手提质粒步骤
100ml菌液用50ml离心管离心两次，弃上清（确保上清吸干净）
（1）solutionⅠ（冰预冷）3.6ml重悬菌体沉淀 （2）solutionⅡ（冰预冷从底部往上逐渐加入）8ml裂解重悬菌液，轻、快颠倒6次，冰浴6-10分钟，注：时间不能过长，混匀不可剧烈
（3）solutionШ（冰预冷黑帮之地2）6ml，颠倒几次混匀，冰浴10min，10000rpm4℃20min
上清过滤（除去杂蛋白）转移至新的干净的50ml离心管，加入0.6倍体积的异丙醇（10.56ml），混匀，室温放置10min，10000RPM离心20min，弃上清，1-2ml 70％乙醇吹悬洗涤2次（10000rpm10min），弃上清，用3ml TE（可用elution buffer栾茂田代替）重悬（若菌液为几百毫升则总共用3ml elution buffer依次重悬合并重悬液），转移重悬液至新的50ml离心管冰浴。
（4）加入冰预冷的3ml 5M Licl，混匀，10000rpm离心4℃10min，上清转移至新的干净的
离心管中，加入等体积的异丙醇（6ml）混匀，10000rpm离心保师附小在线校园4℃10min弃上清（沥干）1-2ml 70%乙醇洗涤2次。每次均10000rpm离心滁州学院学报10min弃上清，沥干
（5）加入含有无DNA酶的RNA酶（50ug/ml）注：如果为几百毫升的菌液RNA酶按比例增大的TE（可用elution buffer代替）2ml溶解沉淀，混匀，分装到1.5EP管中（每管建议250ul），室温放置30-60min
（6）加入等体积的酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）混匀，12000rpm离心10min取上清液，尽量别吸太完全，减少杂质带入下一步，剩余的上清液收集后混合至一个新的1.5EP管，重复12000rpm离心10min，吸上清液，尽量减少杂质吸入，乳糖操纵子
主要是为了在保证除去杂质的基础上减少损失 （7）在上步获得的上清液中加入等体积的酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）混匀，12000rpm离心10min。取上清液，尽量别吸太完全，减少杂质带入下一步，剩余的上清液收集后混合至一个新的1.5EP管，重复12000rpm离心10min，吸上清液，尽量减少杂质吸入，为了纯度宁可舍弃一部分上清，主要是为了在保证除去杂质的基础上减少损失
（8）在上步获得的上清液中加入等体积的氯仿混匀，12000rpm离心10min，取上清液，尽量别吸太完全，减少杂质带入下一步，剩余的上清液收集后混合至一个新的1.5EP管，重复12000rpm离心10min，吸上清液，尽量减少杂质吸入，为了纯度宁可舍弃一部分上清，主要是为了在保证除去杂质的基础上减少损失。
（9）在上步获得的上清中加入1/10体积的3M的NaAc，2.5倍体积的无水乙醇，-70℃15min，12000rpm 10min
（10）超净台内清弃上清，用冰预冷的70%乙醇洗涤2次，每次12000rpm 10min，第二次清弃上清后用头吸净残余液，晾干，无菌水溶，100ml菌液获得的质粒用100ul无菌水溶。
各种溶液的配法
SolutionⅠ（25mmol/L Tris-Hcl，50mmol/L葡萄糖，10mmol/L EDTA）
SolutionⅡ(0.2mol/L NaOH，1%SDS) 80mLSolutionⅡ需要0.64g氢氧化钠，SDS 0.8g去离子水80ml，一定要现用现配！！
Solution Ш（3mol/L 醋酸钾,2 mol/L 醋酸）
各种试剂的作用原理
小型计算机25mmol/L Tris-Hcl作用：调节溶液PH值
50mmol/L葡萄糖：悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部
10mmol/L EDTA：Ca2+ 和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，抑制DNase的活性，和抑制微生物生长，避免DNA被迅速降解。
0.2mol/L NaOH：溶解细胞，破碎细菌。
1%SDS：十二烷基硫酸钠（SDS）遇到钾离子后变为十二烷基硫酸钾（PDS），沉淀蛋白质，冰浴沉淀更彻底。基因组DNA也被PDS共沉淀。 2 mol/L 醋酸：中和氢氧化钠，避免其损伤DNA。
5MLiCl：沉淀RNA
酞与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。
酚：使蛋白质变性。
氯仿：除去脂类物质
异戊醇：减少抽提过程中的泡沫产生，在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。
酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的主要作用是抽提蛋白质。
醋酸钠：促进DNA的沉淀
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