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水产品中硝基呋喃的测定

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（第A版 第0次修改）
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第1页  共8页
标  题：水产品中硝基呋喃的测定
第A版  第0次修改
颁布日期：2014年 月 日
1. 目的
使硝基呋喃的测定处于受控状态，保证硝基呋喃检测结果的准确性与一致性；规范参加本项目检测工作人员的操作规程。
2. 适用范围
适用于水产品中硝基呋喃的测定。
3. 引用标准
《动物组织中硝基呋喃类代谢物残留的测定 酶联免疫吸附法》 SB/T 10927-2012
《出口动物源食品中硝基呋喃代谢物残留量的测定 酶联免疫吸附法》 SNT 3380-2012
《无公害食品 水发水产品》 NY 5172-2002
《分析实验室用水规格和试验方法》GB/T 6682-2008
八音盒珍品陈列馆《食品卫生检验方法 理化部分 总则》 GB/T5009.1-2003
4. 概述
硝基呋喃类（Nitrofurans）药物是一种广谱抗生素，因价格较低且效果好，而广泛用于畜禽及水产养殖业，以由大肠杆菌或沙门氏菌所引起的肠炎、疖疮、赤鳍病、溃疡病等。但由于硝基呋喃类药物及其代谢物对人体有致癌、致畸胎副作用,1995年起欧盟禁止硝基呋喃类药物在畜禽及水产动物食品中使用，并严格执行对水产中硝基呋喃的残留检测，2002年美国亦随之制定相应法规。 
5. 原理
本方法的测定基础是竞争性酶联免疫反应，整个方法包括四种硝基呋喃代谢物残留量的检测。在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的硝基呋喃代谢物残留物经衍生化后和微孔条上预包被的偶联抗原竞争相应的抗硝基呋喃代谢物的衍生物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显，样本吸光值与其所含硝基呋喃代谢物残留物的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应稀释倍数即可得出样本中硝基呋喃代谢物残留物的残留量。
6. 试剂和材料
    除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。
6.1. 乙酸乙酯。
6.2. 正己烷。
6.3. 1N盐酸溶液。
6.4. 1N氢氧化钠溶液。
6.5. 呋喃唑酮(AOZ)酶联免疫检测试剂盒
作业指导书
文件编号：
第2页  共8页
标  题：水产品中硝基呋喃的测定
第A版  第0次修改
颁布日期：2014年 月 日
6.6. 呋喃它酮(AMOZ)酶联免疫检测试剂盒
6.7. 呋喃西林代谢物(SEM)酶联免疫检测试剂盒
6.8. 呋喃妥因(AHD)酶联免疫检测试剂盒
7. 仪器和设备
7.1. 微孔板酶标仪：波长450nm/630nm。
均质器。
7.2. 氮气吹干装置。
7.3. 振荡器。
7.4. 离心机：转速4000 r/min以上。
7.5. 刻度移液管。
7.6. 天平：感量0.01g。
7.7. 微量移液器：单道20μL～200μL，100μL～1000μL、多道250μL。
7.8. 洗板机。
8. 呋喃唑酮(AOZ)酶联免疫检测
8.1. 样本处理
8.1.1. 取1 g已均质样品置入离心管中，加入4mL H2O，0.5mL 1 M HCl，100μL衍生试剂。
8.1.2. 振荡混合约1分钟。
8.1.3. 置60℃烘箱，静置3h。
8.1.4. 加入5 mL1×浓缩缓冲液，0.4mL 1M NaOH，5mL乙酸乙酯。
8.1.5. 振荡混合约1分钟。
8.1.6. 以离心机离心10分钟（3000 rpm）。
8.1.7. 取2mL上层液（乙酸乙酯层）至10mL玻璃试管。
8.1.8. 于50℃下，利用氮气将乙酸乙酯吹干(样品快速浓缩系统)。
中石化薛万东8.1.9. 在此玻璃试管中加入1mL正己烷，先将残余物完全溶解（若未能完全溶解，可能会导致回收率降低），再加入1.6mL1×萃取/清洗液。
8.1.10. 振荡混合约1分钟。
8.1.11. 用离心机离心10分钟（3000 rpm） (若不分层则振荡混合后于沸水加热3分钟再离心一次)  。
8.1.12. 取出下层液（水层）准备进行测试(一个检测需0.05mL)。
稀释倍数: 4
8.2. 酶联免疫测定
使用前将试剂盒置于室温（20-25℃）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自封袋，保存于 2-8℃不要冷冻；
8.2.1. 将标准品对应微孔按序编号后分别加入50μL标准溶液。
8.2.2. 在其他的微孔加入50μL已完成前处理的样品溶液。
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第3页  共8页
标  题：水产品中硝基呋喃的测定
第A版  第0次修改
颁布日期：2014年 月 日
8.2.3. 再于每一微孔另加入100μL已完全回温的酶标记物。
8.2.4. 轻敲酶标板四周，使其充分混合后于室温下避光静置30分钟。
8.2.5. 将微孔中的反应液甩掉，再将清洗液加满每一微孔后甩掉，重复3次。
8.2.6. 最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。
