赵世巧陈忠余* 梁华郭广波孙伟（重庆市中医院检验科，400021）摘要：目的对五个不同厂家血清胱抑素C(CysC)检测系统的分析性能进行评价和验证。方法采用美国雅培C16000全自动生化分析仪与五个不同厂家胱抑素C试剂组成的检测系统测定血清胱抑素C，评价的方法学性能指标为精密度、线性、抗干扰性及偏倚。结果CysC浓度在0.9～7.1mg/L时，各厂家试剂总不精密度（CV）＜6%。在0.6～5.6mg/L浓度范围，各厂家均有良好的线性范围。血清中一定浓度的胆红素、血红蛋白和乳糜物对五个厂家的CysC的测定结果产生不同程度的影响，但与厂家声明相符。除利德曼外各厂家的偏倚均<15%。结论五个厂家CysC 试剂的主要分析性能：精密度、线性、抗干扰性、偏倚的验证结果与厂家声明基本一致，但利德曼试剂测定结果与Randox质控品存在偏差。 【关键词】胱抑素C；分析性能；评价
Methodology p erformance evaluation on five kind s of Cysteine proteinase inhib itors C reagent kits.(ZHAO Shi-Qiao,CHEN Zhong-Y u,LIANG H ua,Department of clini cal laboratory, Hospital of traditi onal chinese medi cine of Chongqing,China,400021)
Objective To eval uate and veri fy the analyti c performance on five kinds of Cysteine proteinase inhibitors C(Cys C) reagent kits. M ethod s Cys C was detected by Abbott C16000 automati c biochemi
缺氧诱导因子
话剧鹿鼎记cal anal yzer and f ive kinds of Cys C reagent,The preci sion,lineari ty,interference and bias of five testi ng systems were analyzed. Results The total CV of the samples that contain 0.9～7.1mg/L were all less than 6%.Within the range 0.6～5.6mg/L,five kinds of reagent ki ts showed good linearity.The detecti on outcome was i nterfered to vari ous degree by bilirubin,haematogl obin and chyle,but the i nterference was consistent wi th manufa cturer’s cl aimed.The others four kinds of reagents of bias were l ess than 15%,except for LEADMAN reagent. Conclusion The primary analyti c performance veri fi cation results of five manufacturer i ncl uding the preci sion,lineari ty,i nterference and bias are consi stent wi th the analyti cal performance defi ned by manufacturer,but there was bias between the results of LEADMAN and Randox control material s.
【K ey word s】Cysteine proteinase inhibi tors C；A nalyti c performance;Evaluation
