ＤＯＩ：
１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．１２．１７
·产品应用研究·史迪威事件
ＩＨ １０００
作者简介：潘英芳，１９８４年生，女，主管技师，硕士研究生，主要从事输血研究工作。 通信作者：宋永红，主任技师，
Ｅ ｍａｉｌ：ｓｙｈｏｎｇ９９９＠１６３．ｃｏｍ。潘英芳，邵静茹，赵爱平，周娜，徐，宋永红（山东省血液中心血型参比研究室，济南２５００１４）
摘要：目的 用ＩＨ １０００全自动血型仪（简称ＩＨ １０００）筛选稀有血型献血者，为稀有血型患者筛选配血相合的血液以保证其 临床用血。方法 借助经典试管抗人球蛋白实验、９６孔板抗人球蛋白实验、手工微柱凝胶卡法、
ＩＨ １０００血型仪４种方法进行Ｆｙａ抗原阴性血液筛选预实验，对照比较后确认ＩＨ １０００方法筛选稀有血型献血者的可行性，并行实际操作初步筛选出Ｆｙａ抗原阴性血液，再用手工微柱凝胶卡法进行确认，为产生Ｆｙａ抗体的Ｆｙａ抗原阴性稀有血型患者主侧配血。结果 从１５００名献血者中筛选出４名Ｆｙａ阴性献血者，其中２名献血者与１例血清不规则抗体筛查阳性（鉴定为抗Ｆｙａ抗体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体）的患者主侧配血相合。ＩＨ １０００筛选Ｆｙａ阴性血液与传统手工筛选方法对比，在试剂用量、操作便利性、实验通量、结果判 读等方面具有明显优势。结论 相比于传统实验方法，
采用ＩＨ １０００全自动血型仪筛选稀有血型献血者简单、迅速、高效，省时省力，能够及时为稀有血型患者解决用血难的问题。关键词：不规则抗体；稀有血型；全自动血型仪；交叉配血
中图分类号：
Ｒ４４６ 文献标志码：Ａ
当某种血型在人中仅有小于千分之一的人拥有时，即可认为该血型为稀有血型［１
］。当稀有血型患者需要输血时，一方面很可能由于相同血型在人中出现的频率十分罕见，无法及时到相匹配的血液，另一方面由于稀有血型患者一旦产生相应的稀有血型抗体，输注血型不合的血
液即可产生输血反应，严重者甚至可致死亡。因此，稀有血型患者用血一直是临床输血的难题，快速、高效地筛选出相合的稀有血型血液已成为亟待解决的问题。国内实验室一般采用传统手工方法筛选稀有血型。最近我们
用ＩＨ １０００全自动血型仪筛选Ｆｙａ阴性血液，
并完成１例抗Ｆｙａ阳性患者配血工作。
１ 资料与方法
１．１
对象 患者，女，４７岁，
围绝经期功能失调性子宫出血、贫血，血红蛋白５０ｇ／Ｌ，
曾多次输血，欲手术备血，医院输血科检测不规则抗体呈阳性，送本室进行抗体鉴定，并要求配血４Ｕ。
１．２ 标本采集与处理 由本中心专业人员采集献
血者血液，ＥＤＴＡ Ｋ２
抗凝，４℃保存，
行常规血型检测后冷链运输本室待筛选。
１．３ 主要仪器与试剂 ＩＨ １０００全自动血型仪（
美国Ｂｉｏ Ｒａｄ公司），ＫＵＢＯＴＡ ＫＡ２２００血清学离心机、ＫＵＢＯＴＡ ３２２０毛细管超速离心机（日本久保田公司），ＨＨ Ｗ６００金坛数显三用恒温箱（金坛市科析
仪器公司），
ＭＣ４５０红细胞洗涤离心机（日本日立公司），所有仪器均在校准有效期内使用。
单克隆抗Ａ抗体（批号：２０１９０９１７）
、抗Ｂ抗体（批号：２０１９０２０４）
、ＡＢＯ试剂红细胞（批号：２０２００１１３）、抗Ｃ抗体（批号：２０１９３００１）、抗ｃ抗体
（批号：
２０１８３１０２）、抗Ｅ抗体（批号：２０２０３２０１）、抗ｅ抗体（批号：２０１８３３０２）
均为ＩｇＭ型抗体，均购自上海血液生物医药公司，抗Ｄ抗体（ＩｇＭ型，批号：
８０００２５４００１）
、抗Ｆｙａ抗体（ＩｇＧ型，批号：８０００２３６１９０）、抗Ｆｙｂ抗体（ＩｇＧ型，批号：８０００２３２６９２）、筛选细胞（批号：８０００２６１６６２）、谱细胞（批号：８０００２６１６６４）均购自荷兰Ｓａｎｑｕｉｎ公司，抗人球蛋白卡、样本稀释液均购自美国Ｂｉｏ Ｒａｄ公司，所有试剂均合格。
