Der m ato,l 2009,8(3):205-210.
[29]Levy P M,De Boule ,Raspal do H.C o mp aris on of i n jection com f ort
of a ne w cat egory of cohesive hyal u ron ic aci d fillerw i th p rei ncorpo -rated li docai ne and a hyal uron i c aci d fill er al one [J ].Der m atol Su rg ,2009,35(Supp l1):332-326,d isc u ssion 337.
[30]L i m A C.H yaluron ic aci d filler injecti ons w i th a 31-gauge i n s u li n
s yri nge[J].Austral as J Der m ato,l 2010,51(1):74-75.
[31]Farkas J P ,R ichardson J A ,B ro w n S,et a.l E ffects of co mmon l aser
treat m ents on hyal u ron i c aci d fill ers i n a porci n em odel[J].A esthet Su rg J ,2008,28(5):505-511.
[32]Rzany B,B ecker -W egerich P ,Bach m ann F ,et a.l H yal uron i dase i n
t h e correction of hya l uron ic aci d -based fillers :a revi e w and a rec -omm endation for u se[J ].J Cos m et Der m ato,l 2009,8(4):317-323.
[33]W ei nberg M J ,So li sh N.Co m p licati ons of hyal u ron i c aci d fill ers
[J].Faci al Plast Su rg ,2009,25(5):324-328.
[34]Pon s -Gu iraud A .Adverse reacti on s to i n ject ab le fillers[J ].Ann
Der m atolV enereo,l 2009,136(supp l 6):S293-S298.
台海中线
[35]W i estL G ,StolzW,Sch roeder J A .E lectron m i croscop i c docum en -tation of l ate changes i n p er m anen t fillers and cli n icalm anage m ent of granulo m as i n affected patien t s [J ].Der matol Su rg ,2009,35(Supp l 2):1681-1688.
[36]G l ogau R G,K aneM A .E ff ect of i n jection t echn i ques on the rate of
l ocal adverse events i n patients i m p l an ted w it h nonan i m al hyal u -ron i c aci d gel der ma l fill ers [J].Der matol Surg ,2008,34(Supp l 1):S105-S109.
甾类药物生物脱氢技术研究新进展
郑书香1
,王荣柱2
,谢松霖2
,何军邀2
,王 普
2
(浙江工业大学1.健行学院,2.药学院,浙江杭州310014)
摘 要:甾类药物是医药工业中重要的一大门类,通常以甾体母核结构为基础,通过化学法或生物法合成,其中微生物转化是许多甾类药物或其中间体合成路线中关键的环节。此文对甾类药物生物转化脱氢反应涉及的催化剂类型、转化率提高的途径、新型生物脱氢反应体系等方面进行了综述。 关键词:甾类药物;微生物转化;脱氢反应 w980i
中图分类号:TQ463 文献标识码:A 文章编号:1005-1678(2011)03-0251-04
Research progress in biodehydrogenation techni q ue of steroid m edicine
Z H ENG Shu-x iang 1
,WANG Rong -zhu 2
,X I E Song -li n 2
,HE Jun -yao 2
,WANG Pu 2
乙烯基三乙氧基硅烷
(1.J ianx ing School ,2.School of P har m aceu tical Science ,Zhejiang University of Technology,
