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专项审计
PL和PR启动⼦表达载体系统
P L和P R启动⼦是⼤肠杆菌λ噬菌体中控制早期转录的启动⼦, P L和P R表达载体系统是以该启动⼦构建的⾼效表达载体。在野⽣型λ噬菌体中,P L和P R启动⼦的转录与否决定λ噬菌体进⼊裂解循环或溶原循环。λ噬菌体P E启动⼦控制的CI基因表达产物是P L和P R启动⼦转录的阻遏物,⽽CI阻遏物的表达和在细胞中的浓度,取决于⼀系列宿主与噬菌体因⼦之间的复杂平衡关系。 由于通过细胞因⼦调节CI在细胞中含量的途径很难操作,因⽽在构建表达系统时,选⽤温度敏感突变体CIts857的基因产物来调控P L和P R启动⼦的转录, 在较低温度(30)下阻遏物以活性形式存在,在较⾼温度(42)下阻遏作⽤失活。因此,改变⼯程菌的培养温度即可控制⽬的基因的表达,这⽐⽤诱导剂诱导表达的系统要节省操作步骤和成本,在⼤规模基因表达中优点尤其明显。
ap系统
由于普通的⼤肠杆菌中不含CI基因表达产物,因此必须对表达载体或⼤肠杆菌进⾏遗传改造,
将CIts857基因组装在表达载体上或整合在宿主染⾊体上。本⾝带有CIts857基因的表达载体,能⾃⾝编
2010江苏数学
北师大珠海分校论坛码CIts蛋⽩,对宿主的选择范围较宽;本⾝不带CIts857基因的表达载体,选择宿主菌时,要求宿主是有缺陷的原噬菌体溶源化的菌株(如M5219)。前⼀类载体表达效率往往更⾼。833uu
图⽰为pBV220表达载体的结构⽰意图。⾎管⽣长素(ANG)基因插⼊pB220载体多克隆位点中,转化到⼤肠杆菌JM103内,便能通过温度的变换控制CI阻遏蛋⽩的活性,继⽽调节P L和P R启动⼦的活性,
使ANG基因连同其5′端上游所带的SD 序列转录成mRNA (SD序列与起始密码ATG的间距
为6bp),mRNA作为模板使核糖体⾼效翻译出ANG产物,并终⽌于rrnB位点。