江西医学检验２００６年２月第２４卷第１期
・论著・
胸腹水肿瘤细胞免疫化学诊断标本制备方法主要有石蜡包埋制片、传统脱落细胞和液基细胞涂片法［１～３］。由于石蜡包埋制片所需时间长、操作复杂、在制片过程中易人为损伤造成抗原丢失，不易普及。液基细胞涂片法虽易于收集细胞，诊断率较高，但仪器昂贵，在多数医院仍未能普及。本研究主要 对胸腹水标本、制片材料进行前期特殊处理后，克服了以上因素，采用免疫细胞化学诊断（ＩＣＣ），对比细胞学涂片与石蜡包埋制片结果，现报道如下。 材料与方法
１材料１０３例胸水或腹水标本来自本院２００３年１月～２００５年５月期间的住院患者，其中胸水５４
例、腹水４９例，病例经活检、临床资料证实为转移腺癌９５例，恶性间皮瘤８例。
２标本和材料处理及制片收集新鲜胸水或腹水１００～２００ｍｌ，分别取底部标本５０ｍｌ倒入两个离心
管，２０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，吸出上清液。一份沉淀物
胸腹水细胞学与组织学制片的免疫细胞化学诊断对比研究
黄卫彤覃志坚潘兴寿周喜汉常正义卢运龙黄永秩中图分类号Ｒ４４６．８，Ｒ３３１．５＋５
文献标识码Ａ
文章编号１００８－００２３（２００６）０１－００１７－０３
基金项目：广西百市科学研究与技术开发计划项目基金资助（２００４０５）
作者单位：５３３０００广西，右江民族医学院附属医院检验科、内科、病理科。
作者简介：黄卫彤，女，１９６６年生，大学本科，主管技师，主要从事临床检验和实验诊断学工作，研究方向：临床细胞学。
［摘要］目的探讨脱落细胞学与组织病理学制片在胸腹水恶性细胞诊断中的敏感性。方法１０３
例患者胸腹水标本经特殊处理后，分别做细胞学涂片和石蜡包埋制片，并采用免疫细胞化学（ＩＣＣ）方法，用肿瘤相关糖蛋白７２和癌胚抗原组合、神经特异性钙结合蛋白和血栓素组合进行诊断，
比较其阳性检出率。结果石蜡包埋制片肿瘤相关糖蛋白７２和癌胚抗原组合、神经特异性钙结合蛋白和血栓素组合分别诊断转移腺癌阳性率９７．９％、恶性间皮瘤阳性率１００％；应用相应抗体组合，细胞学涂片的阳性率分别为９５．８％，１００％。两者阳性率比较无显著性差异（ｘ２＝０．１７，Ｐ＞０．０５）。结论通过对胸、腹水标本和材料的前期有效处理后，细胞学涂片的免疫细胞化学诊断转移性腺癌、恶性间皮瘤的敏感性与组织学方法具有较高的一致性。
［关键词］胸腹水；细胞学诊断；免疫组织化学
Ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇｓｔｕｄｙｏｆｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｂｅｔｗｅｅｎｃｙｔｏｌｏｇｙａｎｄ
ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｏｆｐｌｅｕｒａｌａｎｄｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｅｆｆｕｓｉｏｎＨＵＡＮＧＷｅｉｔｏｎｇ，ＱＩＮＺｈｉｊｉａｎ，ＰＡＮＸｉｎｇｓｈｏｕ，ｅｔａｌ．ＧｕａｎｇｘｉＹｏｕｊｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｆｏｒＮａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｂａｉｓｅ５３３０００，Ｃｈｉｎａ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔ
ｕｄｙｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｂｅｔｗｅｅｎｅｘｆｏｌｉａｔｉｖ
ｅｃｙｔｏｌｏｇｙａｎｄｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｏｆｐｌｅｕｒａｌａｎｄｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｅｆｆｕｓｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１０３ｓａｍｐｌ
