C h i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s
㊀
２０２０,３６(１２
)D O I :１０．３９６９/j
．i s s n ．１００２－２６９４．２０２０．００．１６６ 实验研究
刘加彬１，张瑞梅２，刘成永２
江苏省２０１７年高层次卫生人才 六个一工程 拔尖人才项目(N o ．L G Y ２０１７０６０)；徐州市社会发展－临床医学研究项目(N o ．X M １３B ０４９)第一作者：刘加彬,E m a i l :x c ８３６６８７０１＠１６３．c o m ;
O R C I D :００００Ｇ０００２Ｇ０４３３Ｇ１７６９
作者单位:１．徐州市东方人民医院，徐州㊀２２１００４;
２．徐州市传染病院，徐州㊀２２１００４
摘㊀要：目的㊀研究徐州市耐多药结核(M D R ＧT B )耐药表型㊁耐I N H 或R F P 相关基因突变情况,
分析耐药表型与基因突变间关系，为耐多药结核疾病的诊断提供科学依据.方法㊀采取随机方法抽取徐州市１１５例M D R ＧT B 菌株和６６株全敏感菌株进行耐药情况分析，使用基因芯片检测技术对耐I N H 相关基因k a t G ㊁i n h A 和a p h C 以及耐R F P 相关基因r p
o B 突变位点进行检测，对结果进行t 检验分析.结果㊀徐州市M D R ＧT B 菌株耐药表型有９种组合，主要是以耐I N H＋R F P 组合为主，比例为４７．８３％，其次为耐I N H＋R F P ＋S M 组合，比例为２０．００％.与耐I N H 的相关基因突变率８７．８３％，基因突变类型分别为单基因k a t G (６４．３５％)和i n h A (３．４８％)，双基因k a t G ＋i n h A (１２．１７％)和k a t G ＋a p
h C (１２．１７％).耐多药株(１１５例)和敏感株(６６例)总体变异率均数比较(t ＝１０７．５６,P ＜０．０５)，其中k a t G 基因突变率比较(P ＜０．０５)，二者差异均有统计学意义.与耐R F P 相关r p o B 基因总突变率８６．０９％，耐R F P 相关r p
中国红丝带网
o B 基因突变类型分别为单５３１(４５．２２％)㊁５１６(８．７０％)和５２６位点，双(５３１＋５１６)(１３．９１％)㊁(５３１＋５１３)(１２．１７％)和５１６＋５３３突变位点,５３１＋５１６＋５１３(３．４８％)三位点突变.耐多药株和敏感株总体和单个位点突变率均数比较(t ＝９４．９２,P ＜０．０５),５３１(P ＜０．０５)㊁５１６(P ＜０．０５)㊁５３３(P ＜０．０５)，二者差异均有统计学意义.结论㊀研究发现了徐州市M D R ＧT B 耐药表型特征.徐州市M D R ＧT B 菌株与耐I N H 和R F P 相关基因突变客观存在，并表现出多态性和地区性.与耐I N H 相关k a t G 基因㊁与耐R F P 的相关r p o B 基因５３１㊁５１６㊁５３３位点突变相对稳定，有临床应用价值，可作为徐州市耐药结核菌株快速诊断的指标.