为保证质量，临床实验室在建立或引进新的检验项目时，应对检测方法的基本性能进行评价，证实其能够满足临床预期用途【1，2】。半胱氨酸蛋白酶抑制剂C简称胱抑素C（Cystatin,Cys C），是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，在血中浓度不受年龄、炎症、恶性肿瘤等因素的影响，可自由通过肾小球并被近端肾小管重吸收和代谢，无肾小管分泌，其血清浓度与肾小球滤过率（GFR）呈良好的相关性。国内外研究证实，血清Cys C是较血清肌酐更能准确早期反映GFR的标记物【3,4】，具有较好的临床应用价值。目前国内出现了许多胱抑素C检测试剂盒，本试验对国内五个厂家胱抑素C试剂盒的 不精密度、线性、抗干扰性和偏倚进行评估，判断其能否满足临床预期用途，结果报告如下。
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湖北省经济管理干部学院*通讯作者：陈忠余，男，1970年生，本科，副主任技师。主要从事临床生物化学、免疫学检验及实验室管理。E-mail：******************
1 材料与方法
1.1. 仪器和试剂：仪器为美国雅培C16000全自动生化分析仪。试剂为上海景源医疗器械有限公司（批号910224）、上海科华生物工程股份有限公司（批号20100712）、北京利德曼生化股份有限公司（批号011252K）、四川迈克生
物科技有限公司（批号0910241）、宁波美康生物科技有限公司（批号20101118）提供，并使用各试剂盒自带的标
准品和质控品。
1.2 测定样品：收集高、低两个水平胱抑素C的混合血清约5ml，分装后置-20℃冰箱保存，用于不精密度试验。使用Randox公司生产的质控血清（批号ZCCC01），用于偏倚评估。
1.3干扰物质：干扰物为血红蛋白、胆红素、乳糜，由日本Sysmex公司提供（批号ZS0002）。
1.4方法
1.4.1测定前准备：参数设置和操作程序严格按照各试剂盒说明书进行。使用各试剂盒配套的校准品和质控品进
行校准和室内质控，室内质控在控后才能进行常规标本的检测。测定前样品室温放置30min，使用前充分混匀。1.4.2不精密度评价：按照NCCLS EP5-A2文件［5］要求，分别使用五个厂家试剂组成的检测系统，对高、低值混合血清每天测定两批（批间测定间隔时间不少于2小时），每批重复检测两次，连续20天，分别计算批内、批间、天间及总不精密度。将获得的数据与厂家说明书声明的性能指标进行比较，判断其可接受性。
1.4.3 线性评价：按NCCLS EP6-A2文件［6］要求，取低值和异常高值血清各1份。设低值标本为L，高值标本为H，将L和H标本按照：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H关系精确配制，形成梯度标本。一天内作2次测定，第1次从低浓度到高浓度，第2次从高浓度到低浓度。
1.4.4 干扰实验：按NCCLS EP7-A2文件［7］要求进行测定，使用Sysmex干扰物，在无溶血、黄疸和脂血的低值和高值混合血清中分别加入不同量的血红蛋白、胆红素、乳糜物，其中干扰物与混合血
清按照1:9的比例混合，制成不同浓度的血红蛋白（2、4、8、10g/L）、胆红素（300、400、500、600umol/L）、乳糜（3000、4000、5000、6000FTU）的干扰物样品，分别检测原血清和含不同浓度干扰物的血清CysC浓度，每个浓度测定两次，结果取均值，以干扰程度为10%作为该系统对干扰物的最高限［1］。
三乙氧基硅烷1.4.5 偏倚评估：检测Randox公司生产的质控血清，每个浓度重复检测三次，取均值评估各检测系统的偏倚。参照美国临床实验室修正法规(CLIA’88)［8］规定的总允许误差，允许偏倚设为15%。
1.5 统计学方法：采用Excel 2003和SPSS 17.0软件进行数据处理。
2 结果
2.1 不精密度评价表1显示五种试剂盒在高、低不同水平混合血清的批内、批间、天间及总不精密度，当CysC 浓度在0.9～7.1mg/L时，其总CV＜6%；五种试剂盒的重复性（即批内精密度）以及室内精密度（即总不精密度）通过验证，其性能均在厂家声明的性能要求范围内。
2.2 线性评价五种试剂线性分析原始结果见表2。经多项式回归分析，利德曼、科华、美康和迈克试剂在试验浓度0.6～5.6mg/L范围内为线性（图1为迈克试剂CysC多项式拟合曲线，利德曼、科华、美康拟合曲线与其相似）。景源试剂在浓度为0.6～5.6mg/L时为二次回归多项式（图2为景源试剂CysC多项式拟合曲线），其二次多项式和一次多项式拟合模型预期值及偏倚见表3，结果显示低浓度样本偏倚大于设定的允许偏倚15%，但是CysC低值结果在临床上无意义，因此可以认为CysC在0.6～5.6mg/L范围内，为临床可接受线性关系。
