知识四十四 钙、磷、镁的检验
教学目的：
掌握血钙、血磷、血镁的测定方法、基本原理、方法学评价及临床意义。
重点：OCPC法测定血钙、比法测定血镁的基本原理、方法学评价及临床意义。
难点：OCPC法测定血钙、比法测定血镁的基本原理、方法学评价。
aod教学方法和手段：课堂讲授为主，多媒体教学为辅，课堂提问与讨论相结合。
授课时数：1学时
韦企平教学内容及组织：
一、钙的测定
化学法 ①滴定法（氧化还原滴定，络合滴定）；
②比法（邻甲酚酞络合法，甲基麝香草酚蓝法）。
血钙测定
物理法 ①火焰光度法；②ISE法；③原子吸收分光光度法； ④同位素稀释质谱法。
1.EDTA-Na2络合滴定法 在碱性溶液中，血清钙与钙红指示剂结合成可溶性的复合物，使溶液呈淡红，EDTA-Na豪杰解霸30002对钙有很大的亲和力，能与复合物中的钙络合，使钙红指示剂重新游离，溶液变蓝，根据EDTA-Na2滴定用量可计算出血清钙含量。 钙 ＋ 钙红 ————→钙-钙红复合物 淡红
钙-钙红复合物 ＋ EDTA-Na2————→EDTACa ＋ 钙红咏箸 蓝
钙指示剂除钙红外，还有依地铬黑T（红→蓝），钙黄绿素（黄→绿），紫红酸铵（红→紫）。钙红指示剂终点明显，不受血清镁干扰，血清镁在强碱性条件下生成Mg（OH）2↓，指示剂在强碱性条件下不稳定，加指示剂后应立即滴定。
操作简便，无需特殊仪器设备，适合于基层医院，但终点判断人为误差较大，溶血、黄疸影响终点判断。
2.邻甲酚酞络合酮法（O-CPC） 邻甲酚酞络合酮是一种金属络合染料，也是一种酸碱指示剂，在碱性溶液中能与钙和镁螯合，生成紫红螯合物（吸收峰575nm），作钙测定时，加入8-羟基喹啉消除镁的干扰。
Mg2+ ＋ 8-羟基喹啉————→可溶性络合物
Ca2+ ＋ 邻甲酚酞络合酮————→紫红螯合物
灵敏度很高，试管、器皿如有微量的钙污染亦会引起误差，最好使用一次性试管，所有试剂置塑料瓶中保存。
3.甲基麝香草酚蓝法（MTB） 血清钙在碱性溶液中与甲基麝香草酚蓝（MTB）结合，生成一种蓝络合物，加入8-羟基喹啉消除镁干扰。
显稳定，线性范围大，溶血、黄疸无干扰。
局域表面等离子体共振4.离子选择电极法（ISE） 此法迅速、简便、灵敏度高、重复性好，并可同时测定总钙和离子钙，离子钙测定最好用血清，不用抗凝剂，在急需检测结果时可用肝素抗凝。
【正常参考值】成人总钙2.25～2.75mmol/L
离子钙 1.15～1.42mmol/L
【临床意义】 血清钙增高常见于甲状旁腺功能亢进症、维生素D过多症、多发性骨髓瘤、结节病引起肠道过量吸收钙而使血钙增高。血清钙降低可引起神经肌肉应激性增强而使手足搐搦，主要见于：①甲状旁腺功能减退：如甲状腺手术摘除时伤及甲状旁腺而引起机能减退，血清钙可下降至1.25～1.50mmol/L；②慢性肾炎尿毒症时，肾小管中维生素D31-羟化酶不足，活性维生高层建筑混凝土结构技术规程素D3生成减少，使血清总钙下降，由于此类病人多伴有代谢性酸中毒而使离子钙增高，尽管总钙减少，但离子钙不低，所以不易发生手足搐搦；③佝偻病与软骨病：体内缺乏维生素D，钙吸收障碍，血清钙、磷均偏低；④吸收不良性低血钙：在严重乳糜泻时，饮食中的钙与不吸收的脂肪酸生成钙皂而排出；⑤大量输入柠檬酸盐抗凝后，可引起低血钙。
二、无机磷测定
目前还不能直接测定人体内 的磷元素，各种方法都是直接地分析两种磷酸盐阴离子（HPO42－、H2PO4－），常用的方法有磷钼酸法，染料法，酶法。