关键词：耐多药结核：基因突变；基因芯片
中图分类号:R ３７８．９１㊀㊀㊀文献标识码:A ㊀㊀㊀文章编号:１００２－２６９４(２０２０)１２－１０１４－０５
D r u g Ｇr e s i s t a n c e a n a l y s i s a n d c h a r a c t e r i s t i c s o f g e n em u t a t i o n s i nm u l t i p
l e d r u g
Ｇr e s i s t a n t t u b e r c u l o s i s i nX u z h o u ,C h i n a L I UJ i a Ｇb i n １,Z H A N G R u i Ｇm e i ２,L I U C h e n g Ｇy o n g
２
(１．X u z h o uO r i e n t a lP e o p l e sH o s p i t i a l ,X u z h o u ２２１００４,C h i n a ;２．X u z h o uI n f e c t i o n sD i s e a s eH o s p
i t i a l ,X u z h o u ２２１００４,C h i n a )A b s t r a c t :T h i s a r t i c l e f o c u s e d o n s t u d y i n g t h e s p e c t r u mo fm u l t i p l e d r u g
Ｇr e s i s t a n t t u b e r c u l o s i s (M D R．t u b e r c u l o s i s )i s o l a t e s a n d g e n em u t a t i o n s i n M D R．t u b e r c u l o s i s i s o l a t e s i nX u z h o u ．W e s o u g h t t o i d e n t i f y m o l e c u l a r e v i d e n c e s u p p o r t i n g a r a p i dd i a g Ｇn o s t i cm e t h o d f o rM D R．t u b e r c u l o s i s t h r o u g ha n a l y z i n g t h e r e l a t i o n s h i p sb e t w e e n t h e s p e c t r ao fM D R．t u b e r c u l o s i s i s o l a t e s a n d m u t a t i o n s i n M D R．t u b e r c u l o s i s i s o l a t e g e n e s ．At o t a l o f１１５M D R．t u b e r c u l o s i s i s o l a t e sa n d６６p a n Ｇs u s c e p
t i b l e i s o l a t e sw e r e c h o s e nv i a r a n d o ms a m p l i n g f r o mt h e e n t i r eX u z h o ua r
e a ．W e u s e d t h e g e n e c h i p t e c h n i q u e t od e t e c t t h e r o p B g e n e i nR F P Ｇr e Ｇs i s t a n tM D R．t u b e r c u l o s i sa n d k a t G ,i n h A a n d a p h C o f I N H Ｇr e s i s t a n t M D R．t u b e r c u l o s i s ;t h er e s u l t sw e r ea n a l y z e d w i t ht Ｇt e s t s ．N i n e s p e c t r a o fM D R．t u b e r c u l o s i s t r e a t e dw i t h s i x d r u g sw e r e i d e n t i f i e d ;t h em o s t p r e v a l e n t s p
e c t r u m w a s t h a t o
f I N H＋R F P ,a c c o u n t i n
g f o r ４７．８３％,f o l l o w e db y I N H＋R F P ＋S M ,a c c o u n t i n g f o r ２０．００％．A m o n g t
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１２．１７％h a dm u t a t i o n s i n k a t G ＋i n h A ,a n d１２．１７％h a d m u t a Ｇ
t i o n s i n k a t G ＋a p h c ．T h e t o t a lm u t a t i o n r a t e i nM D R．t u b e r c u l o Ｇs i s i s o l a t e s (１１５)w a sh i g h e rt h a nt h a t i n p a n Ｇs u s c e p t i b l e i s o Ｇl a t e s (６６)t r e a t e dw i t h I N H ,a n d t h e d i f f e r e n c ew a s s t a t i s t i c a l l y
s i g n i f i c a n t (t ＝１０７．５６,P ＜０．０５)．F o r t h e o t h e rm u t a t i o n s ,o n l y
t h e d i f f e r e n c e i n t h em u t a t i o nr a t e i n k a t G w a s s t a t i s t i c a l l y s i g
Ｇ４
１０１
