DOI ：10.11655/zgywylc2018.05.077
基金项目：山西省卫生厅课题（201302004）作者单位：044000山西省运城市中心医院病理科
·病理诊断·
P16免疫细胞化学联合高危型HPV 检测在ASCUS 患者分流中作用的研究 栾中华
本研究基于采用免疫细胞化学的方法，检测宫颈液基薄层细胞检测（TCT ）标本中P16蛋白表达情况，以宫颈活检结果作为参考标准，结合人类乳头瘤病毒（HPV ）检测结果，评价该检测方法在宫颈上皮内瘤变的诊断和宫颈癌筛查中的可靠性及临床应用的可行性。1资料与方法 1.1临床资料收集2014年6月至2015年12月，运城市中心医院病
理科的宫颈TCT 检查标本3560例，其中诊断未明确意义的非典型鳞状细胞（ASCUS ）98例，所有ASCUS 患者均经两位高年资主治医师复审，剔除临床资料不完整、剩余标本不符合作进一步检查要求的患者共计45例。对这些ASCUS 患者均进行了HPV 检测，并对患者剩余的标本重新制片，进行P16蛋白的免疫组织化学染， 所有ASCUS 患者均有阴道镜检查及活检结果。以子宫颈活体组织病理检查结果为金标准。患者年龄25~61岁，2周内未行宫颈涂片检查，无子宫切除病史。
1.2方法1.
2.1P16蛋白的免疫细胞化学染主要试剂：即用型鼠抗胡兰贵
人P16单克隆抗体、SP 超敏试剂盒及DAB 酶底物显剂等均购自福州迈新生物技术开发有限公司。利用TCT 剩余细胞学标本进行新柏氏液基细胞制片后，95%乙醇固定，自然晾干备用。免疫组织化学采用SP 法，操作均按SP 试剂说明书进行。结果判定P16阳性染为在细胞质内出现棕黄颗粒；免疫组织化学判定方法，低倍和高倍镜观察全片，对阳性细胞数染强度进行评分，染强度评分分为：0分为基本不着；1分为着弱；2分为着中等；3分为着强。以0~1分为阴性，2~3分为阳性。
1.2.2阴道镜下活检术：采用阴道镜下观察后再进行活检，由高级职称医师操作。用干棉签擦去宫颈表面分泌物，用3%醋酸和1%复方碘溶液涂抹子宫颈，对可疑部位活检。标本均用10%中性甲醛固定并送至病理科制片。组织学结果阳性包括宫颈上皮内瘤变（CIN2）、CIN3、宫颈原位癌（CIS ）、鳞状细胞癌（SCC ）；组织学结果阴性包括CIN1、湿疣样变、宫颈慢性炎、宫颈息肉等。
1.2.3
Cervista 高危型HPV 检测：
应用酶切信号放大法检测14种高危型HPV ，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68型。其试剂含有3组寡核苷酸混合物：A5/A6组（检测51、56、66型），A7组（检测18、39、45、59、58型），A9组（检测16、31、33、35、52、58型），同时使用人2型组蛋白基因结合的寡核苷酸作为内部质控。高危型HPV 检测的试剂均北京英硕力公司提供，DNA 提取及Cervista 检测参照试剂盒说明书进行。
1.2.4TBS 分类系统：
分类的ASCUS 是指未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞，是针对细胞核增大，核面积比正常中层细胞核大2.5~3倍，核质比增加，轮廓光滑、规则，可见双核细胞细胞，核轻度深染，染质分布均匀，少见不规则的核轮廓。
1.3统计学处理采用SPSS 13.0统计分析软件进行数据分析，率的比较
采用χ2检验。以P <0.05为差异有统计学意义。
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2结
果
本研究组的45例患者其中活检检查阳性患者19例，阴性患者26例；HPV 阳性患者30例，HPV 阴性患者15例；P16阳性患者21例，P16阴性患者24例。
所有ASCUS 的患者中P16、HPV 及活检阳性率分别为
46.67%、64.44%及42.22%。P16检查的敏感性为94.74%，特异性为88.46%；HPV 检查的敏感性特异性为94.74%，特异性为57.69%，联合P16及HPV 的敏感性为100%，特异性为
57.69%。
P16表达与活检结果之间、P16表达与HPV 结果之间、
HPV 表达与活检结果之间进行χ2检验，差异有统计学意义（P <0.05）
