BDFACSCalibur流式细胞仪操作手册

BD FACSCalibur流式细胞仪

FACS101 Handbook

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本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。如希望进一步了解流式细胞技术应用，请至本订阅FACSinformation电子报。如需要本课程手册，欢迎至本下载中国大学及学科专业评价报告。如需要免疫荧光染方法，请至本下载。

一、BD FACSCalibur基本结构

1.1仪器本体：

	1. 电源开关：在BD FACSCalibur仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。


	2. 光学系统：BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射以BD FACSCalibur 基本型为例 FSC Diode 只收488 nm波长散射光 SSC PMT 只收488 nm波长散射光 FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿范围（波长515-545 nm） FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红范围（波长564-606 nm） FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红范围（波长 >650 nm）





	3. 仪器面板：仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。流速控制： LO：样品流速：12 μl /min MED：样品流速：35 μl /min HI: 样品流速：60 μl /min



	功能控制： ∙RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进入流动室。（正常显示绿；黄时表示仪器不正常，请检查是否失压。） ∙STANDBY：无样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停止流动，雷射功率自动降低。 ∙PRIME：去除流动室中的气泡，流动室施以反向压力，将液流从流动室冲入样品管，持续一定时间后，以鞘液回注满流动室。PRIME 结束，仪器恢复STANDBY状态。

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	4. 储液箱抽屉：在主机左下方之储液箱抽屉。可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter，及空气滤网 Air filter。请注意气路减压阀VENT TOGGLE之位置。

	∙胸骨鞘液筒：位于抽屉左侧，容积4升。装八分满鞘液筒，仪器可以运行大约 3小时。筒上装有液面感应器，鞘液用完时，仪器软件上会有显示。鞘液筒盖上有金属环扣，保证鞘液筒密闭。 ∙废液筒：位于抽屉右侧，容积4升。筒上装有液面感应器，废液盛满时，仪器软件上会有显示。注意废液可能有潜在的生物传染性。 ∙鞘液过滤器：0.22μm过滤器，去除鞘液中的杂质，保证进入流动室的鞘液是干净的。 ∙气路减压阀：沿箭头方向移动阀门开关，鞘液筒减压，气压恢复正常。在鞘液筒添加鞘液时，需要减压。 ∙双因素方差分析法空气过滤网：用于过滤冷却雷射的空气。

	5. 上样品区：上样品区是样本管的上样位置。它包括三个部分，一个是进样针 Sample Injection Tube，将样本输入流动室，还有就是支撑架 Tube Support Arm、和液滴存留系统 Droplet Containment System。 ∙进样针：是一根不锈钢管，将细胞从样本针中吸入流动室。进样管外有一套管，是液滴保留系统的一部分。 ∙支撑架：用于支撑样本管、并负责启动液滴存留系统。支撑架有三个位置：位于样本管之下的中位，样本管左侧或右侧。

	液滴存留系统：系统由支撑架、真空帮浦和外套管组成。当支撑架位于左侧或右侧位置时，真空帮浦就会启动，将液体从外管吸入废液筒内。上样时，须注意将支撑架位于中位，以避免过多样品被抽吸到废液筒内（当支撑架位于中位，真空帮浦停止工作）。更换样品时，让仪器保持RUN的模式，使得进样针可以反冲；切换到STANDBY模式前，确保液路已冲洗彻底以免碎片沈积到流动室中。



1.2 Macintosh计算机及打印机：

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