n i f i c a n t(P＜０．０５)．T h e r p o B g e n em u t a t i o n r a t e o f d r u g r e s i s t a n c e g e n e s i nM D R．t u b e r c u l o s i s t r e a t e dw i t hR F Pw a s８６．０９％．T h e l o c a t i o n s o fm u t a t i o n sw e r e a t c o d o n s５３１(４５．２２％),５１６(８．７０％),５３１＋５１６(１３
．９１％),５３１＋５１３(１２．１７％)a n d５３１＋５１６＋５１３(３．４８％),w h e r e a s５２６,５３３a n d５１６＋５３３c o d o nm u t a t i o n sw e r e q u i t e r a r e．T h e t o t a lm u t a t i o n r a t e o fM D R．t u b e r c uＧl o s i s i s o l a t e s u n d e rR F P t r e a t m e n t(１１５)w a s h i g h e r t h a n t h a t o f p a nＧs u s c e p t i b l e i s o l a t e s(６６),a n d t h e d i f f e r e n c ew a s s t a t i s t iＧc a l l y s i g n i f i c a n t(t＝９４．９２,P＜０．０５)．F o r t h e o t h e rm u t a t i o n s,o n l y t h e d i f f e r e n c e i n t h em u t a t i o n r a t e i n c o d o n s５３１a n d５１６w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P＜０．０５)．M u t a t i o n su n d e rI N H a n d R F Pt r e a t m e n to f M D R．t u b e r c u l o s i s w e r ee v i d e n ta n d s h o w e d p o l y m o r p h i s ma n dr e g i o n a l i s mi nX u z h o u．T h ec o mm o n m u t a t i o ns i t e s i n M D R．t u b e r c u l o s i st r e a t e d w i t h R F P w e r e m a i n l y c o d o n s５３１,５１６a n d５３３;t h em u t a t i o n s i t ew i t h I N Ht r e a t m e n tw a sm o s t c o mm o n l y k a t G,w h i c hw a s r e l a t i v e l y s t a b l e a n dm a y s e r v e a s a r a p i da n de f f e c t i v e i n d e x f o r e a r l y d i a g n o s i s o fM D R．t u b e r c u l o s i s i nX u z h o u．
K e y w o r d s:M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s;g e n em u t a t i o n;g e n e c h i p
S u p p o r t e db y t h eS c i e n t i f i cR e s e a r c hP r o j e c t o f J i a n g s uP r o v i n c eH i g hP r o f e s s i o nT a l e n t s f o rH e a l t ho f s i xＧo n e p r o j e c t s (N o．L G Y２０１７０６０);S c
i e n t i f i cR e s e a r c hP r o j e c t o f t h eD e v e l o p m e n t o f t h eS o c i e t yＧC l i n i c a lM e d i c i n e i nX u z h o u(N o．X M１３B０４９)
㊀㊀耐药结核的出现，给中国乃至世界的结核病诊疗与控制工作带来严峻挑战.世界卫生组织列出的３０个高结核病负担国家在全球的病例中，印度占２７％，中国占９％，中国位列全球第二[１].中国结核病报告发病人数始终位居法定乙类传染病前列[２].研究发现结核分枝杆菌(I N H)耐药与k a t G㊁i n h A㊁a p h C，利福平(R F P)与r p o B等相关耐药基因突变有关，并且不同的国家和地区结核分枝杆菌耐药相关基因的突变特点也不相同[３].
我们的研究就是基于聚合酶链式反应(P C R)和反向点杂交(R D B)相结合的基因芯片技术，随机抽取徐州地区耐多药结核(M D RＧT B)分枝杆菌，分析和发现本地区M D RＧT B耐药情况和相关基因突变特征，为耐多药结核的快速诊疗和精准控制提供科学依据.
１㊀材料与方法
１．１㊀数据来源㊀研究涉及的M D RＧT B菌株１１５株，敏感菌株６６株来自徐州市传染病医院㊁徐州市疾控中心及徐州市１０县(市)㊁区结核病监测点实验室.菌株的传代㊁培养和保存均由徐州市传染病院完成.结核分枝杆菌标准株H３７R V由中国结核病控制中心临床中心参比室提供.
１．２㊀结核分枝杆菌改良罗氏比例法药物敏感试验[４]㊀改良罗氏比例法培养基内含药浓度按照中国防痨协会推荐的耐药标准:I N H(０．２μg/m L)㊁R F P (４０μg/m L)㊁S M(４μg/m L)㊁E M B(２μg/m L)㊁KM (３０μg/m L)㊁O F X(２μg/m L).
１．３㊀结核分枝杆菌鉴定㊀用对硝基苯甲酸(P N B)法[４]
１．４㊀药敏培养基[４]㊀抗痨药物(i s o n i a z i d, I N H)和利福平(r i f a m p i c i n,R F P)㊁乙胺丁醇(e t h a m b u t o l,E M B)㊁氧氟沙星(o f l o x a c i n,O F X)㊁链霉素(S M)㊁卡那霉素(k a n a m y c i n,KM)均由徐州市传染病院提供.
