谷物籽粒,挑拣干净,按四分法缩减取样,样量不得少于20g。籽粒充分风干后用粉碎机磨碎(带壳籽粒先脱壳),使95%以上通过0.25mm孔径筛。
5.2 按GB 2906—82《谷类、油料作物种子粗脂肪测定法》脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后,混匀,装入磨口瓶中备用。
6 校准曲线的绘制  吸L-氨酸标准溶液0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml分别置于20ml具塞刻度玻璃试管中,加1ml10%氢氧化钾溶液
,摇匀;加0.2ml5%对二甲胺基苯甲醛,摇匀;加0.2ml1%硝酸钠,摇匀;将试管置于冰水中,再加5ml浓盐酸。取出试管,强烈振摇后放入25℃培养箱中显75min(温度升到25℃时记时),取出后用水稀释至刻度,摇匀。以试剂空白作对照在590nm波长处测读吸光度。以氨酸含量(μg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制校准曲线。在温度较高的季节和地区,制定校准曲线时,参见附录A。
7 测定步骤
7.1 称样:称取40mg试样两份,准确至0.1mg,与此同时,另称样品,按GB 3523 —83《谷类、油料作物种子水分测定法》测定水分含量。
7.2 水解:将试样置于20ml具塞刻度玻璃试管中,加1ml10%氢氧化钾,振摇,样品全部湿润后,放入40℃培养箱中水解16~18h。
7.3 显:从培养箱中取出试管冷至室温后加0. 2ml5%对二甲胺基苯甲醛,摇匀;加0.2ml1%硝酸钠,摇匀;将试管置于冰水中,再加5ml浓盐酸。取出试管,强烈振摇后置于40℃培养箱中显45min(温度升到4℃时记时)。
氰酸钾
7.4 测定:取出试管冷至室温后,用水稀释至刻度,摇匀。以4000r/min离心10min。取上清液以试剂空白作对照,在590nm波长处测读吸光度。
8 结果计算
8.1 计算公式
式中:m──
试样质量,mg;
α──
从校准曲线上查得的氨酸含量,μg;
H──
试样水分百分率。
8.2 结果的表示
两个平行样品的测定结果用算术平均值表示,保留有效数字两位,第三位数按GB 1.1—81《标准化工作导则 编写标准的一般规定》附录C规定取舍。国家公路网规划(2013年-2030年)
8.3 允许差
两个平行样品氨酸测定值为0.10%以下时,相对差允许为8%;0.10%或 0.10%以上时为5%。
① 为脱脂试样的氨酸百分含量,换算成原样品的氨酸含量应乘以系数(1-脂肪%)。如脂肪含量为4%以下时,二个结果在允许差之内。

本文发布于:2024-09-22 22:31:26,感谢您对本站的认可!

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