常用试剂配制及显方法

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常用试剂配制及显方法
(一) 通用显剂
1. 重铬酸钾——硫酸
一般有机物均能显,不同化合物显示不同颜。
喷洒剂:5克重铬酸钾溶于100ml,40%硫酸中。喷洒后加热至150oC斑点出现。
2. 碘:检查一般有机物
(1) 碘蒸汽:在一个密闭玻璃皿先放入碘片,使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显,有时在缸内放一盛水的小杯,增加缸内的湿度,可提高显的灵敏度。
DNA变性与杂交(2) 0.5%碘的氯仿溶液,取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液,斑点转成蓝。
3. 碘——碘化钾溶液:很我有机物虽黄(配法见后)。
4. 5%——磷钼酸乙醇溶液:喷后120oC烤,还原性物质显兰,再用氨气熏,则背景变为无。
5. 20%磷酸乙醇溶液:喷后120oC,还原性物质显兰。
6. 碱性高锰酸钾试剂:还原性物质在淡红背景上显黄。溶液I:1%高锰酸钾溶液。
溶液II:5%碳酸钠溶液。
溶液I和溶液II等量混合使用。
7. 中性0.05%高锰酸钾溶液:易还原性物质在淡红背景上显黄。
8. 硝酸银——氢氧化铵(Tollen’s--zoffaronl)试剂,喷后105oC烤5~10分钟,还原性物质显黑。
溶液I:0.1N硝酸银溶液。      溶液II:氢氧化铵溶液。
临用前溶液I和溶液II以1:5混合。注意:放久则形成爆炸性的叠氦化银。
9. 硝酸银——高锰酸钾试剂:还原性物质在兰绿背景上立即显黄。
溶液I:0.1N硝酸银溶液:2N氢氧化铵溶液:2N氢氧化钠(1:1:2)。临用前配制。
溶液II:高锰酸钾0.5g,碳酸钠1g,加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。
10.四唑试剂:还原性物质,在室温或微加热时显紫。
    溶液I:0.5%四唑兰甲醇溶液。  溶液II:6N氢氧化钠溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。
11.铁:三氯化铁试剂:还原性物质显兰,再喷射2N/L盐酸溶液,则兰加深。
    溶液I:1%铁溶液。    溶液II:2%三氯化铁溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。
12.浓硫酸:甲醇(1:1)溶液,或5%硫酸的乙醇溶液,喷后100oC烤15分钟,各种不同物质显不同颜。
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13.萤光显剂溶液:试喷以下一溶液,不同的物质财富在萤光背景上可能显黑或其他萤光斑点。
A:0.2%2.7——二氯萤光素乙醇溶液。
B:0.01萤光素乙醇液
C:0.1%桑素乙醇溶液
D:0.05罗丹明B乙醇溶液
E:萤光素一溴,检不饱和化合物。
(1)0.1%萤光素乙醇溶液
(2)5%溴的CCL4溶液。
喷洒(1)以后,放置(2)溶液的缸内,可在UV光下检查萤光,萤光素与溴 化合成曙红(ensln)(无萤光),而光饱和化合物则与溴加成,保留了原来的萤光;若点样量较多,则成黄 斑点,底板成红。
14.碱式醋酸铅试剂(可做喷洒或沉淀试剂,多种有机化合物均反应)。
    取Pbo14g置乳钵内,加蒸馏水10ml,研后成糊状后,倾入玻璃瓶中,乳钵用10ml蒸馏水洗净,洗液并入瓶中,加醋酸铅溶液(取醋酸铅22g,加蒸馏水70ml制成)70ml,用力振摇,放置七天,滤过,并自滤器中添加适量新沸过的冷蒸馏水使成100ml即得。
二)生物碱显剂
通用显剂:
1.改良碘化铋钾(Dragendorff)试剂:生物碱和某些含氯化合物显橙红。
溶液I:碱式硝酸铋0.85g,溶于冰乙酸10ml和40ml.
溶液II:碘化钾0.8g溶于水20ml.