ｅｓｏｆｐｌｅｕｒａｌａｎｄｐｅｒｉ－ｔｏｎｅａｌｅｆｆｕｓｉｏｎｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｐａｒａｆｆｉｎｉｍｂｅｄｄｉｎｇａｎｄｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｍｅａｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍａｌｉｇ－ｎａｎｔｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｏｆｃａｎｃｅｒｒｅｌａｔｅｄｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ７２ａｎｄＣＥＡ，ｎｅｒｖｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｃａｌｃｉｕｍｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｒｏｍｂｏｘａｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｐａｒａｆｆｉｎｉｍｂｅｄｄｉｎｇｗａｓ９７．９％ｗｉｔｈｃａｎｃｅｒｒｅｌａｔｅｄｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ７２ａｎｄＣＥＡ，ａｎｄｗｉｔｈ１００％ｏｆｎｅｒｖｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｃａｌｃｉｕｍｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｒｏｍｂｏｘａｎ．Ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｉｏｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｍｅａｒｗｅｒｅ９５．８％ａｎｄ１００％ｗｉｔｈｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏ－ｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｂｏｖｅ．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓ（ｘ２＝０．１７，Ｐ＞０．
０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＴｈｅｄｉ
ａｇｎｏｓｔｉｃｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｍｅａｒｃｏｍｂｉｎｅｄｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｔｈｒｏｕｇｈｈａｎｄｌｉｎｇｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｐｌｅｕｒａｌａｎｄｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｅｆｆｕｓｉｏｎｓ，ｉｓｏｆｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｔｈａｔｏｆ
ｐａｒａｆｆｉｎｉｍｂｅｄｄｉｎｇ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］
Ｐｌｅｕｒａｌａｎｄｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｅｆｆｕｓｉｏｎｓ；Ｃｙｔｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ；Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
１７・・
供石蜡包埋切片制片做免疫细胞化学；另一份加入２％冰醋酸４５ｍｌ，充分混匀，使血细胞、黏液完全溶解，２０００ｒ／ｍｉｎ再离心１０ｍｉｎ，吸出上清液，将沉淀物涂片４张，剩余的沉淀物，加入自配的细胞保存液１０ｍｌ，保留以备复查。涂片潮干以丙酮固定１０～１５ｍｉｎ，取出后用蒸馏水洗３次，每次１ｍｉｎ，取２张涂片在低倍镜下以湿片观察，选择细胞重叠少、比较集中
的区域，用免疫组化标记笔划出４～６个待染区，供作免疫细胞化学鉴别诊断。另外２张做ＨＥ染后，封片做细胞学镜检。涂片使用的载玻片先用清洁液浸泡１２～２４ｈ，经自来水冲洗后再用蒸馏水清洗数次，再浸入９５％酒精２ｈ，取出后烘干，涂抹上多聚赖氨酸溶液，待干后备用。