8.2.7. 于每一微孔加入显液100μL后，轻敲酶标板四周，使其充分混合。
8.2.8. 于室温下避光静置20分钟。
8.2.9. 加入反应终止液，每一微孔加入100μL。
供热系数8.2.10. 酶标仪以单波长450nm或双波长450nm/650nm读值。
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9. 呋喃它酮(AMOZ)酶联免疫检测
9.1. 样本处理
9.1.1. 取1 g已均质样品置入离心管中，加入4mL H2O，0.5mL 1 M HCl，100μL衍生试剂。
9.1.2. 振荡混合约1分钟。置60℃烘箱，静置3h。
9.1.3. 加入5 mL1×浓缩缓冲液，0.4mL 1M NaOH，5mL乙酸乙酯。
9.1.4. 振荡混合约1分钟。
9.1.5. 以离心机离心10分钟（3000 rpm）。
9.1.6. 取2mL上层液（乙酸乙酯层）至10 ml玻璃试管。
9.1.7. 于50℃下，利用氮气将乙酸乙酯吹干(样品快速浓缩系统)。
9.1.8. 在此玻璃试管中加入0.8mL正己烷，先将残余物完全溶解（若未能完全溶解，可能会导致回收率降低），再加入0.8mL1×萃取/清洗液。
9.1.9. 振荡混合约1分钟。
9.1.10. 用离心机离心10分钟（3000 rpm） (若不分层则振荡混合后于沸水加热3分钟再离心一次)  。
杜香油9.1.11. 取出下层液（水层）准备进行测试(一个检测需0.05mL)。
稀释倍数: 2
9.2. 酶联免疫测定
使用前将试剂盒置于室温（20-25℃）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自封袋，保存于 2-8℃不要冷冻；
9.2.1. 将标准品对应微孔按序编号后分别加入50μL标准溶液。
9.2.2. 在其他的微孔加入50μL已完成前处理的样品溶液。
9.2.3. 再于每一微孔另加入500μL已完全回温的酶标记物。
9.2.4. 轻敲酶标板四周，使其充分混合后于室温下避光静置30分钟。风钻工
9.2.5. 将微孔中的反应液甩掉，再将清洗液加满每一微孔后甩掉，重复3次。
9.2.6. 最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。
9.2.7. 于每一微孔加入显液100μL后，轻敲酶标板四周，使其充分混合。
9.2.8. 于室温下避光静置20分钟。
9.2.9. 加入反应终止液，每一微孔加入100μL。
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第4页  共8页
标  题：水产品中硝基呋喃的测定
第A版  第0次修改
颁布日期：2014年 月 日
9.2.10. 酶标仪以单波长450nm或双波长450nm/650nm读值。
10. 呋喃西林代谢物(SEM)酶联免疫检测
10.1. 样本处理
10.1.1. 取1 g已均质样品置入离心管中，加入4mL H2O，0.5mL 1 M HCl，100μL衍生试剂。
10.1.2. 振荡混合约1分钟。
10.1.3. 置60℃烘箱，静置3h。
10.1.4. 加入5 mL1×浓缩缓冲液，0.4mL 1M NaOH，5mL乙酸乙酯。
10.1.5. 振荡混合约1分钟。
10.1.6. 以离心机离心10分钟（3000 rpm）。
10.1.7. 取2mL上层液（乙酸乙酯层）至10 ml玻璃试管。
10.1.8. 于50℃下，利用氮气将乙酸乙酯吹干(样品快速浓缩系统)。
10.1.9. 在此玻璃试管中加入1mL正己烷，先将残余物完全溶解（若未能完全溶解，可能会导致回收率降低），再加入1.6 mL1×萃取/清洗液。
10.1.10. 振荡混合约1分钟。
10.1.11. 用离心机离心10分钟（3000 rpm） (若不分层则振荡混合后于沸水加热3分钟再离心一次)  。
10.1.12. 取出下层液（水层）准备进行测试(一个检测需0.1mL)。
稀释倍数: 4
10.2. 酶联免疫测定
使用前将试剂盒置于室温（20-25℃）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自封袋，保存于 2-8℃不要冷冻；
10.2.1. 将标准品对应微孔按序编号后分别加入100μL标准溶液。
10.2.2. 在其他的微孔加入100μL已完成前处理的样品溶液。
10.2.3. 再于每一微孔另加入500μL已完全回温的酶标记物。
10.2.4. 轻敲酶标板四周，使其充分混合后于室温下避光静置30分钟。
10.2.5. 将微孔中的反应液甩掉，再将清洗液加满每一微孔后甩掉，重复3次。
10.2.6. 最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。
10.2.7. 于每一微孔加入显液100μL后，轻敲酶标板四周，使其充分混合。
10.2.8. 于室温下避光静置20分钟。
10.2.9. 加入反应终止液，每一微孔加入100μL。
10.2.10. 酶标仪以单波长450nm或双波长450nm/650nm读值。
11. 呋喃妥因(AHD)酶联免疫检测
11.1. 样本处理
11.1.1. 取1 g已均质样品置入离心管中，加入4mL H2O，0.5mL 1 M HCl，100μL衍生试剂。
11.1.2. 振荡混合约1分钟。

本文发布于:2024-09-23 19:27:10，感谢您对本站的认可！

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