H angzhou 310014,Ch i n a)
收稿日期:2010-03-01
基金项目:国家大学生创新性实验项目;浙江省自然科学基金项目(No .Y407289)
作者简介:郑书香,女,本科生,生物制药专业,E-m ai:l shux i ang -zheng @g m ai.l com;王 普,女,通信作者,教授,E -ma i :l w angpu@z j u t www.doczj/doc/fb9950892.html
。
甾体类药物是医药工业中重要的一大门类,具有抗过敏、抗休克、抗病毒等作用,被广泛用于风湿关节炎、心血管疾病、肿瘤、皮肤病、内分泌失调、肌松等。
甾类药物通常以甾体母核结构为基础,通过化学法或生物法合成。微生物转化法具有成本低、副产物少、对环境污染低等优点,故甾类合成中越来越多引入生物转化法。目前,微生物转化甾类药物中涉及较多的是羟基化、还原、脱氢、芳构化、边链切除等。本文就甾类药物生物转化脱氢反
应体系所涉及的催化剂类型、如何提高转化率,以及新型脱氢反应体系进行综述。1 生物催化剂类型1.1 游离细胞 金瓶梅概述
在两相体系或单相体系中,将游离细胞直接作为生物催化剂的研究最为普遍,它不仅操作简便,而且游离细胞可维持较高酶活,利于辅酶再生[1]。张艺等[2]研究了含有不同基团的甾体底物在不同反应体系中的生物脱氢规律,结果表明,保持细胞的完整性对C 1,2位脱氢转化至关重要,细胞破
碎会破坏细胞膜限制性酶,导致转化率的降低。1.2 固定化细胞
在有机溶剂-水或离子液体-水两相体系中的甾体脱氢研究中,将固定化细胞作为催化剂,不仅利于生物催化剂与产物的分离以及细胞的重复使用,还可降低有机溶剂等对细
胞的毒性,维持酶的活性。P ark等[3]利用不同疏水性凝胶固定化简单节杆菌,研究凝胶的疏水性对催化氢化可的松脱氢反应的影响,结果发现凝胶的疏水性越大,底物越易进入到疏水区域,这可减少底物抑制,提高转化率。张瑛等[4]探索了不同方法制备固定化简单节杆菌催化醋酸可的松,发现用聚乙烯醇-海藻酸钙复合甾体包埋的细胞,具有机械强度高和酶活较高的优点,在最适温度34e、最适p H7.5条件下,当底物浓度为20g/L时,反应18~20h,转化率达98%。
1.3解冻细胞
S m o l ders等[5]以热干和解冻的简单节杆菌细胞为生物催化剂,研究了微乳体系中高浓度16-甲基-莱氏化合物S-21-醋酸酯(16M R S A)的脱氢反应,发现解冻细胞在转化14 ~16h后转化率可达98%,细胞干重浓度分别为40g/L,而热干细胞转化相同时间的干重仅为10g/L。
1.4转基因表达
简单节杆菌3-甾酮-1-脱氢酶(K SDH)也称甾体C
1,2
位脱氢酶,编码该酶的全基因序列已被测出,许多学者将其克隆到其他菌种中,以提高该酶的基因表达量等。李玉等[6]将其重组到大肠杆菌中,超声破碎的细胞破碎液对4-烯-雄甾-3,17-二酮(4-AD)的转化率较简单节杆菌提高了近10倍。
1.5原生质体转化
甾体脱氢酶多为胞内酶,细胞壁(细胞膜)通透性将成为影响传质的主要障碍,采用原生质体转化技术有助于克服这一困难。张艺等[2]研究了简单节杆菌原生质体催化甾体脱氢,发现以醋
酸氢化可的松为底物的脱氢转化率较高,而其他甾体化合物如可的松、甲睾酮和睾丸素等转化率很低,其原因在于原生质体在高渗液中不稳定、易破裂,从而造成脱氢酶释放被稀释,导致转化率降低。采用原生质体进行甾体脱氢的报道较少,且转化效果不理想。而利用原生质体进行甾体羟基化反应的报道相对较多,且转化效果较好。
1.6高产菌株的筛选
王敏等[7]和赵荣等[8]利用原生质体紫外线诱变结合底物抗性筛选方法选育得到高产菌株,氢化可的松转化率分别达到73.6%和81.63%,较出发菌株分别提高了54%和14.1%。
2改进反应体系以提高转化率
2.1温度
温度是影响酶或细胞催化的生物反应的重要因素之一。葛翔等[9]利用简单节杆菌对甲基可的松进行脱氢研究,发现在30~37e间,底物转化率先随着温度的升高而增加,之后随着温度的继续升高而降低,在33e左右,底物转化率达较高值。酶反应(细胞催化实质上也是酶反应)速率是随反应温度上升而增加,但同时酶变性的速率也会增加;当温度超过某点(最适温度)时,酶十二烷基硫酸钠
变性引起的速率下降量会超过本身因温度上升引起的速率增加量,据此,通过考察不同温度对生物催化剂催化底物脱氢的影响可确定其最适反应温度。
2.2p H
p H对酶或细胞催化的生物反应的影响与温度类似。葛翔等[9]发现在p H为7.0附近处底物转化率达到最大值(52%);当p H分别为3.0和10.5时,转化率都接近于零。王普等[10]优化简单节杆菌17A-羟基-16B-甲基-孕甾-4,9 (11)二烯-3,20-二酮脱氢酶产酶条件时,发现当培养基初始p H值为7.0时,酶活力最高。酶催化时主要靠活性部分的催化基团和底物结合基团,p H是通过改变这些基团的带电性质从而影响酶促反应过程的。一般甾体脱氢酶催化反应的最适p H值接近中性,大部分为6~8。
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