３用福州迈新技术开发公司的鼠抗人肿瘤相关糖蛋白７２、癌胚抗原、神经特异性钙结合蛋白、血栓素单克隆抗体（ＳＰ试剂盒），阳性对照用肺腺癌、间皮瘤组织学标本，阴性对照以０．０１ｍｏｌ磷酸盐缓冲液代替一抗。操作步骤按试剂盒说明书严格进行。
４统计学方法采用ｘ２检验。
５ＩＣＣ结果判断肿瘤相关糖蛋白７２、癌胚抗原、血栓素阳性反应形式为细胞质或胞膜呈棕黄，神经特异性钙结合蛋白阳性反应形式为细胞质或细胞核呈棕黄。阴性为细胞无着或着率＜５％，细胞着率１０～２５％者为弱阳性、细胞清晰着率２６～５０％者为阳性、细胞着率＞５０％者为强阳性。
结果
１两种制片免疫细胞化学诊断阳性结果见表１～２。
２石蜡包埋制片肿瘤相关糖蛋白７２和癌胚抗原组合、神经特异性钙结组化合蛋白和血栓素组合分别
诊断转移腺癌、恶性间皮瘤阳性率为９８．１％（９３＋８＝１０１／１０３）；细胞学涂片肿瘤相关糖蛋白７２、癌胚抗组合、神经特异性钙结合蛋白和血栓素组合分别诊断转移腺癌和恶性间皮瘤阳性率为９６．１％（９１＋８＝９９／１０３）。两者比较无显著性差异（ｘ２＝０．１７，Ｐ＞０．０５）。细胞学涂片中肿瘤相关糖蛋白７２、癌胚抗原单独诊断阳性率与两者抗体组合诊断阳性率比较均有显著差异性（ｘ２＝６．７，Ｐ＜０．０１，ｘ２＝９．７，Ｐ＜０．０１）。由于恶性间皮瘤例数少，不能进行统计学分析，但是神经特异性钙结合蛋白、血栓素组合诊断后，结合细胞学形态特点，８例恶性间皮瘤最终也得到明确诊断。
讨论
１免疫细胞化学结果产生误差的一个主要原因是细胞学标本制备方法不同。直接常规涂片由于背景有较多的血细胞、积液中蛋白含量高，往往出现背景着过度，而且蛋白质聚集在细胞周围，易阻止细胞的免疫性反应，易产生误诊或漏诊。另外，通常所见的大细胞团，免疫试剂可能容易被包裹在其中，引起假阳性反应。颜亚晖等研究证实［４］，通过对已涂片中的血细胞处理后，可提高阳性率，但未与其它方法作比较。本组实验显示，在处理血性胸腹水时，首先使用２％冰醋酸溶液，可将红细胞与黏液溶解消除，既可有效保留充足的、能提供诊断的细胞，而且也保留了足够的肿瘤细胞抗原。在经过标记好的区域进行实验，结果显示染过程细胞无脱片现象，细胞抗原暴露充分，细胞标记良好、细胞形态完整、结构清晰，阳性细胞膜或细胞质棕黄鲜明，背景清晰，易于结果判断，可避免
产生误差。
２抗体组合应用由于间皮源性细胞和转移性腺癌细胞在做免疫细胞化学时常存在交叉反应，仅用一种抗体做鉴别诊断易产生误差。本研究显示应用抗体组合诊断，阳性率明显高于单一抗体应用，这与苏学英的报道［１］是一致的。
３通过对标本和材料的前期处理后，再进行细胞学涂片，应用抗体组合做免疫细胞化学诊断，其阳性结果与石蜡包埋切片免疫细胞化学诊断比较，两者无显著性差异（ｘ２＝０．１７，Ｐ＞０．０５），说明该标本制备方法，与石蜡包埋切片方法做免疫细胞化学诊断有较高的一致性，对辅助病理细胞学诊断有较大的应用价值，而且，实验试剂容易配制、操作简便、易于推广应用。
参考文献
［１］苏学英，李甘地，刘华兵，等．联合检测Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ及ＣＥＡ、Ｃａｌｒｅｔｉｎｉｎ在浆膜腔积液细胞学鉴别诊断中的意义［Ｊ］．癌症，２００４，２３（１０）：１１８５～１１８９．
瑞利分布
［２］ＦｅｓｔｃｈＰＡ，ＡｂａｔｉＡ．Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｉｎｅｆｆｕｓｉｏｎｃｙｔｏｌｏｇｙ：ａｃｏｎ－ｔｅｍｐｏｒａｒｙｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ，２００１，９３：２９３．
［３］李香菊．免疫细胞化学在辅助浆膜腔积液细胞病理学诊断中的应用［Ｊ］．诊断病理学杂志，２００３，１０（１）：４５～４８．（下转第３８页）
表１两种制片做免疫细胞化学对９５例转移腺癌细胞诊断阳性结果
名称细胞学涂片
例数（％）
石蜡包埋切片
例数（％）
肿瘤相关糖蛋白７２
癌胚抗原
肿瘤相关糖蛋白７２、癌胚抗原结果７９（８３．２％）
７６（８０％）
９１（９５．８％）
８２（８６．３％）
７６（８０％）
９３（９７．９％）
表２两种制片做免疫细胞化学对８例恶性间皮瘤诊断阳性结果
名称细胞学涂片
例数（％）
石蜡包埋切片
例数（％）
神经特异性钙结合蛋白
血栓素
神经特异性钙结合蛋白、血栓素组合７（８７．５％）
７（８７．５％）
８（１００％）
８（１００％）
７（８７．５％）
８（１００％）
（上接第１８页）
［４］颜亚晖，郑晖，张革进．血性胸腹水涂片中红细胞的去除方法［Ｊ］．临床与实验病理杂志，２００４，２０（６）：７５０．
