钻石进攻
论著
文章编号1006－8147（2019）06-0657-02
基金项目天津市高等学校科技发展基金（20050108），天津市教委科研计划项目（自然科学）（2016YD14）
作者简介刘芳（1984-），女，助理实验师，硕士，研究方向：病理学；通信作者：孙保存，
E-mail ：********************。试剂盒法制备细胞块的效果及其技术要点 刘芳1，刘增辉1，张丹芳1，车娜1，高玉彤1，林贤1，孙保存1，2
（1．天津医科大学基础医学院病理学教研室，天津300070；2.天津医科大学肿瘤医院病理科，天津300060）
摘要目的：探讨应用细胞块制备试剂盒制备细胞块效果以及制块过程中的技术要点。方法：应用细胞块制备试剂盒法制备细胞块，
常规包埋制片后进行HE 染及免疫组化染，观察其效果。结果：细胞块制备试剂盒制成的细胞块不
散，可对微量标本进行处理，具备组织学优点；满足标本连续切片，并可永久保存标本；能满足免疫组化检测需要。结论：细胞块制备试剂盒法操作简单，技术难点不多，质量容易控制，便于基层医院推广。关键词细胞块；微标本；免疫组化染中图分类号R36 文献标志码Ae网打尽
由于临床送检的胸腹水、细针穿刺组织、宫颈脱落细胞、尿液、痰液、子宫内膜刷取物、肺泡灌洗液等标本的局限性，以往都制成涂片。因其存在标本利用率低而造成的检出率低、涂片中细胞重叠等缺点，严重限制了涂片诊断准确率，同时临床对病理诊断的要求不断提高，由此推动了细胞块技术在病理诊断中的应用及发展。目前细胞块制作方法主要有直接离心法、琼脂包埋法、蛋清包埋法和血浆凝血酶法。其中直接离心法对标本量的要求较大，不适合送检量小的标本如妇科宫腔的刷取标本、细胞量比较小的胸腹水等。蛋清包埋法由于蛋清在HE 染时着形成红背景，干扰镜下观察。原有琼脂包埋法有操作复杂等缺点。细胞块制备试剂盒是基于琼脂包埋法的试剂盒，解决了操作复杂等问题。本文对试剂盒法制备的蜡块进行检测，并探讨制备过程的技术要点及其解决方法。1材料与方法
1.1材料标本来源：天津医科大学总医院病理科接收临床送检的胸腹水、子宫内膜、宫颈脱落细胞、细针穿刺组织等微小标本。
抗体：一抗ER 为即用型，购自福州迈新生物技术开发有限公司，货号：kit-0012。二抗为鼠兔通用型，
加特纳菌购自北京中杉金桥生物技术有限公司，货号：PV-6000。试剂盒：细胞块制备试剂盒，购自北京赛普九州科技发展有限公司。设备：高速离心机、加热式离心机。1.2方法
1.2.1细胞块制备临床送检的标本进行离心富集：3000r/min，离心5min ，将上清液转移至原储存
盒内，沉淀转移至包埋盒中，将预热后成液态的凝
胶加入包埋盒，将包埋盒放置于加热式离心机吊篮中，40℃、2000r/min 离心3min ，离心结束后，于室温冷却待胶体变为固体状态，至此细胞块制备完成。1.2.2蜡块制备制成的细胞块按照常规组织制备蜡块的条件进行固定、脱水、包埋，然后制片，随后进行HE 染及免疫组化染。
1.2.3HE 染及免疫组化染HE 染方法：石bp机
蜡切片常规脱蜡水化后用苏木素染细胞核，
伊红染细胞浆，然后脱水、透明，中性树胶封片。免疫组化染采用SP 法，石蜡切片常规脱蜡水化，3％H 202室温封闭10min ，枸橼酸微波热修复，血清封闭后滴加一抗4℃过夜，次日恢复室温，滴加二抗，DAB 显
，苏木素复染细胞核，脱水、透明、封片。2结果
经过上述过程制作而成的细胞块是果冻样的圆柱胶体，若为妇科送检的子宫内膜等标本，肉眼可见胶体内微小组织。细胞块经处理后制备蜡块如图1A 所示，细胞块与蜡融合良好，两者之间未见裂隙，切片时完整连续如图1B 所示。
细胞块蜡块制成切片后进行常规HE 染，效果如图2A 所示，可见组织形态正常，红蓝对比明显，背景清晰。免疫组织化学染后，可见组织ER 阳性，定位准确，背景清晰，如图2B 所示
。
A ：细胞块脱水包埋后制成的蜡块
B ：制片时切片完整连续
图1制备的细胞块蜡块及其制片时的效果
天津医科大学学报北京社会函授大学
Journal of Tianjin Medical University
第25卷6期2019年11月
Vol．25,No．6Nov.2019
异物志657
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