１．５㊀结核分枝杆菌耐多药基因芯片分析[５]㊀结核杆菌(T B)全基因组有４４１１５２９b p，约包括４０００个基因.研究发现T B耐药性的发生与其基因突变相关.正常情况下,T B的K a t G蛋白和I n h A蛋白使活化成异烟酸，使之具有杀菌的能力.当k a t G㊁i n h A基因发生突变时，过氧化氢－过氧化物酶㊁烯酰基还原酶活性下降或丧失，阻止变成活性形式，从而导致T B对产生不同程度的耐药.
利福平的耐药性９５％以上是由编码R N A聚合酶β亚基的r p o B基因突变引起，突变均发生在r p o B５０９~５３３位的２５个氨基酸(７５b p)组成的区域内.r p o B基因是细菌R N A聚合酶β亚基的编码基因.当其中８１个碱基的核心区域－耐利福平决定区(R R D R)发生突变时，包括点突变或短的插入
㊁缺失突变等，利福平不能与细菌R N A聚合酶β亚基结合，因而细菌表现为对利福平的耐受性.
本系统采用了聚合酶链式反应(P C R)和反向点杂交(R D B)相结合的基因芯片技术.设计引物扩增目的基因，引物一端标记有生物素，扩增好的产物都带有生物素标记.然后扩增好的目的基因片段与膜芯片上的探针特异结合，再通过链霉亲和素－过氧化物酶复合物与生物素结合，复合物在T M B作用和过氧化氢的催化下发生显反应，扩增产物有与探针结合的位置都会产生蓝圆点.MT B耐药突变基因检测芯片来自深圳亚能生物.１．６㊀芯片法检测位点[６]㊀临床疑似患者分离培养结核分枝杆菌核酸的定性检测I N H的k a t G㊁i n h A和a p h C基因各检测１个位点和R F P
５１０１
１２期刘加彬，等：徐州市耐多药结核耐药分析及分枝杆菌基因突变特征研究
的r p o B基因检测６个位点.
１．７㊀样本选择㊀对徐州地区２０１５－２０１８年结核病实验室耐多药菌株采取单纯随机抽样，结合徐州地区耐多药率计算样本数.数据录入采取E X C E L软件，数据统计采用S P S S２０．０进行t检验.
２㊀结㊀果
２．１㊀耐多药情况㊀１１５例M D RＧT B菌株耐药情况有９种组合，主要是以耐I N H＋R F P组合为主，比例为４７．８３％，其次为耐I N H＋R F P＋S M组合，比例为２０．００％，其他组合均占一定比例，见表１.
表１㊀徐州市耐多药菌株耐药分析
T a b．１㊀A n a l y s i s o fm u l t i p l e d r u gＧr e s i s t a n c e o fM D R
t u b e r c u l o s i s i s o l a t e s i nX u z h o u
耐多药种类耐多药
例数
耐多药率/
％
I N H＋R F P５５４７．８３I N H＋R F P＋S M２３２０．００I N H＋R F P＋O F X７６．０９I N H＋R F P＋E M B５４．３５I N H＋R F P＋KM５４．３５I N H＋R F P＋O F X＋E M B１０．８７
I N H＋R F P＋O F X＋KM７６．０９I N H＋R F P＋O F X＋S M＋E M B１１９．５７I N H＋R F P＋O F X＋KM＋E M B１０．８７合计１１５１００．００２．２㊀基因突变情况
２．２．１㊀I N H相关基因k a t G㊁i n h A及a p h C变情况分析㊀１１５例M D RＧT B菌株检测出无基因突变１４株，基因突变株１０１株，突变率８７．８３％.I N H相关基因突变类型㊁例数和突变率分别为k a t G基因７４例(６４．３５％)㊁i n h A基因４例(３．４８％)㊁k a t G＋i n h A 双基因１４例(１２．１７％)㊁k a t G＋a p h C双位点突变１２．１７％.见表２.在比例法研究敏感株６６例中，有６例发生基因突变，突变率９．０９％，主要突变基因i n h A３例(４．５５％)㊁a p h C３例(４．５５％)，见表３. M D RＧT B菌株和敏感株总体变异率均数比较(t＝１０７．５６,P＜０．０５)，二者差异有统计学意义.单个基因变异率均数比较k a t G(P＜０．０５)，二者差异有统计学意义.i n h A基因(t＝５．０４,P＞０．０５)㊁a p h C基因(t＝０．７３,P＞０．０５)，二者差异无统计学意义，见表３.