１．４ 免疫血清学实验 ＡＢＯ血型及其他特殊血型抗原鉴定、不规则抗体筛查鉴定、交叉配血均按照《全国临床检验操作规程》及试剂盒说明书操作［２
］，抗体筛查、鉴定结果均结合所用谱细胞抗原格局表判读。
１．５ 稀有血型筛选
１．５．１ 抗体工作液选择（
参照抗体效价测定） 将抗体试剂原液倍比稀释，在各倍比稀释抗体的试管（微孔板、凝胶卡孔）中加入红细胞温育（试管法、微
板法红细胞浓度为３％～５％，
体积为５０μＬ；凝胶卡红细胞浓度为０．８％，体积为５０μＬ），洗涤后加入抗人球蛋白试剂（微柱凝胶卡法无需此步骤），离心观察结果，以出现反应强度１＋且易于观察判读的稀释度作为最终筛选阴性红细胞的工作液。
１．５．２ 试管法、９６孔微板法、
微柱凝胶卡法筛选Ｆｙａ
阴性红细胞 均采用抗人球蛋白试验方法并按试剂盒说明书操作。
１．５．３ ＩＨ １０００筛选Ｆｙａ阴性献血者 参考ＩＨ
回龙观北郊医院
１０００主侧交叉配血程序，将抗Ｆｙａ试剂按１∶６４稀释后加至贴有条形码的试管内，取代患者血清样本
一侧；在ＩＨ Ｃｏｍ界面中选择ＷｏｒｋＬｉｓｔ，点击Ｑｕｉｃｋ
Ｒｅｑｕｅｓｔ图标，在ｔｅｓｔ下拉菜单中选择自主命名的“稀有血型系统筛选”程序，将抗Ｆｙａ试剂试管和献
血者样本试管扫码上机；开始运行，待实验结束，机器自行判读结果。
２ 结果
２．１ 患者血型及其他血型系统表型鉴定 该患者血型为Ｏ型，Ｒｈ血型系统表型为ＣＣＤｅｅ，Ｄｕｆｆｙ血型
系统表型为Ｆｙ（ａ－ｂ＋）。
２．２ 患者不规则抗体筛查鉴定结果 间接抗人球蛋白实验结果显示，患者血清与Ｏ１～Ｏ３筛选细胞
均存在不同程度的凝集，强度分别为０＋，４＋，２＋ｓ（ｓ：
ｓｔｒｏｎｇ指强凝集）；进一步运用Ｏ１～Ｏ１６谱细胞与患者血清反应存在不同凝集，格局明显，结合患者Ｒｈ
系统及Ｄｕｆｆｙ系统表现型，推断鉴定该患者血清内不规则抗体为抗Ｅ、抗ｃ合并抗Ｆｙａ抗体。
２．３ 用ＩＨ １０００筛选Ｆｙａ阴性红细胞 从１５００名献血者血液中筛选出４名Ｆｙａ阴性者，采用手工微
柱凝胶法，用抗Ｆｙａ抗体试剂原液进行确认，经验证均为Ｆｙａ阴性；同时确认其Ｒｈ系统ＣｃＥｅ表现型，其中２例表型为ＣＣｅｅ。
２．４ 主侧交叉配血 用患者血清与２名Ｆｙａ抗原确认阴性且Ｅ、ｃ抗原阴性的献血者红细胞进行主
侧配血试验，用手工微柱凝胶法主侧配血相合。２．５ ＩＨ １０００筛选Ｆｙａ阴性血液方法与传统方法对比 常规确认Ｆｙａ抗原采用抗Ｆｙａ抗体原液，考虑
到抗Ｆｙａ抗体试剂成本高，对于初步筛选Ｆｙａ阴性血液，首先对抗体稀释比例进行预实验，采用抗原为杂合Ｆｙ（ａ＋ｂ＋）的红细胞，进行Ｆｙａ抗体效价验证，最终以１＋强度凝集稀释度作为工作液条件，即经典试管抗人球蛋白实验法（简称传统试管法）按照稀释比例１∶８、９６孔微板抗人球蛋白实验法（简称９６孔微板法）按照稀释比例１∶２、微柱凝胶卡法和ＩＨ
１０００均按照稀释比例１∶６４工作液进行筛选操作，见表１。
权力机关对行政立法的监督应当是用经典试管抗人球蛋白实验法（简称传统试管法）、９６孔板抗人球蛋白实验法（简称９６孔微板法）、手工微柱凝胶检测卡方法及ＩＨ １０００４种方法预实验对比抗体物料消耗、人力消耗、工作效率、结果判读难易程度等，最终选择ＩＨ １０００方法筛选上述１５００例献血者血液，见表２。
表１ ４种方法初筛所用抗Ｆｙａ抗体稀释比例
稀释比例试管法９６孔微板法手工微柱凝
胶卡法ＩＨ １０００
血型仪１３＋２＋４＋４＋
２２＋ｓ１＋３＋ｓ３＋ｓ
４２＋ｗ３＋３＋
８１＋０２＋ｓ２＋ｓ
１６ｗ０２＋２＋
３２００１＋ｓ１＋ｓ
６４００１＋１＋
１２８００ｗｗ
２５６００００
