丁会珍，刘丹丹，程 霞，陈如钰，王宏伟
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｗａｘｂｌｏｃｋｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ
ＤＩＮＧＨｕｉｚｈｅｎ，ＬＩＵＤａｎｄａｎ，ＣＨＥＮＧＸｉａ，ＣＨＥＮＲｕｙｕ，ＷＡＮＧＨｏｎｇｗｅｉ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＦｏｕｒｔｈＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰＬＡＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００４８，Ｃｈｉｎａ．【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅｃｙｔｏｌｏｇｙａｎｄｆｉｎｅｎｅｅｄｌｅａｓｐｉｒａｔｉｏｎｃｙｔｏｌｏｇｙｈａｖｅｂｅｃｏｍｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｓｏｕｒｃｅｓｏｆｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｍｅｄｉｃａｌｆｉｅｌｄ．Ｔｈｅｙａｒｅｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｗｏｒｋｗｉｔｈｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅｏｒｍｉｎｉｍａｌｌｙｉｎｖａ ｓｉｖｅ，ｒｅｔｒｉｅｖａｂｌｅｍａｔｅｒｉａｌｓａｎｄｒａｐｉｄｄｉａｇｎｏｓｉｓ．Ｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｃｅｌｌｓｍｅａｒｍｅｔｈｏｄｈａｓａｌｏｗｐｏｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｅ，ｐｏｏｒｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉ
ｔｙ，ａｎｄａｃｅｒｔａｉｎｍｉｓｄｉａｇｎｏｓｉｓｒａｔｅ．Ｃｅｌｌｕｌａｒｗａｘｂｌｏｃｋｓｃａｎｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｔｈｅｓｈｏｒｔｃｏｍｉｎｇｓｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｓｍｅａｒｓａｎｄｈａｖｅｇｒｅａｔａｄｖａｎｔａｇｅｓｉｎｔｈｅｌａｔｅｒｓｐｅｃｉａｌｓｔａｉｎｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｅｔｃ．Ｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗｗｉｌｌｉｎｔｒｏｄｕｃｅｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｗａｘｂｌｏｃｋｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｍｅｔｈ ｏｄｓ．
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅｃｙｔｏｌｏｇｙ，ｆｉｎｅｎｅｅｄｌｅｐｕｎｃｔｕｒｅ，ｃｅｌｌｕｌａｒｗａｘｂｌｏｃｋ，ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ
ＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０２１，２９（０７）：１２５９－１２６２
【指示性摘要】脱落细胞学和细针穿刺细胞学成为医学领域的重要信息来源，以无创或者微创、可反复取材、诊断迅速的特点在临床工作中得到广泛应用。传统的细胞涂片方法阳性检出率低，可重复性差，有一定的误诊率。细胞蜡块可以弥补传统涂片的不足，并且在后期的特殊染、免疫组织化学检测、分子病理检测等方面有很大的优势，本综述将对细胞蜡块制备方法应用进展做以介绍。
【关键词】脱落细胞学；细针穿刺；细胞蜡块；制备方法；离心沉淀
【中图分类号】Ｒ７３－３５＋１ 【文献标识码】Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－４９９２．２０２１．０７．０３４
【文章编号】１６７２－４９９２－（２０２１）０７－１２５９－０４
细胞病理学主要是根据细胞内异常物质或者细胞的形态变化，研究疾病的发生、发展变化规律，从而达到诊断疾病和预防疾病的目的。但是常规细胞涂片厚、细胞重叠、易脱片、细胞结构不清不足等特点［１－２］，对需要进一步做特殊染、免疫组织化学、分子病理检测等疑难病例的诊断及肿瘤的个体化带来困扰。经过长期的摸索，发现细胞蜡块可以弥补细胞涂片的不足，达到类似组织蜡块的理想效果［３－４］。
