1范围
本标准方法适用于乳粉中β-胡萝卜素的测定。
2方法原理
样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪造化物分离，用石油醚萃取后，用高效液相谱法，紫外检测器定量测定。 3试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。
3.1高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）。
3.2 异丙醇：谱纯。
3.4 石油醚：分析沸程30～60℃。
3.5 甲醇：谱纯。
3.6 正己烷：谱纯。
3.7 无水乙醇：分析纯
3.8 无水硫酸钠：分析纯
3.9 β-胡萝卜素标准溶液。
3.9.1 β-胡萝卜素标准储备液： 100μg/mL。
准确称取β-胡萝卜素标准品10mg，用 3 mL左右的溶解后用正己烷定溶至100 mL 棕容量瓶中，此溶液标样浓度为100μg/mL（于冰箱中冷冻存放，使用期限不超过3个月）。
3.9.2 β-胡萝卜素标准工作液。
从β-胡萝卜素标准储备液中吸取5 mL溶液转入100 mL棕容量瓶中，用正己烷定容至刻度，得到浓度为5μg/mL的标准工作液。
注：配制后的标准溶液用前需标定，具体操作见附录B
4仪器
冯顺桥4.1高效液相谱仪，具有可变波长的紫外检测器。
4.2旋转蒸发器。
4.3斡旋震荡混合器。
4.4氮吹仪。
4.5恒温水浴震荡器。
4.6 超声波清洗器。
5操作步骤
5.1样品处理:
5.1.1 含淀粉的样品。
称取混合均匀的样品约5g（精确到0.1mg），放入250mL三角烧瓶中，加入lgTaka淀粉酶（3.1），再加入约30mL45～50℃的蒸馏水溶解，混合均匀后，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min。
5.1.2 不含淀粉的样品。
称取混合均匀的样品约5g（精确到0.1mg），置于250mL三角烧瓶中。
5.2 测定液的制备：
5.2.1 于上述处理的样品溶液中加入1g 维生素C，再加入50mL无水乙醇，充分混匀后加20mL氢氧化钾溶液（3.3），再混匀后，盖上瓶塞，在60℃的恒温水浴震荡器（4.5）上皂化30min后。立刻冷却到室温。
5.2.2 将皂化液转入500mL分液漏斗中，用100mL水分几次冲洗平底烧瓶，洗涤液并入分液漏斗中。
5.2.3 于上述分液漏斗中，加入100mL石油醚（3.4），盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1min。在振摇过程中，注意释放瓶内压力，静置分层，将水相放入另一500mL分液漏
斗中。重复上述萃取过程二次，合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液约三次至中性，通过无水硫酸钠过滤脱水，在40℃下，于旋转蒸发器上蒸至近干（绝不允许蒸干）后，用石油醚转移至10mL容量瓶中，定容。
5060lu5.2.4 从上述容量瓶中取8mL石油醚溶液放入试管B中，用氮气将试管B中的石油醚吹干，于试管B中加1mL正己烷，斡旋震荡30S，用来测定β-胡萝卜素。
5.3 β-胡萝卜素的测定
5.3.1 推荐谱条件
火焰山来的鼓手谱柱：硅胶柱SG120 5um size4.6mm×250mm。
流动相：正己烷与异丙醇按体积比50：1混和。
流速：1mL/min。
波长：453nm。
tt柱温：30℃。
灵敏度：0.005AV/MV 。 注射体积：100μL 。 5.3.2 样品测定
注射100μL β-胡萝卜素标样和100μL 样品溶液，得到标样和样品溶液中β-胡萝卜素的峰面积(或峰高)。 6 分析结果的表述
样品中β-胡萝卜素（ug/100g ）=
式中：
双氧水碘化钾V ——样品液体积，mL 。 m ——样品的质量，g 。
As ——进样液中β-胡萝卜素的峰面积（或峰高）。 Asd ——标样中β-胡萝卜素的峰面积（或峰高）。 Csd ——标样中β-胡萝卜素的质量浓度，μg/mL 。
n ——样品稀释倍数 7 允许差
难忘的教诲
同一样品的两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。 8 注意事项
8.1样品处理过程避免光线直射。
8.2萃取时若出现乳化现象，可以适当加点乙醇，消除乳化现象。 8.3 旋蒸时不能蒸干，且要用冷水冷却后再取下来。 附录
A 、 标准溶液浓度校正方法
标准溶液配制后需要对所配制的标准溶液进行标定，具体操作如下：
取β-胡萝卜素标准溶液若干微升，分别稀释至3.00ml 乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值，用比吸光系数计算出该维生素的浓度。测定条件如表1所示。
表1
m
A n V c A sd sd s ⨯⨯⨯⨯⨯100
浓度计算按式（1）：
C 1=
E
A ×31000.31001-⨯⨯
V ………………（1） 式中：
C 1——β-胡萝卜素浓度，单位为克每毫升（g/ml ）； A ——β-胡萝卜素的平均紫外吸光值； V ——加入标准液的量，单位为微升（ul ）； E ——β-胡萝卜素的1%比光系数；
3
10
00
.3-⨯V ——标准液稀释倍数。
B 、 标准品及样品谱图
图1 β-胡萝卜素标准品谱图
图2 β-胡萝卜素样品谱图
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