席夫碱与牛血清蛋白521

紫外光度法研究２-氨基-５-硝基吡啶水杨醛席夫碱与牛血清蛋白的相互作用

化学工程与工艺学生李伟栋

指导老师庞艳玲

摘要：采用紫外分光光度法研究了自制2－氨基-5－硝基吡啶水杨醛席夫碱试剂与牛血清蛋白（BSA）的相互作用。确定了最佳条件：支持电解质氯化钠的浓度为0.15mol/L，反应时间为50分钟，室温。在此条件下，席夫碱和牛血清蛋白相互作用形成稳定的络合物，络合物最大吸收波长为353nm，与2－氨基-5－硝基吡啶水杨醛席夫碱试剂的最大吸收波长363nm比较，紫移了10nm，络合比为40:1，摩尔吸光系数是8.7×103 L·mol-1·cm-1, BSA浓度在3.45～400mg/L间具有良好的线性关系, 检出限为武经七书直解1.03mg/L。加标回收率在93.3%～100.3%之间。

关键词：2-氨基-5－硝基吡啶水杨醛席夫碱牛血清蛋白（BSA）紫外分光光度法

UV spectrophotometric study of 2 - amino -5 - nitropyridine interaction Salicylideneaminio base with bovine serum albumin

Student majoring in Chemical Engineering and Technology Li weidong

Tutor Pang yanling

Abstract: Studied using UV spectrophotometry self - made - Amino - 5 - nitropyridine salicylaldehyde Schiff base reagent with bovine serum albumin (BSA) interactions. Determine the optimal conditions were as follows: concentration of the supporting electrolyte is sodium chloride 0.15mol / L, the reaction time was 50 minutes at room temperature, 40:1 complex.Under this condition, the Schiff base and bovine serum proteins interact to form a stable complex, the maximum absorption wavelength of 353nm (with a 2 - amino-5 - Compare Nitropyridine salicylaldehyde Schiff base reagent maximum absorption wavelength of 363 purple shifted 10nm) optimal concentration of BSA is 5.1×10-6mol / L

Key words: 2 - amino-5 - Compare Nitropyridine salicylaldehyde Schiff base reagent bovine serum albumin (BSA) UV spectrophotometry

引言席夫碱是一类非常重要的含氮配体，它是由醛或酮的羰基和伯胺、肼及其衍生物的胺基基团缩合而得[1]。由于席夫碱在合成上具有很大的灵活性，同时席夫碱类化合物具有一定的药理学和生理学活性[2]，如明显的抗结核、抗癌、抗菌等药理作用，使得席夫碱及其配合物的研究十分广泛。本文合成了2－氨基-5－硝基吡啶水杨醛席夫碱，考察了2－氨基－5－硝基吡啶水杨醛席夫碱与牛血清蛋白(BSA)的相互作用。

通过探究适宜条件下席夫碱与牛血清蛋白相互作用的紫外光谱，考查了复合物形成的最佳反应时间、反应温度、共存物质的干扰等条件，通过对实验数据的分析得到了一定条件下体系吸光度与牛血清蛋白浓度之间的线性关系，从而建立了席夫碱与牛血清蛋白相互作用的紫外分光光度法。方法操作简单，灵敏度高，可用于牛血清蛋白的快速测定。

１　实验

1.1 主要试剂和仪器

TU-1810PC型紫外吸收分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司生产)，配石英比皿(1 cm)；ESJ-180型电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）； HH-S-2.4型电热恒温水浴锅（

山东潍坊精鹰医疗器械有限公司）；pHS-3C酸度计(上海精密科学仪器有限公司)

牛血清蛋白（北京奥博星生物技术有限责任公司）；2－氨基－5－硝基吡啶水杨醛席夫碱，自制。

5.1×10-5mol/L BSA溶液：称取牛血清蛋白0.3450ｇ。分子量以67000计算另一种温暖[3]，溶于蒸馏水，转移至100mL容量瓶，定容至刻度线记为A溶液。

2－氨基-5－硝基吡啶水杨醛席夫碱溶液：称取8.4mg2－氨基－5－硝基吡啶水杨醛席夫碱于烧杯中，溶于适量DMF有机溶剂，转移至100ml容量瓶，定容至刻度线，记为Ｂ１溶液，取10mlＢ１溶液转移至100ml容量瓶，加DMF定容至刻度线并摇匀，记为Ｂ２溶液。

BR缓冲溶液的配制：在100 ml三酸混合液(磷酸､乙酸､硼酸，浓度均为0.04 mol/L)中,用0.2 mol/LNaOH西安邮电学院学报溶液调至不同pH值的缓冲溶液。

实验用水如未特别注明均为二次蒸馏水，所用试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 2-氨基-5-硝基吡啶水杨醛Schiff碱的合成分别取1.0g（7.8mmol）2-氨基-5-硝基吡啶、水杨醛、无水乙醇于圆底烧瓶中，加热搅拌回流2h，冷却析出大量固体，抽滤，干燥，最后得到2-氨基-5-硝基吡啶水杨醛Schiff碱1.6g，产率88.4%。黄晶体，mp:120-122℃。

Schiff碱的合成属于缩合反应，它涉及到加成、重排等过程，反应物立体结构及电子效应都起着重要作用[4]。反应机理如下:

R1，R2，R3=H,烷基，环己基，芳香基，杂环等

反应路线图如下[5]：

1.2.2 席夫碱与牛血清蛋白的相互作用研究于10mL比管中，依次加入4.0mL B２溶液（席夫碱溶液）、1mLA溶液（牛血清蛋白标准溶液)、2mL 0.15mol/L的pH为6.96的Tris-HCL缓冲溶液太中银铁路,用二次蒸馏水定容。以相应的缓冲溶液作参比[6]，在室温下反应50min之后，用1cm的石英标准比皿测定353nm处的吸光度值。

2 结果与讨论

2．1 席夫碱试剂结构表征

2.1.1 红外光谱分析以KBr压片法，在500～4000cm-1内扫描，2-氨基-5-硝基吡啶水杨醛Schiff碱及其络合物的红外光谱主要特征吸收数据见表1。

表1 2-氨基-5-硝基吡啶水杨醛Schiff 碱及其络合物的红外光谱主要特征吸收数据（cm-1）[

化合物
2-氨基-5-硝基吡啶水杨醛Schiff碱	1601.85	1565.77 1454.74 1377.02
2-氨基-5-硝基吡啶水杨醛Schiff碱氯化铁络合物	1608.79	1538.01 1454.74 1384.89
2-氨基-5-硝基吡啶水杨醛Schiff碱氯化镍络合物	1629.61	1604.63 1538.01 1443.64
2-氨基-5-硝基吡啶水杨醛Schiff碱氯化钴络合物公共基础设施	1637.93	校正死亡率1607.40 1529.68 1457.52
2-氨基-5-硝基吡啶水杨醛Schiff碱乙酸铜络合物	1612.95	1601.18 1538.01 1440.86