５１２００００
注：ｓ，强凝集；ｗ，弱凝集。
表２ ４种方法筛选Ｆｙａ抗原阴性血液对比
传统试管法９６孔微板法手工微柱凝胶卡法ＩＨ １０００血型仪消耗试剂抗Ｆｙａ抗体（稀释比例）５０μＬ（１∶８）４０μＬ（１∶２）２５μＬ（１∶６４）２５μＬ（１∶６４）配制献血者红细胞手工手工手工自动
加样方式手工手工手工自动
每小时可完成数量５０９６１００＞５００
判读结果肉眼肉眼肉眼仪器
是否另加抗人球蛋白试剂是（５０μＬ）是（４０μＬ）否否
主观性强强一般无
准确度较差较差好好
３ 讨论
通常将ＡＢＯ以外的血型抗体称之为不规则抗体。近年来，由于ＡＢＯ、ＲｈＤ抗原同型输血已得以
规范，不规则抗体诱发的输血反应上升为影响临床输血安全的重要因素。因此，输血前行不规则抗体筛查是保障临床输血安全的重要措施之一［３ ４］，而稀有血型系统对应的罕见不规则抗体虽然少见，但其诱发输血反应不容忽视。Ｄｕｆｆｙ血型系统中Ｆｙａ抗原阴性血液在亚洲人中的概率约为３‰，这些罕
见个体一旦产生相应不规则抗体，即面临配血困难，继而存在延误的风险［５ ７］。本病例存在抗ｃ、抗
Ｅ、抗Ｆｙａ３种不规则抗体，为Ｆｙａ阴性稀有血型患者。本病例重度贫血，急需输注配血相合血液，考虑
到抗Ｆｙａ抗体可引起速发性或者延迟性溶血性输血反应［８］，因此，最好选择Ｆｙａ阴性血液输注，３种抗原同时阴性的频率为０．６‰，需要筛选至少１５００名献血者，我们面临筛选Ｆｙａ阴性稀有血型的困难。传统稀有血型筛选方法，主要分为传统试管法、
９６孔微板法、微柱凝胶卡法，均需要手工配制红细胞悬液，工作量大，且消耗大量抗体试剂及其他耗
材，同时需对每一个标本试管或者凝胶卡孔准确标记，读取结果靠肉眼观察，主观性强，步骤繁杂，每步都存在误差可能性［９ １０］。近年来，一些实验室开展基因技术筛选稀有血型，但由于技术要求较高，涉及设备较多，经费较大，基因技术推进相对缓慢［１１］。为迅速准确筛选到相配合的血液，我科室利用ＩＨ １０００交叉配血程序，将稀有血型筛选全自动化。
ＩＨ １０００系一款免疫血液学诊断用的全自动系统，是基于免疫学抗原抗体反应的卡式凝胶技术，能够
处理多种免疫血液学ＩＤ Ｃａｒｄ技术，包括ＡＢＯ血型分型、抗体筛查、抗体鉴定、抗人球蛋白实验测试和交叉配血［１２ １４］。ＩＨ １０００在医院输血科应用较广且应用多年，由于临床标本量大，ＩＨ １０００在临床输血中应用优势明显，但临床输血科储血有限，一旦遇到复杂同种抗体造成配血不合病例，多委托血站筛选血液。我实验室在接到此类标本后，一般先行不规则抗体鉴定，再
行抗原阴性献血者筛选并配血。借助血站大量献血者样本试管储备优势，在ＩＨ １０００交叉配血功能基础上建立稀有血型程序，再对筛选的阴性献血者行红细胞相应抗原确认，短时间内便从１５００名献血者中为患者筛选到了ｃ抗原、Ｅ抗原及Ｆｙａ抗原均阴性的血液，与患者主侧配血试验相合，患者因此得到及时安全的输血。
经多次预实验及实践，本实验室建立的ＩＨ １０００稀有血型筛选程序，已形成比较成熟的体系程序，利用ＩＨ １０００全自动血型仪高效、灵敏一体化优势，运用较低的抗体浓度、较少的人力耗材成本、较便捷的操作即实现了Ｆｙａ阴性血液的筛选。后续我们反复实践，证实该程序也可以用于筛选Ｄｉｅｇｏ等其他血型系统的稀有血型血液。ＩＨ １０００筛选稀有血型程序可以在临床输血中推广，便于保障临床供血，同时可以加快我国稀有血型库建设［１５］，丰富稀有血型库信息资源，缓解稀有血型患者用血难问题。
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（收稿日期：２０２０ ０６ ２８）
（本文编辑：王海燕）
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