1.磷钼酸法 以三氯醋酸沉淀蛋白，在无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂，与无机磷结合成磷钼酸，再以硫酸亚铁为还原剂，还原成钼蓝。
（NH4）6Mo7O24 ＋ 3H2SO4 ＋ 4H2O——→7H2MoO4＋3（NH4）2SO4
12H2MoO4 ＋ H3PO4——→12MoO3·H3PO4 ＋ 12H2O
12MoO3·H3PO4 ＋ 还原剂——→ 钼蓝
还原剂有很多种，1-氨基-2-萘酚-4-磺酸，应用历史较久，试剂不太稳定，显时间长，灵敏度不高。氯化亚锡，灵敏度较高，颜强度随显时间时间而改变，偏离Beer定律。硫酸亚铁，显较稳定。
2.孔雀绿直接显法 血清经浓尿素溶液稀释后，用孔雀绿-钼酸试剂显，加入吐温-20使标准液与血清标本显反应速度接近。
灵敏度较高，但影响因素多，重复性差，显不稳定。
3.酶法
发底物 555nm
【临床意义】 血清磷增高见于：①甲状旁腺功能减退症，由于激素分泌减少，肾小管对磷的重吸收增强使血磷增高；②慢性肾炎晚期磷酸盐排泄障碍而使血磷滞留；③维生素D过多，促进肠道的钙、磷吸收，使血清钙、磷含量增高；④多发性骨髓瘤及骨折愈合期。
血磷减低见于：①甲状旁腺功能亢进症时，肾小管重吸收磷受抑制，尿磷排泄增多，血磷降低；②佝偻病或软骨病伴有继发性甲状旁腺增生，使尿磷排泄增多而血磷减低；③连续
静脉注入葡萄糖并同时注入胰岛素或胰腺瘤伴有胰岛素过多症，糖的利用均增加，这两种情况需要大量无机磷酸盐参加磷酸化作用，而使血磷下降；④肾小管病变时，肾小管重吸收磷功能发生障碍，血磷降低，如范可尼(Fanconi)综合征。
三、镁的测定
化学法 钙镁试剂比法，达旦黄比法，甲基麝香草酚蓝比法。传统方法
测定方法 物理法 原子吸收分光光度法，（参考方法）同位素稀释中子活化法（决定性方法）
酶法 新进展，将成为新的自动方法。
1.钙镁试剂（Calmagite）比法 血清镁在碱性条件下与钙镁试剂生成紫红络合物，颜深浅与镁浓度成正比。加入EGTA 乙二醇双（β-氨基乙醚）-N，N，Nˊ，Nˊ-四乙酸，可消除钙的干扰。吸收峰520nm。
显稳定，操作简便，快速，可手工操作，也可用于自动化分析。
2.原子吸收分光光度法 血清经酸性氯化镧溶液作50倍稀释，直接用原子吸收分光光度计检测285.2nm的吸光度。
操作简便，准确，精密度好，可同时进行钙的测定422.7nm。
3.酶法
【正常参考值】0.67～1.23mmol/L
【临床意义】 血清镁增高见于：①肾脏疾病，如急性或慢性肾衰竭；②内分泌疾病，如甲状腺功能减退症、阿狄森病和糖尿病昏迷；③多发性骨髓瘤、严重脱水症等血清镁也增高。
血清镁降低见于：①镁由消化道丢失，如长期禁食、吸收不良或长期丢失胃肠液者，慢性腹泻、吸收不良综合征、长期吸引胃液者等；②镁由尿路丢失，如慢性肾炎多尿期，或长
期用利尿药者；③内分泌疾病，如甲状腺功能亢进症、甲状旁腺功能亢进症、糖尿病酸中毒、醛固酮增多症等，以及长期使用皮质醇激素。
课堂提问：
1、 OCPC法测定血钙的基本原理、方法学评价？
2、 比法测定血镁的基本原理、方法学评价？
3、 简述血钙测定的临床意义？
4、 简述血磷测定的临床意义？
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