储存液:溶液I和溶液II等量混合(置棕瓶中杨以长期保存)。
显剂:储存1ml与冰乙酸2ml和水70ml混合,用前配制。
2.碘化铂钾(碘铂酸)试剂,不同的生物碱显不同的颜。10%六氯化铂酸溶液3ml和水97ml混合,加6%碘化钾溶液100ml,混合均匀,临用前配制。
3.碘—碘化钾(Wagner)试剂:生物碱 显棕褐。
碘1g和碘化钾10g溶于50ml水中,加热,加冰醋酸2ml用水稀释到100ml。
4.改良碘化铋钾:碘,碘化钾(1:1)试剂;生物碱显紫棕或灰黑。
5.硫酸铈——硫酸试剂(改良sonnensclein试剂):喷后110oC烤几分钟,不同的生物碱显不同的颜。硫酸铈0.1g悬浮于水4ml中,加三氯化乙酸1g,加热煮沸,放冷,逐滴加入浓硫酸直到混浊消失为止。
6.碘化氯钾(vmayer)试剂(沉淀试剂):取HgCL2(毒)1.35g加蒸馏水60ml溶解后,量取碘化钾5g,加碘馏水10ml使溶解将两液混合,加蒸馏水稀释使成100ml即得。
7.硅钨酸(Bertrand)试剂(沉淀试剂):5g硅钨酸溶于100ml蒸馏水中,加稀盐酸使呈酸性反应即得。
(三)强心甙显剂
1.碱性3.5——二硝基苯甲酸试剂:强心甙显紫红、几分钟后褪。2%3.5——二硝基苯甲酸甲醇溶液与2N氢氧化钾溶液,用前按劳1:1混合。
2.碱性三硝基苯:在浅橙背景上显橙红。
溶液I:间三硝基苯100mg。溶于二甲基甲酰胺40ml,加浓HCL3~4滴,加水至100ml,避光能长期保存。
溶液II:5%碳酸风溶液   
先喷溶液I,再喷溶液II,喷后90~103.0oC烤5分钟。
3.三试剂:喷后110oC烤7~10分钟,紫外光下观察萤光。
试剂I:25%三的乙醇或氯仿溶液,配制后可放置数日。或用试剂II:上述乙醇溶液用前每10ml加过氧化氢溶液4滴或新配3%氯铵T水溶液按4:1混合。
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4.三氯化锑试剂:喷后100oC烤5分钟,日光下或紫外光下观察。共生术
25%或饱和的三氯化锑氯仿溶液。
5.磷酸——溴试剂
溶液I:10%磷酸溶液。    溶液II:溴化钾饱和溶液:25%盐酸溶液(1:1:1)。
薄层用溶液I喷洒后,在125oC烤12分钟(薄层太湿时则烤的时间可适当延长),在紫外光下观察一次,将薄层再烤热,趁热喷溶液II,再在紫外光下观察。
6.Keller——Kllianl试剂:(检查α——去氧糖)
试液:100ml冰HAC和FeCL3试液0.5ml混匀,试样1ml混匀。试样1ml加试液2ml溶解后,沿试管壁滴入浓硫酸2接触面即显棕。渐变浅绿,兰。最后HAC层全部染成兰。
(四)黄酮甙显剂
      黄酮类成份在紫外光下大多显出不同颜,用氨熏,喷三氯化铝溶液或喷氢氧化钠等
碱性溶液,则颜 变深或变。
1.氨气
2.10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液。
3.1%或5%碳酸钠溶液。
4.1%或5%三氯化铝乙醇溶液。
5.2%乙酸镁甲醇溶液。
6.饱和三氯化锑的氯仿溶液,100oC烤5分钟。
以上六种试剂在喷前喷后将薄层置日光与紫外光下观察。
7.1~2%三氯化铁乙醇溶液。
8.1%中性乙酸铅或碱式乙酸铅溶液。
9.0.1N硝酸银溶液。
10.铁氰钾——三氯化铁试剂。
溶液I:2%铁溶液。      溶液II:2%三氯化铁溶液。临用前溶液I与溶液II等量混合。
11.硼氢化钾试剂:双氢黄酮化合物显红、橙红。