表２㊀徐州市M D RＧT B菌株I N H相关基因突变分析
T a b．２㊀A n a l y s i s o fM D R．t u b e r c u l o s i s i s o l a t em u t a t e d g e n e s
a s s o c i a t e dw i t h I N HＧr e s i s t a n c e i nX u z h o u
基因基因突变例数基因突变率/％无突变１４１２．１７
K a t G７４６４．３５
i n h A４３．４８
a p h c００．００
K a t G＋i n h A１４１２．１７
K a t G＋a p h c９７．８３
i n h A＋a p h c００．００
K a t G＋i n h A＋a p h c００．００
合计１１５１００．００
表３㊀徐州市M D RＧT B菌株和敏感株的基因突变
统计分析(I N H)
T a b．３㊀S t a t i s t i c a l a n a l y s i s b e t w e e n M D R．t u b e r c u l o s i s i s o l a t e s
a n d p a nＧs u s c e p t i
b l e i s o l a t e sw i t hm u t a t i o n s a s s o
c i a t e d
w i t h I N HＧr e s i s t a n c e i nX u z h o u付余楠楠
突变耐药株/％敏感株/％t P
k a t G９７(８４．３５)０(０)－０．０００i n h A１８(１５．６５)３(４．５５)５．０４０．０２５a h p C９(７．８３)３(４．５５)０．７３０．３９３合计１０１(８７．８３)６(９．０９)１０７．５６０．０００㊀㊀注：敏感株中突变数为０时用的确切概率法，无t值２．２．２㊀R F P相关基因r p o B突变分析㊀１１５例M D RＧT B菌株检测出无基因突变１６株，基因突变株９９株，突变率８６．０９％.耐R F P的相关r p o B基因突变位点类型和例数分别为单５３１位点５２例(４５．２２％)㊁单５１６位点１０例(８．７０％)㊁单５２６位点２例(１．７４％),５３１＋５１６双位点突变１６例(１３ ９１％)㊁５３１＋５１３双位点突变１４例(１２．１７％)㊁５１６＋５３３双突变位点１例(０ ８７％).５３１＋５１６＋５１３三位点突变４例(３．４８％)，见表４.在比例法研究敏感株６６例中，有８例发生基因突变，突变率１２ １２％，主要突变单５１３位点㊁单５２６位点，见表
５.M D RＧT B菌株和敏感株总体变异率均数比较(t＝９４．９２,P＜０．０５)，二者差异有统计学意义,５３１(P＜０．０５)㊁５１６(P＜０．０５)㊁５３３(P＜０．０５)二者比较差异均有统计学意义.５１３(t＝５．０４,P＞０．０５)㊁５２６(t＝２．４３,P＞０．０５)二者比较差异均没有统计学意义.５１２二者均未检出突变，见表５.