2.3 干扰实验利德曼试剂当血红蛋白≤4g/L（说明书为3g/L）时无明显干扰，景源、科华、美康和迈克试剂当血红蛋白≤10g/L时未见明显干扰；胆红素浓度≤600mmol/L时对美康、景源、迈克试剂测定高、低值血清CysC的干扰小于10%；胆红素浓度＞600mmol/L（说明书为485umol/L）时对科华试剂测定值干扰＞10%，胆红素浓度>400mmol/L （说明书为200mg/L）时对利德曼试剂测定值干扰＞10%；乳糜物浊度≥6000时对利德曼试剂测定低值血清的干扰＞10%，高值血清不受干扰（说明书为5000FTU）；乳糜物浊度≤6000时对其他几种试剂测定CysC高、低值血清干扰程度均小于10%。
2.4 偏倚评估以各浓度三次的测定结果均值与其对应设定值计算偏倚，判断检测系统的偏倚可接受性。结果见表5，除利德曼外各厂家的偏倚均可接受。
3 讨论
血CysC是低分子量蛋白质，在肾功能轻、中度减低时，其诊断的敏感性高于肌酐，临床应用广泛［9］。随着科学技术的进步，新的检测试剂盒层出不穷，任何试剂在应用于临床之前，应对厂家声明的基本性能在本实验室的检测系统下作该项目的基本性能评价。检测系统的分析性能能够满足临床要求是医学实验室认可和检验结果互认的根本保证［10］。本研究对五个厂家生产的试剂盒的主要分析性能：精密度、线性范围、抗干扰性和偏倚进行了分析和评估。
精密度是反映检测系统性能的首要指标，是其他方法学验证的前提，反映分析中随机误差的大小。本
实验按照NCCLS EP5-A2文件的要求对五厂家的试剂盒进行了批内、批间、天间和总不精密度的评估，结果显示，当CysC浓度在0.9～7.1mg/L时，各厂家的批内、批间、天间和总不精密度CV＜6%，说明这五个厂家的试剂盒均有较好的重复性，符号厂家声明，均在临床可接受范围内。
线性评价是反映方法学性能的重要指标。常规方法应具有较宽的线性范围，一般应覆盖健康人参考区间和临床可能出现的高值。如果方法的线性不够宽，一旦标本测定结果超越范围，结果就会不可靠。经多项式回归分析，利德曼、科华、美康和迈克试剂在试验浓度范围内为线性，景源试剂在浓度为0.6～5.6mg/L时为二次回归多项式，其二次多项式和一次多项式拟合模型预期值及偏倚结果显示低浓度样本偏倚大于设定的允许偏倚15%，但是CysC低值结果在临床上无意义，因此可以认为景源CysC在0.6～5.6mg/L范围内，为临床可接受线性关系。
干扰试验用来衡量候选方法的准确度，在加入一定浓度的干扰物的条件下，形成的是恒定系统误差，干扰物浓度不同，误差大小也不同。临床标本常见的干扰主要是溶血、黄疸、脂血带来的对结果准确性的干扰，本研究
按NCCLS EP7-A2文件要求检测不同浓度的胆红素、乳糜物、血红蛋白的血清标本，评价试剂抗干扰性。试验结果显示：当血清中胆红素≤500mmol/L、血红蛋白≤10g/L和乳糜物≤6000FTU时对科华、景源、迈克、美康四厂家的CysC的测定结果无明显干扰，利德曼试剂当血红蛋白≤4g/L（说明书为3g/L）
、胆红素浓度≤400mmol/L（说明书为200mmol/L）、乳糜物浊度≤5000（说明书为5000FTU）时无明显干扰，与厂家声明相符。
偏倚试验显示科华、景源、迈克、美康胱抑素C试剂检测结果与靶值的相对偏倚均在CLIA’88规定允许误差范围内，试剂有较高的准确度，而利德曼试剂的低值和高值的偏倚均大于允许偏倚。分析其原因，可能与试剂的测定原理（利德曼试剂为胶体金颗粒免疫比浊，另外四种试剂为乳胶增强免疫比浊）、标准赋值、参数设置等有关。实验结果提示我们各个试剂组成的检测系统测定结果并不完全一致，与相关文献报道相似［9，11］，是否可通过校正因子来进行纠正，从而使检测结果在不同试剂组成的系统间达到一致存在争议，也有待进一步的验证研究。
以上试验表明，利德曼试剂精密度、稳定性好，具有一定的抗干扰能力，在验证范围内有较好的线性关系，但测定Randox公司胱抑素C质控血清的偏倚较大。科华、景源、迈克、美康试剂盒的准确度和精密度较好，在验证范围内有较好的线性关系，抗干扰性强，偏倚小，分析性能通过验证，符合厂家声明和本室所确定的质量目标，能购满足临床预期用途。
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