１ 脱落细胞学
脱落细胞学是指人体自然脱落的细胞，细针穿刺细胞学是指人为脱落的细胞。脱落细胞学和细针穿刺细胞学是细胞病理学的一个分支，以其微创或者无创、可反复采集、诊断迅速等特点［５－６］，成为大规模防癌普查和预后随访的重要诊断手段。
【收稿日期】 ２０２０－０８－０３
【基金项目】 国家自然科学基金资助项目（编号：８１５７１５１９）
【作者单位】 中国人民解放军总医院第四医学中心病理科，北京 １０００４８
【作者简介】 丁会珍（１９８７－），女，山西运城人，医师，主要从事病理学技术研究。Ｅ－ｍｉａｌ：ｄｈｚ２０１０ｄｈｚ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
【通讯作者】 王宏伟（１９７６－），男，北京人，副主任医师，博士，主要从事临床病理诊断和感染与免疫机制研究。Ｅ－ｍａｉｌ：
ｗｈｗ６６２６＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ２ 细胞蜡块制备方法
２．１ 玻片法
适用于细胞量多、黏附性好的标本，如细针穿刺标本。此种方法比较简单，但是对细胞含量要求较高。穿刺针穿刺的标本打在载玻片上，用针尖将细胞在玻片上聚集成团，用９５％的酒精使其表面短暂硬化，再用１０％中性福尔马林固定３０ｍｉｎ，用刀片轻轻刮取细胞团块，用滤纸包裹放入包埋盒，浸入１０％中性福尔马林固定２ｈ，常规脱水、包埋、制片即可［７－８］。 ２．２ 离心沉淀法
适用于大部分未经固定的新鲜标本，对于细胞含量少、没有网状纤维的标本不容易得到理想的细胞蜡块。也有报道称乙醇－吸管离心沉淀法对液基细胞学可以得到理想的细胞蜡块。
２．２．１ 普通离心沉淀法 送检的标本离心沉淀后，弃上清，用镊子轻轻取出沉淀物，用滤纸包裹放入包埋盒，再用１０％中性福尔马林固定２ｈ，常规脱水、包埋、制片即可［９－１０］。此种方法制作细胞蜡块，操作简单，适用于细胞量比较多的标本，但是对于液基细胞学标本、细针穿刺标本等细胞含量少的标本，因没有填充物支架网罗，难以制成细胞蜡块。２．２．２ 传统酒精凝固法 送检的标本离心沉淀后，弃上清，加入９５％酒精混匀，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，静置３０ｍｉｎ，细胞聚集成团块，吹打取出，用滤纸包裹放入包埋盒，再用１０％中性福尔马林固定２ｈ，常规脱水、包埋、制片即
·
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现代肿瘤医学 ２０２１年０４月 第２９卷第０７期 ＭＯＤＥＲＮＯＮＣＯＬＯＧＹ，Ａｐｒ ２０２１，ＶＯＬ ２９，Ｎｏ ０７
可［１１］。和普通离心沉淀法比较，此种方法细胞更容易聚集
成团，但是先用酒精固定标本，细胞结构略有退变，胞质明显空泡状，形成核沉淀，染后核质不清
曾国明［１２］
。
２．２．３ 改良版酒精凝固法 送检的标本离心沉淀后，弃上清，加入沉淀体积１０倍的１０％中性福尔马林吹打均匀悬浮固定１
５ｍｉｎ，３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清，加入７５％酒精混匀，立即３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清，加９５％酒精混匀，立即３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，静置２ｈ，细胞聚集成团块，吹打取出，用滤纸包裹放入包埋盒，常规脱水、包埋、制片即
可［
１３］
。和传统酒精凝固法相比，此种方法先用１０％中性福尔马林固定可以使细胞形态完整、轮廓清晰、染结果对比
鲜明，对后期的免疫组织化学检测、分子检测影响小［１４－１５］
，
不足之处是对细胞含量少的标本制作细胞蜡块还是存在一定困难。
２．２．４ 乙醇－吸管法 将液基细胞学保存瓶剩余的标本摇匀离心沉淀后，弃上清，加入等体积９５％酒精混匀，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，静置３０ｍｉｎ，弃上清，用吸水纸吸干试管周围多余的酒精，用吸管轻轻吸取组织，滴到９５％酒精浸湿的滤纸中央，用滤纸包好放入包埋盒，常规脱水、包埋、制片即可
［１６］
。此种方法操作简单，价格低廉，不需用其它添加剂
就可以将细胞含量少的标本制成蜡块，不足之处是离心的细胞不能黏附在一起成细胞团块，需要吸管慢慢吸取组织转移到滤纸上包裹。
一个小村庄的故事教学设计
２．２．５ 试管包埋法 送检的标本离心弃上清，剪去距离沉淀０
．１～０．２ｍｍ试管的上段部分，试管底部剪一小口，将装有沉淀的试管用滤纸包裹放入包埋盒，常规脱水、包埋、切片即可