溶液I:1~2%硼氢化钾(钠)异丙醇溶液,必须新鲜配制。溶液II:浓盐酸
先喷I、5分钟后放入盐酸蒸气槽内。
12.Shinoda试剂:在混有锌粉的硅胶薄层上喷盐酸,黄酮醇显红紫。制备硅胶薄层时,加入2%w/w锌粉混合,薄层展开后盐酸溶液,如展开剂为酸性,可在展开后先喷锌——丙酮混悬液,再喷盐酸溶液。
罗丹明——氨试剂。
溶液I:0.1%罗丹明B的4%盐酸溶液。  溶液II:浓氨溶液。
先喷溶液I,然后再将薄层放入氨汽槽内。
14.对氨基苯磺酸试剂。
溶液I:对氨基苯磺酸盐溶液。  溶液II:5%亚硝酸钠溶液。
将对氨基苯磺酸0.3g溶液对8%盐酸溶液100ml中,到紫溶液25ml用冰冷却,加预冷的溶液II1.5ml。
15.硼酸——柠檬酸试剂
溶液I:饱和硼酸的丙酮溶液。    溶液II:柠檬酸丙酮溶液。
先喷溶液I,再喷溶液II。
16.福林试剂(Folin Ciocalteu试剂)
钨酸钠10g和钼酸钠2.5g溶于70ml水中,再缓缓加85%磷酸5ml和浓盐酸10ml,将混合液回流煮沸10小时,然后加硫酸锂15g,水5ml及溴1滴,再回去流煮沸15分钟,所得溶液冷却后移置100ml溶量瓶中并用水稀释到刻度(贮备液),溶液应不显绿。
溶液I:20%碳酸钠溶液。      溶液II:临用前上述贮备液1份用水三分稀释。
先喷溶液I,稍干再喷溶液II。
(五)皂甙灶显剂
1.25%磷钼酸乙醇溶液:喷后在140oC加热5~10分钟皂甙元均呈深兰。
2.三氯化锑浓盐酸或氯仿溶液:喷后在90oC烤10分钟(应在通风厨中进行),不同的皂甙元在可见光或紫外光下显出各种颜。
3.硫酸:甲醇(1:2)溶液,喷后加热,不同的皂甙元可显红褐、紫、黄或黑,所显颜与温度无关。
4.氟磺酸:乙酸(1:1)溶液,喷后130oC加热5分钟。各种皂甙元可显天兰紫、粉红、淡棕等,在紫外光下也显不同萤光。远东共和国
5.碘蒸汽:薄层置于碘蒸汽筒中,皂甙无皆显棕黄斑点。
6.三氯快乙酸或三:乙酸(1:2)溶液,喷后在100oC加热20分钟皆显黄。
7.2%血球生理盐水混悬液(溶血试验、检皂甙)。
取新鲜兔血(由心脏或静脉取血)适量,用洁净小毛刷迅速搅拌除去纤维蛋白,并用生理盐水反复离心洗涤至上清液无后,量取沉降红血球(可以管的离心管通接读取)用生理盐水配成2%混悬液贮冰箱内备用(贮存期2~3天)。
六)蒽醌甙显剂
    蒽醌及其甙本身在日光下显黄,在紫外光下则显黄,红橙萤光。在薄层上用氨熏或喷氢氧化钾与碱溶液,则颜变深或变。
1.氨气
2.10%氢氧化钾、甲醇溶液。
3.3%氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。
4.50%的苯溶液。
5.饱和喷酸锂溶液。
6.饱和硼砂溶液。
7.0.5%乙酸镁甲醇溶液:喷后90oC烤5分钟。
8.0.5%乙酸铝溶液,喷后紫外光下看萤光。
9.0.5%牢固兰B试剂,喷后则原来氢氧化钠、锂、钾等溶液碱溶液显萤光的斑点此时在可见光下显棕、紫或绿。也可先喷本试剂,再喷稀氢氧化钠溶液而显。也用于酚类及能偶芳香胺的显。
溶液I:新配的0.5%牢固兰B盐的水溶液。  溶液II:0.1N/L氢氧化钠溶液。
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先喷溶液I,喷溶液II。
(七)香豆精甙显剂

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