６１０１中国人兽共患病学报２０２０,３６(１２)
表４㊀徐州市M D RＧT B菌株R F P相关基因突变分析
T a b．４㊀A n a l y s i s o fM D R．t u b e r c u l o s i s i s o l a t e g e n e s a s s o c i a t e d
w i t hR F PＧr e s i s t a n c e i nX u z h o u
基因基因突变例数基因突变例率/％无突变１６１３．９１
优酷盛典r p o B５３１５２４５．２２
r p o B５１６１０８．７０
r p o B５３３００．００
r p o B５１３００．００
r p o B５２６２１．７４
r p o B５１２００．００
r p o B５３１＋５１６１６１３．９１
r p o B５３１＋５１３１４１２．１７
r p o B５１６＋５３３１０．８７
r p o B５３１＋５１６＋５１３４３．４８
合计１１５１００．００
表５㊀徐州市M D RＧT B菌株和敏感株的基因突变分析(R F P) T a b．５㊀S t a t i s t i c a l a n a l y s i s b e t w e e n M D R．t u b e r c u l o s i s i s o l a t e s
a n d p a nＧs u s c e p t i
b l e i s o l a t e sw i t hm u t a t i o n s
a s s o c i a t e dw i t hR F PＧr e s i s t a n c e i nX u z h o u
铜绿微囊藻突变耐药株/％敏感株/％t P ５３１８６(７４．７８)０(０)－０．０００５１６３１(２６．９６)０(０)－０．０００５３３１(０．８７)０(０)－１．０００５１３１８(１５．６５)３(４．５５)５．０４０．０２５５２６２(１．７４)５(７．５８)２．４３０．１１９合计９９(８６．０９)８(１２．１２)９４．９２０．０００㊀㊀注：敏感株中突变数为０时用的确切概率法，所以没有t 值,５１２位点无突变
２．２．４㊀M D RＧT B菌株基因突变初复治分层分析㊀通过对１１５例M D RＧT B菌株以患者初复治分层分析，二者无论是，还是利福平，突变情况比较仅i n h A(t＝４．０６,P＜０．０５)突变有统计学意义，见表６.
３㊀讨㊀论
耐多药结核病的发生和流行，无论是对中国还是世界的结核病控制与诊疗带来挑战.在WHO 比尔 盖茨项目资金的支持下，为M D RＧT B患者实施了免费医疗，耐多药结核发病率有所下降，但形势依然严峻.
本研究结果发现耐多药有９种组合，主要是以
表６㊀徐州市M D RＧT B初复治患者菌株基因
突变变化统计分析
T a b．６㊀S t a t i s t i c a l a n a l y s i s o fM D Rt u b e r c u l o s i s i s o l a t e m u t a t i o n s b e t w e e nn e wt u b e r c u l o s i s p a t i e n t s
a n d r e t r e a t e d p a t i e n t s i nX u z h o u
变量初治(n＝４０)复治(n＝７５)t P (突变数)３７６４０．６７０．４１２k a t G３１５３５６２０．４６０．４９７i n h A１０８４．０６０．０４４a h p C３６０．０１０．９２４利福平(突变数)３４６５０．０６０．８０６５３１３２５４０．８９０．３４７５１６１５１６３．４６０．０６３５３３０１－１．０００５１３９９２．１８０．１４０５２６０２－０．５４２
耐I N H＋R F P组合为主，比例为４７．８３％，其次为耐I N H＋R F P＋S M组合，比例为２０．００％，其他组合均占一定比例.这结果与其他地区有差异，主要原因与徐州地区的化疗方案有关，席向宇等[１０]研究也发现这一现象.
本研究利用MT B耐多药突变基因检测芯片检测了徐州市１１５株M D RＧT B的I N H相关k a t G㊁i n h A及a p h C因.１１５例M D RＧT B的耐I N H相关检测出无基因突变株１４株，基因突变株１０１
株，突变率８７．８３％.I N H相关基因突变类型及例数分别为k a t G基因７４例(６４．３５％)㊁i n h A基因４例(３ ４８％)㊁k a t G＋i n h A双基因１４例(１２．１７％)㊁k a t G＋a p h C双位点突变１２．１７％.与６６例敏感株发生６例突变，总突变率９．０９％.主要突变基因i n h A３例(４．５５％)㊁a p h C３例(４．５５％)，二者差异有统计学意义，这充分说明耐多药基因突变的客观性，检测突变基因对临床用药指导有明显的指导意义.k a t G基因单位点突变率(６４．３５％)与浙江地区[１１](６９．３％)等报道相似；与中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核室陈燕等[３]研究(８４ ０％)㊁深圳地区[１２](８４．６％)㊁福建[１３]等地报道区别较大，这说明k a t G３１５突变存在一定的地区差异.k a t G＋i n h A基因(１２．１７％)㊁k a t G＋a p h C双位点突变１２．１７％突变与陈燕等[３]研究也有比较大的区别.无论单个基因还是联合多个基因变异均表现地区间差异，原因应该进一步分析.M D RＧT B菌株和敏感株总体变异率均数比较(t＝１０７．５６,P＜
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１２期刘加彬，等：徐州市耐多药结核耐药分析及分枝杆菌基因突变特征研究
０ ０５)，二者差异有统计学意义.k a t G基因(P＜０ ０５)二者差异有统计学意义.i n h A基因(t＝５ ０４,P＞０ ０５)㊁a p h C基因(t＝０．７３,P＞０．０５)，二者差异无统计学意义.研究表明k a t G基因突变相对稳定，有较强的临床应用价值，可作为耐药诊断的指标.i n h A㊁a p h C因突变表现出不稳定性，仅对临床有参考意义.