［１７］
。此种方法借助试管支撑，减少细胞团转移的次数，
减少细胞的浪费。２．３ 浸蜡法
主要用于细胞量少、无法成团的细胞，如液基细胞学标本。浸蜡法制作细胞蜡块制作步骤繁琐，但是制作时间短，对于细胞含量少的标本可以达到理想的效果。
２．３．１ 包埋模具浸蜡法 将液基细胞学标本离心后，弃上清，留取底部沉淀，用吸管转移所有的沉淀至提前预热的包埋模具，沿包埋盒边缘加入无水乙醇静置２０ｍｉｎ，使所有细胞沉淀至包埋盒底部，用吸管沿包埋盒边缘轻轻吸取无水乙醇，沿包埋盒边缘加入二甲苯静置２０ｍｉｎ，重复上面步骤，吸
取二甲苯，加入适量液态石蜡浸蜡３０ｍｉｎ，包埋即可［１８］
。操
作过程中加液和吸取液体的步骤尽量沿着包埋盒边缘进行，动作轻柔，避免细胞沉淀分散、漂浮。此种方法制作细胞蜡块时间短，对于细胞含量少的液基细胞标本可以达到理想的效果，不足之处是脱水、浸蜡过程都要手工操作，在包埋模具中滴加和吸取液体过程中动作都要轻柔，避免沉淀漂浮，否则细胞蜡块制作会失败。
２．３．２ 双埋法（试管浸蜡法） 送检的标本离心沉淀后弃上清，加入沉淀体积１０倍的１０％中性福尔马林吹打均匀悬浮固定１ｈ，３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ离心已固定标本，控干液体，加入１０ｍＬ无水乙醇混匀，３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，控干液体，加入１０ｍＬ二甲苯混匀，３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，控干液体，在试管中加入包埋液态石蜡，试管在７０℃水浴锅升温３０ｍｉｎ，趁热离心１２００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ，在－２０℃冰箱冷却至蜡块收缩与试管脱离，敲打取出，再预热成型细胞蜡块重新
包埋即可［１９］
。和包埋模具浸蜡法相比，此种方法脱水、透
明、浸蜡都在试管中操作，细胞不易漂浮，制作蜡块比较容易，但是浸蜡完毕，试管离心前的离心转子最好提前预热，以防离心过程中液态石蜡冷却。２．４ 添加填充剂法
主要用于细胞含量少、无蛋白支架的体液标本。２．４．１ 琼脂包埋法 送检的标本离心沉淀后弃上清，加入沉淀体积１
０倍的１０％中性福尔马林吹打均匀悬浮固定１ｈ，３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ离心已固定标本，加入２％融化的琼脂，混匀后３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取出凝固的细胞块，用滤
纸包裹后放入包埋盒，常规脱水、包埋、制片即可［
２０－２１］
后援消防车
。填充剂法琼脂粉廉价安全，制作简单，不足之处是琼脂融化液需要加热，且琼脂脱水过程中的通透性差，不利于细胞块脱水。
２．４．２ 蛋清包埋法 制备８％蛋清液：取蛋清１ｍＬ，加生理盐水１
２．５ｍＬ制备成８％蛋清液，现配现用。送检的标本离心沉淀后，弃上清，将液体量比较少的标本全部离心，在沉淀中加入２ｍＬ８％蛋清液混匀，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃上清，沿
管壁缓慢加入１０％中性福尔马林固定３０ｍｉｎ，轻轻敲出细胞团块，用滤纸包裹后放入包埋盒，常规脱水、包埋、
制片即可［２２］
。细胞含量多的标本也可以用１％蛋清液，其缺
点是成型慢，耗时长。此种方法制作细胞蜡块，蛋清容易获得，通透性强，但蛋白性质稳定性差，且比普通离心沉淀制作步骤繁琐。
２．４．３ 血浆凝固酶包埋法 收集的标本离心沉淀后弃上清，在试管底部沉淀中加入适量的血浆凝固酶混匀，３０００ｒ／ｍｉｎ，离心１０ｍｉｎ，细胞块聚集成团，加入１０％中性福尔马林固定１ｈ
，取出细胞团块，用滤纸包裹放入包埋盒，常规脱水、包埋、切片即可［
２３－２４］
。此种方法制作细胞蜡块，血浆凝固酶可以形成支架，将细胞网罗其中，但血浆凝固酶不易获得，成本较高，对细胞含量少的标本制作细胞蜡块效果不佳。２．４．４ 组织胶（ＯＣＴ／胶水）包埋法 送检的标本离心沉淀后弃上清，加入１０ｍＬ的１０％中性福尔马林吹打均匀悬浮固定３
０ｍｉｎ，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，将包埋胶加入试管，挤压试管使液体胶包裹细胞团块，敲出液体胶包裹的细胞团块
用滤纸包裹，放入包埋盒，常规脱水、包埋、制片即可［２５］
。此
种方法容易使细胞聚集成团，但是制作过程繁琐，并且加胶水的过程中容易把细胞打散，操作过程要轻柔。
２．４．５ 脱脂棉包埋法 收集的标本离心沉淀后弃上清，然后用适量的医用脱脂棉吸附沉淀物，如果沉淀物较多，可以用脱脂棉吸附沉淀的细胞白膜层，然后用剪刀剪去细胞周围多余的脱脂棉，用滤纸包裹脱脂棉，常规脱水、包埋、切片即