，而P16联合HPV 检查结果与活检结果之间差异有统计学意义（P <0.01）。3讨
论
宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，近年来国内外报道宫颈癌的发病呈现年轻化倾向，35岁以下女性患者的宫颈癌病例出现上升趋势，早期发现宫颈上皮内病变患者进行及时对宫颈癌的预防具有极为重要的意义。大部分人感染HPV 为一过性的，
只有很小一部分是持续感染并且在对细胞DNA 产生转化作用后才会导致癌症的发生。单纯应用HPV 检查作为筛检方法会造成大量的假阳性患者。而对于细胞学
和HPV 均阳性的妇女进行阴道镜检查也会造成一定程度的
假阳性，而且临床上阴道镜检查数量不足，而且是有创检查，
因此不能广泛使用［1］。P16是一种肿瘤抑制基因，是Rb信号
通路重要成员，并接受Rb的负反馈抑制，它参与细胞周期的
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调控，控制细胞的生长和分化，直接参与肿瘤的形成与进展。
一过性的HPV感染不会影响细胞周期调控，细胞P16蛋白
在HPV感染发生转化后HPV E7蛋白将Rb灭活，所以HPV
持续性感染后的细胞会导致P16过度表达，因此P16蛋白可
以作为宫颈癌前病变的HPV型别独立的生物标志物［2~4］，而
且P16免疫组织化学检测方法已经广泛应用于宫颈癌早期
病变组织病理检查的鉴别诊断中。
目前有部分研究开始应用P16的免疫细胞化学的方法
来进行辅助检查，Carozzi等［5］基于HPV筛查的大宗实验研
究表明对于HPV阳性的女性患者，P16阳性者在阴道镜检查
中需要足够高的重视，高级别及以上的病变可能性高，而对
于P16阴性患者，患癌风险系数低，可以在2年内不需要进
一步的重复检查。Petry等［6］研究表明P16/Ki⁃67双染的方法
能够辅助检测癌前病变，但是目前缺乏大宗的临床试验数据支
持。本研究结果表明，对于ASCUS患者，单纯HPV阳性与活
检结果之间差异有统计学意义，但显示弱相关性，而P16或
联合P16及HPV结果与活检结果之间有强相关性，因此对
硅链
于P16阳性或联合P16及HPV阳性提示存在宫颈上皮内病
变甚至是宫颈癌的可能，因此对于双阳性的患者强烈建议进
一步的活检来除外高级别上皮内病变及以上的病变，而对于ASCUS患者P16阴性或P16及HPV结果均为阴性其活检结果呈高级别上皮内病变以上的概率极低，因此随诊可以作为
后续的诊疗方法。对于免疫细胞化学试剂的选择上，有研究
者采用P16/Ki67双染方法来进行宫颈癌筛查，结果表明检
测对于CIN2以上的病例，双重染有相似的83.4%灵敏度，
并有58.9%特异性［7］。Yu等［8］使用在液基细胞学结合制备细
胞块的技术并进行P16和Ki67双染来提高细胞学的诊断水
平也是一种方法，但是Ki67作为宫颈病变辅助诊断中的位
置特异性抗体在细胞免疫化学中的作用有限，而且本研究使
用液基细胞薄片作为免疫化学的载体，可以大大减少制作细
胞蜡块或者活检进行免疫组织化学染的时间，能在最短的
时间内完成诊断，可以提高时效性。目前有通过进行E6/E7
的基因检测来预测患者的HPV是否是持续性感染及是否发
生转化的方法，其中的意义有待进一步研究。而且由于设备
的昂贵，不能广泛的应用，免疫细胞化学的方法简单易行，在基层医院就可以开展，有广泛的应用价值。
但是研究中我们同时发现，存在P16阳性的细胞，并不
如何当好一把手单一发生在已出现形态学异常的上皮细胞中，一些形态学正
常的上皮细胞也可以出现染，这一发现提示我们，细胞在
发生形态学异常之前或许已发生了分子水平异常，这也是P16免疫组织化学会有较高灵敏度的合理解释。本研究显示对于HPV阳性的患者中进行P16染可以大大提高敏感
性，有利于ASCUS患者的分流，减少不必要的活检等有创性
检查，为患者提供更经济、有效的。
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（收稿日期：2017⁃11⁃23）
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