本研究利用MT B耐多药突变基因检测芯片检测徐州市１１５株M D RＧT B的R F P相关r p o B基因.１１５株M D RＧT B菌株检测出无基因突变１６株，基因突变株９９株，突变率８６．０９％.R F P相关r p o B 基因突变位点类型和例数分别为单５３１位点５２例(４５．２２％)㊁单５１６位点１０例(８．７０％)㊁单５２６位点２例(１．７４％)㊁单５３３㊁５１３㊁５１２位点没有检出,５３１＋５１６双位点突变１６例(１３．９１％)㊁５３１＋５１３双位点突变１４例(１２．１７％)㊁５１６＋５３３双突变位点１例(０ ８７％).５３１＋５１６＋５１３三位点突变４例(３ ４８％).突变以５３１㊁５１６位点为主,５３１＋５１６㊁５３１＋５１３双位点突变,５３１＋５１６＋５１３三位点突变均有检出，徐州市R F P相关r p o B基因突变位点类型表现出多样性.耐多药株与敏感株突变位点也存在差异，敏感株发生突变的５１３㊁５２６位点，在耐药株中很少检测到.本研究单５３１位点(４５．２２％)与陈燕等[３]研究检测结果(４９．３％)相似，但其他单位点㊁多位点差异较大表现出地区差异.敏感株６６例中，有８例发生基因突变，突变率１２．１２％，主要突变单５１３位点㊁单５２６位点，与陈燕等[３]研究敏感株的无任何突变的检测结果有差异.M D RＧT B菌株和敏感株总体及单个位点变异率均数比较t＝９４．９２,P ＜０．０５，二者差异有统计学意义,５３１(P＜０．０５)㊁５１６(P＜０ ０５)㊁５３３(P＜０．０５)二者比较差异均有统计学意义.５１３(t＝５．０４,P＞０．０５)㊁５２６(t＝２．４３,P＞０ ０５)，二者比较差异均没有统计学意义.５１２二者均未检出突变，本研究表明r p o B基因５３１㊁５１６㊁５３３位点突变相对稳定，有较强的临床应用价值，可作为耐药诊断的指标.５１３㊁５２６㊁５１２位点突变表现出不稳定性，仅对临床有参考意义，其应用价值有待进一步研究.
综上所述，徐州市MT DＧT B患者耐药情况地区特征清晰，与耐I N H或R F P相关基因突变客观存在，并表现出多态性和地区性.与耐I N H相关基因k a t G㊁与耐R F P相关基因r p o B５３１㊁５１６和５３３位点基因突变稳定，可为MT DＧT B诊断指标体系建立提供科学依据，将为徐州市MT DＧT B精准而快速诊疗和控制提供帮助.
利益冲突：无
引用本文格式：刘加彬，张瑞梅，刘成永．徐州市耐多药结核耐药分析及分枝杆菌基因突变特征研究[J]．中国人兽共患病学报,２０２０,３６(１２):１０１４Ｇ１０１８．D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００２Ｇ２６９４．２０２０．００．１６６
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收稿日期:２０２０Ｇ０２Ｇ２８㊀编辑：王晓欢
８１０１中国人兽共患病学报２０２０,３６(１２)
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