食品中氨基酸态氮的测定
1 范围
本标准规定了酱油、酱、黄豆酱中氨基酸态氮的测定方法。
本标准第一法适用于以粮食和其副产品豆饼、麸皮等为原料酿造或配制的酱油，以粮食为原料酿造的酱类，以黄豆、小麦粉为原料酿造的豆酱类食品中氨基酸态氮的测定。第二法适用于以粮食和其副产品豆饼、麸皮等为原料酿造或配制的酱油中氨基酸态氮的测定。
第一法 甲醛值法
2 原理
iso17799利用氨基酸的两性作用，加人甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，以酸度计测定终点。 3 试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。
3.1 试剂
3.1.1 甲醛(36%～38%)：应不含有聚合物。
3.1.2 氢氧化钠（NaOH ）。
3.1.3 酚酞(C 20H 14O 4)。
3.1.4 乙醇（CH 3CH 2OH ）。
3.1.5 邻苯二甲酸氢钾（HOOCC 6H 4COOH ）。
3.2 试剂的配制
氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050 mol/L]
3.2.1 氢氧化钠溶液：称取120 g 氢氧化钠，加100 mL 的水，振摇使之溶解成饱和溶液，冷却后置于聚乙烯的塑料瓶中，密塞，放置数日，澄清后备用。取上层清液2.8 mL ，加适量新煮沸过的冷蒸馏水至1000 mL ，摇匀。
3.2.2 酚酞指示液：称取酚酞1g 溶于适量乙醇中稀释至100 mL 。 3.2.3 氢氧化钠标准滴定溶液的标定：准确称取约 0.3 g 在105℃～110℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾，加80 mL 新煮沸过的冷蒸馏水，使之尽量溶解，加2滴酚酞指示液，用氢氧化钠溶液滴定至溶液呈微红，30 s 不褪。记下耗用氢氧化钠溶液毫升数。同时做空白试验。
3.2.4 计算：奔月记
氢氧化钠标准滴定溶液的浓度按式（1）计算。
0.2042)V -(V 21⨯=m
c
(1)
式中：
c ——氢氧化钠标准滴定溶液的实际浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
水银蒸发令m ——基准邻苯二甲酸氢钾的质量，单位为克(g)；
V 1——氢氧化钠标准溶液的用量体积，单位为毫升(mL)；
V 2——空白实验中氢氧化钠标准溶液的用量体积，单位为毫升(mL)；
0.2042——与1.00 mL 氢氧化钠标准滴定溶液〔c(NaOH)=1.000 mol/L 〕相当的基准邻苯二甲酸氢
钾的质量，单位为克 (g)。
4 仪器和设备
4.1 酸度计 : (附磁力搅拌器) 。
4.2 10 mL 微量碱式滴定管。
4.3 分析天平 : 感量0.l mg 。
5 分析步骤
5.1 酱油试样
称量5.0 g 试样，置于100 mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取 20.0 mL 置于200 mL 烧杯中，加6 0 mL 水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液[c(NaOH)=0.050 mol/L]滴定至酸度计指示pH 为8.2 ，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数，可计算总酸含量。加入10 .0 mL 甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液继续滴定至 pH 为 9.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。同时取80 mL 水，先用氢氧化钠溶液(0.05 mol/L)调节至pH 为8.2 ，再加入10.0 mL 甲醛溶液，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH 为 9.2，同时做试剂空白试验。
5.2 酱及黄豆酱样品
将酱或黄豆酱样品搅拌均匀后，放入研钵中，在10 min 内迅速研磨至无颗粒 ，装入磨口瓶中备用。用已知重量的称量瓶称取搅拌均匀的样品5.0 g ，用50 mL 80℃左右的蒸馏水分数次洗入100 mL 烧杯中，用玻璃棒在不断地搅拌下煮沸2 min ，取下冷却后，转入100 mL 容量瓶中，用少量水分次洗涤烧杯，洗液并入容量瓶中，并加水至刻度，混匀。吸取10.0 mL ，置于200 mL 烧杯中，加60 mL 水，以下按 5.1中 自“开动磁力搅拌器⋯⋯”起依法操作。
6 结果计算
试样中氨基酸态氮的含量按式(2)进行计算。汪建设
100/100
V 0.014c )(321⨯⨯⨯⨯-=
m V V X ………………………（2） 式中：
X ——试样中氨基酸态氮的含量，单位为克每百克(g/100g)；
V 1——测定用试样稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)； V 2——试剂空白实验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)；
V 3——试样稀释液的取用量，单位为毫升(mL)；
m ——称取试样的质量，单位为克(g)；
c ——氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
0.014——与1.00 mL 氢氧化钠标准滴定溶液〔c(NaOH)=1.000 mol/L 〕相当的氮的质量，单位
为克(g)。
计算结果保留两位有效数字。
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。
第二法比法
8原理
在pH为4.8 的乙酸钠-乙酸缓冲液中，氨基酸态氮与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄的3,5-二乙酸-2,6-二甲基-1,4 二氢化吡啶氨基酸衍生物。在波长400 nm 处测定吸光度，与标准系列比较定量。
9试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
9.1试剂
9.1.1 乙酸（CH3COOH）
9.1.2无水乙酸钠（CH3COONa）或乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。
9.1.3甲醇（CH3OH）。
9.1.4 乙酰丙酮（C5H8O2）。
9.2试剂的配制
9.2.1乙酸溶液(1 mol/L): 量取5.8 mL冰乙酸，加水稀释至100 mL。
9.2.2乙酸钠溶液(1 mol/L): 称取41 g无水乙酸钠或68 g乙酸钠(CH3COONa·3H2O)，加水溶解后并稀释至500 mL。
9.2.3乙酸钠-乙酸缓冲液：量取60 mL乙酸钠溶液(1 mol/L)与40 mL乙酸溶液(1 mol/L)混合，该溶液pH为4.8。
公共自行车服务系统
9.2.4 显剂:15 mL 37%甲醇与7.8 mL乙酰丙酮混合，加水稀释至100 mL，剧烈振摇混匀(室温下放置稳定三日)。
9.3 标准溶液的配制
9.3.1 氨氮标准储备溶液(1.0 g/L)：精密称取105℃干燥2 h的硫酸铵0.4720 g，加水溶解后移100 mL 容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1.0 mg NH3-N(10℃下冰箱内贮存稳定1年以上)。
9.3.2 氨氮标准使用溶液(0.1 g/L)：用移液管精确量取10 mL氨氮标准储备液(1.0 mg/mL)于100 mL容
量瓶内，加水稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于100 µg NH3-N (10℃下冰箱内贮存稳定1个月)。
10仪器和设备
人非生而知之者
10.1分光光度计
10.2电热恒温水浴锅(100℃±0.5℃)
10.310 mL具塞玻璃比管。
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