常用抗菌药物进行药敏试验表明对多种抗菌药物耐药，对亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦的耐药率分别为５５．６％、４４．４％、４２．６％，呈现出较高的耐药率和多重耐药性，结果见表２。
３讨论保护蔬菜
本次调查中有８例是污染的，标本污染的病区主要在肝移植病房和ＩＣＵ，由于鲍曼不动杆菌在医务人员手部，病人使用的枕头、床垫、桌子、病边围栏、门把手等无处不在，以及广谱抗生素的使用和各种侵入性的诊疗都是污染的因素，因此血培养结果很难确定其临床意义，必须综合临床与实验室资料才能确定是菌白菌症的致病菌，还是污染菌。
调查发现鲍曼不动杆菌的菌血症主要是以肝移植病房为主占６１％（１４／２３），其次为ＩＣＵ占２６．１％（６／２３）。上述病区的患者都是危重疾病，特别是肝移植病房是肝癌、肝硬化晚期等的移植病人。创伤性大，身体抵抗力低，免疫抑制剂的应用，广谱抗生素的应用，且常进行气管切开和插管，动、静脉留置管以及使用机械通气等，而这些都是感染的好发因素［４，５］。一些学者研究发现呼吸道成为菌血症的主要来源［６］，另外一些却强调与各种导管的使用有着密切的联系［７］。在我们的调查中发现菌血症的病人都使用过各种导管或呼吸机等，但不能明确是由哪一因素引起的。
药敏结果显示鲍曼不动杆菌呈现出较高耐药性，对哌拉西林／他唑巴坦的耐药率高于头孢哌酮／舒巴坦，这可能是多重耐药菌株都产β－内酰胺酶，但其所产的β－内酰胺酶活性多能被舒巴坦抑制，而较少被克拉维酸和他唑巴坦抑制。鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率不断上升，耐药率已经超过５０％比吴劲松等［８］报道的１６．９３％远远高出，这可能与该菌灭活酶（碳青酶烯水解酶）的产生和地区差异有关。正是由于较高的耐药率、多重耐药菌株的产生导致了鲍曼不动杆菌菌血症比较困
难，死亡率高，国外曾有报道死亡率为５２％［６］。我们调查结果比国外低，鲍曼不动杆菌菌血症死亡率为３０．４％。
我们必须积极原发病，缩短住院时间，严格执行消毒隔离措施，防止出现交叉感染，避免不必要的侵入性操作，合理使用广谱抗生素尤其是严格掌握碳青霉烯类的适应症，减少抗生素选择的压力，预防和减少高耐药率的鲍曼不动杆菌的产生。
参考文献
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［７］ＳｉａｕＨ，ＹｕｅｎＫＹ，ＨｏＰＬ，ｅｔａｌ．ＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｃｔｅｒｅｍｉａｉｎＨｏｎｇＫｏｎｇ：ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄｙａｎｄｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ１９９９，２８：２６～３０．
［８］吴劲松，卢月梅，吴伟元，等．鲍曼不动杆菌的感染分布及耐药性分析［Ｊ］．中国感染控制杂志，２００４，３（３）：２４７～２４９．
表１鲍曼不动杆菌分布情况
病房菌株数
治愈情况
治愈未愈死亡污染
肝移植病房
ＩＣＵ
消化内科病房泌尿外科
足球经理97急诊病房
合计
１９（６１．３％）
９（２９．０％）
１（３．２％）
１（３．２％）
１（３．２％）
３１
９
４
１
１
１５
１
１
４
２
１
７
５
３
８表２５４株鲍曼不动杆菌药敏结果
抗生素名耐药株％中敏株％敏感株％
头孢哌酮／舒巴坦哌拉西林／他唑巴坦
亚胺培南
左氧氟沙星
环丙沙星
头孢他啶
头孢曲松
妥布霉素
头孢吡肟
庆大霉素
复方新诺明
象征图形
阿米卡星
氨曲南
头孢替坦
氨苄西林
头孢唑林２３
２４
３０
３０
bbc中国人来了
３０
３０
３４
３６
３８
３８
４１
４２
４２
４３
４５
５２
４２．６
４４．４
５５．６
５５．６
５５．６
５５．６
６３．０
６６．７
７０．４
７０．４
７５．９
７７．８
７７．８
７９．６
８３．３
９６．３
９
８
０
０
０
８
９
３
２
０
０
０
２
４
７
０
１６．７
１４．８
０
０
０
１４．８
１６．７
５．６
３．７
０
０
０
３．７
７．４
１３．０
０
２２
２２
２４
２４
２４
１６
１１
１５
１４
１６
１３
１２
１０
７
２
２
４０．７
谷物大脑４０．７
４４．４
４４．４
４４．４
２９．６
２０．３
２７．８
２５．９
２９．６
２４．１
２２．２
１８．５
１３．０
３．７
３．７
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