电泳拖带的原因

电泳出现拖尾现象
电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散。
琼脂糖凝胶电泳拖尾是怎么回事?
1:样品浓度过高。这种情况稀释一下就行了。提质粒的时候常出现这种情况。
2:蛋白杂质阻碍DNA的泳动。提基因组DNA时常出现这种情况。
以上两种情况,拖尾都是在电泳条带的后面。
3:样品破碎或是被降解4:存在RNA
这两种情况,拖尾都是在电泳条带的前面。
PCR产物电泳拖尾,主要从以下两个方面考虑:
1、PCR产物自身原因:
往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物过多。
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对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。
④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。
2、电泳体系的问题:
(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液。(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样。(3)电压太高。(4)适当把你的胶的浓度加大。(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照。
PCR拖尾及假阳性的原因及对策
拖尾现象:产物在凝胶上呈Smear状态。
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原因:
1.模板不纯sky省钱电话
2.Buffer不合适
3.退火温度偏低
4.酶量过多
5.dNTP、Mg2+浓度偏高
6.循环次数过多
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对策:
1.纯化模板
2.更换Buffer
3.适当提高退火温度
4.适量用酶
5.适当降低dNTP 和镁离子的浓度
6.减少循环次数
假阳性现象:空白对照出现目的扩增产物原因:靶序列或扩增产物的交*污染对策:
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1.操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样内或溅出离心管外;
2.除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及加样头等均应一次性使用。
3.各种试剂最好先进行分装,然后低温贮存
1921年C.C.Little用Lathrop小鼠作近亲培育时,用No.57雄鼠和No.52雌鼠交配,培育成
C57。在C57中将毛呈黑的进行固定,培育成C57BL。1937年Little将维持的C57BL第六组亚系定名为C57BL/6,将第十组亚系定名为C57BL/10,继而分别维持至今。1947年从Little 引入到美国Jackson Lab.,形成C57BL/6J;1951年从Jackson Lab.引到NIH,形成C57BL/6N 亚系。六十年代到日本实验动物中央研究所,1986年自日本实验动物中央研究所引入到中科院上海实验动物中心。2001年从美国再次引种.
C57小鼠体重的正常值:雄性:体重(g)日龄<12g <2313~15g 24~2816~18g 29~3519~21g 36~4522~24g 45~63雌性:体重(g)日龄<12g <2313~15g 24~3116~18g 32~5219~21g 53~7722~24g 78~105
特殊性能:乳腺癌发病率较低,有眼睛缺损,对放射性有抵抗力,对结核杆菌敏感,对鼠痘病毒有一
定的抵抗力,干扰素产量高,对百日咳易感因子敏感。常用于致癌研究。
繁殖性能:产仔率:89~95% 平均窝产仔数:6.98~7.48只胎间隔:28~36天离乳存活率:87~93%
1. 品系名称由来2010山东理综
(1)Swiss:1926年美国Rockfeller研究所的Clara Lynch博士从瑞士(Switzerland)Centre Anticancereux Romand的de Coulon实验室引入非近交白化小鼠,培育成Swiss小鼠。
(2)KM:1944年3月17日卫生部北京生物制品研究所汤飞凡教授从印度Hoffkine研究所引进Swiss小鼠,饲养在中国昆明中央防疫处。由于该小鼠起初引入地是昆明,故称之为昆明小鼠,这就是昆明小鼠品系名称的由来。
(3)ICR:1948年,美国费城癌症研究所(Institute of Cancer Research, ICR)Hauschka以多产为目标,用Rockfeller研究所培育出的Swiss小鼠进行选育,培育出Ha/ICR,以后由美国肿瘤研究协会分送各国饲养实验,各国称为ICR小鼠。中国科学院遗传研究所在1973年从日本国立肿瘤研究所引进,1979中国医学科学院分院动物中心引进,1978年北京检定所引进,1983年上海计划生育研究所从瑞士苏黎世毒理学研究所引进。
(4)CD-1:1948年Edward Mirand博士将费城癌症研究所培育的Ha/ICR引入Roswell Park Memorial
Institute,命名为HaM/ICR。1959年美国Charles River Lab引入该品系并于同年进行了剖腹产,并命名CD-1(ICR),并注册CD-1®商标。
后,趋化因子受体引发钙离子内流而产生细胞趋化反应,从而诱导细胞到生物体的特定部位。

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