类胡萝卜素含量方法

（一）检测原理：类胡萝卜素含量测定(酶标仪96T)

叶绿体中所含素主要有两大类，叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为素蛋白复合体，其含量多少及其组成决定了植物对不同光的吸收、利用效率，常常作为研究光合生理的重要指标。

根据叶绿体素提取液对可见光谱的吸收，在649nm和665nm处测定叶绿素提取物的吸光值，在470nm处测定类胡萝卜素；然后利用经验公式计算出样品中叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素总含量及类胡萝卜素含量。

（二）试剂组分与配制：

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试剂名称规格保存要求

共生体试剂一粉剂×1瓶4℃保存

基础教育资源网乙醇（自备）1000mL×1瓶4℃保存

抽提Buffer配制：（体积比）乙醇：丙酮=95:5

新美国梦（三）所需的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、天平、10mL玻璃试管、锡箔纸、无水乙醇，丙酮。

（四）测定步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实

验样本和试剂浪费！

1、样本制备

（1）取新鲜植物叶片或其它绿组织，去掉中脉。

苗勒管永存综合征（2）称约0.1g剪碎，用蒸馏水洗干净，然后加入1mL抽提Buffer，少量试剂一（约50mg），叶绿素对光敏感，务必在黑暗或弱光条件下充分研磨（难磨叶片可以添加少量石英砂助磨），然后转移至10mL玻璃试管。

（3）用抽提Buffer冲洗研钵，将所有冲洗液及研钵中所有的绿物质转入10mL玻璃试管，用抽提Buffer补充至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。2、上机检测

分别取200μL浸提液和200μL抽提Buffer于96孔板，记为测定管和空白管，分别于665nm 和649nm和470nm处读取吸光值A，△A665=(A测定-A空白)665，△A649=(A测定-A空白) 649，△A470=(A测定-A空白)470。

【注】：若吸光值A超过1，待检测的浸提液用抽提Buffer稀释，计算公式乘以稀释倍数。

（五）结果计算：

类胡萝卜素含量（mg/g鲜重）

V×D 1000×W

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Ca=13.95×△A665–6.88×△A649(mg/L)；

Cb=24.96×△A649–7.32×△A665(mg/L)；

C T=6.63×△A665+18.08×△A649(mg/L)；Cc=(1000×△A470-

2.05×Ca-114.8×Cb)÷245(mg/L)

=(1000×△A470-2851.304×△A649+811.7385×△A665)÷245(mg/L)；

V---代表提取液体积，10mL；

D---代表稀释倍数，未稀释即为1；

W---代表样本质量，g。

本文发布于:2024-09-20 21:39:28，感谢您对本站的认可！

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