可［２６］。此种方法对于细胞含量少的标本可以达到理想效
果，但是制作过程中需要一定的技巧，关键是做好脱脂棉的质量和预处理。
２．４．６ 医用明胶海绵包埋法 收集的标本离心弃上清，医用海绵胶剪成５ｍｍ×５ｍｍ×５ｍｍ的小块，用镊子夹取一小块反复擦拭离心沉淀物，将含有细胞的明胶海绵用滤纸包
裹，常规脱水、包埋、制片即可［２７］
。此种方法医用明胶海绵
多孔通透性强，可以把细胞网罗其中，但是明胶海绵不易收集，价格昂贵，明胶海绵脱水后有一定硬度，使后期制片有一定困难。
２．５ 商品化细胞蜡块制备试剂盒
商品化试剂盒的特点是操作简单，比较少的细胞量也可
·
０６２１·丁会珍，等 细胞蜡块制备方法的应用进展
以达到理想效果，但是商品化的试剂盒成本较高，不易在基层医院广泛推广。
２．５．１ 商品化试剂－碧迪公司液基细胞样本分离液 主要用于液基细胞学标本。将液基细胞学的标本全部倒入１０ｍＬ离心管中离心２０００ｒ／ｍｉｎ，离心３ｍｉｎ，用吸管吸去上清，加入碧迪公司液基细胞样本分离液（ＢＤ）震荡混匀，３０００ｒ／ｍｉｎ，离心１０ｍｉｎ，弃上清，
如果沉淀较少，可以在试管中加入无水乙醇５ｍＬ，静置５ｍｉｎ，试管底部的沉淀聚集成口香糖样的细胞团块，轻轻取出用滤纸包裹放入包埋盒，常规脱水、包埋、切片即可［２８］。
２．５．２ 商品化细胞块制备管 将液基细胞学保存瓶的标本全部倒入细胞块制备管，２０００ｒ／ｍｉｎ，离心１０ｍｉｎ，形成固液分离状态，弃上清，加入４％中性福尔马林２０ｍＬ２０００ｒ／ｍｉｎ，离心１０ｍｉｎ，静置离心管标本过夜，充分固定，并使所有细胞沉淀到离心管下端的小直管中，弃去固定液，吸干离心管残余液体，水平状态下打开离心管底部小直管封盖，用气囊球自离心管口吹出细胞团块，用滤纸包裹放入包埋盒，常规脱水、包埋、制片即可［２９］。
３ 讨论
细胞蜡块技术在细胞病理学中越来越重要，细胞蜡块中细胞形态清晰，细胞集中，一定程度上保留了组织学的形态特点，并能应用于特殊染、免疫组织化学检测、分子原位杂交方法和原位ＰＣＲ，从而大大提高细胞病理学诊断的敏感性和特异性，特别是对寻原发灶及某些特异性肿瘤的分型更有帮助［３０－３１］。细胞蜡块的制作方法参差不齐，很少有文献对细胞蜡块的制备方法做系统的介绍，本文从玻片法、离心沉淀法、浸蜡法、添加填充剂法、商品化细胞蜡块制备试剂盒五大方面做了比较，每一种制作方法都有其特点，最终目的是把患者送检的标本最大利用化，使失去手术机会的患者得到精准诊断的同时进行免疫组化或基因测序检查，指导临床用药，如恶性肿瘤晚期的患者失去手
术机会，浆膜腔积液制作的细胞蜡块可以达到类似组织学的特点，使患者能够进一步接受放化疗或者靶向［３２］；如妇科患者液基细胞学制作的蜡块结合免疫组化、ＨＰＶ检测可提高患者诊断的准确率，使传统细胞学涂片意义不明确的诊断可以进一步明确，在一定程度上缓解患者做宫颈活检手术的经济负担和精神压力［３３］。
４ 结语
随着现代医学的快速发展，免疫组化、分子病理为许多恶性肿瘤提供准确的靶点，许多恶性肿瘤会伴有浆膜腔积液的表现，但是传统的细胞学涂片不能提供充足的诊断依据和分子靶点。细胞蜡块有核细胞含量丰富，类似组织蜡块的特点［３４］，可以解决传统细胞涂片的不足，细胞蜡块可以长久保存和连续切片的特点，使患者在无创或者微创的条件下，达到最好的效果。
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ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｉｘｆｉｘｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎｓｏｎｆｒｏ
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ｔｉｏｎｕｓｉｎｇ１０％ｎｅｕｔｒａｌｂｕｆｆｅｒｆｏｒｍａｌｉｎａｎｄ９６％ａｌｃｏｈｏｌｆｉｘａｔｉｏｎ
ｉｎＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎａｎｄＫｉ－６７ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ
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现代肿瘤医学 ２０２１年０４月 第２９卷第０７期 ＭＯＤＥＲＮＯＮＣＯＬＯＧＹ，Ａｐｒ ２０２１，ＶＯＬ ２９，Ｎｏ ０７
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（编校：张黛妮）
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２６２１·丁会珍，等 细胞蜡块制备方法的应用进展
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