质粒大量提取的主要试剂
溶菌酶（10 mg/ml）：100 μl 1 M Tris-HCl（新侨报
pH 8.0），0.1 g 溶菌酶，加超纯水至10 ml，混匀，可根据用量分装至小管，置于-20 ℃保存。 1×TE（pH 8.0）：5 ml 1 M Tris-HCl（pH 8.0），1 ml 0.5 M EDTA，加超纯水定容至500 ml，湿热灭菌，室温保存。 RNaseA（10 mg/ml）：0.1 g RNaseA，33 μl 3 M NaAc（pH 5.2），加超纯水至9 ml，100 ℃，15 min，冷却至室温，置于-20 ℃保存。
25％ 蔗糖：25 g 蔗糖，5 ml 1 M Tris-HCl（pH 8.0），加超纯水定容至100 ml，置于4 ℃保存。
0.5 M EDTA：186.1 g EDTANa2H2O，NaOH约20 g，加800 ml超纯水溶解完全后，调pH至7.6，定容至1 L，湿热灭菌，室温保存。
Triton-lysis：1 ml 10% Triton-100，12 ml 0.5 M EDTA（pH 8.0），5 ml 1 M Tris-HCl（pH 8.0），加超纯水定容至100 ml，室温保存。
PEG8000：150 g PEG8000，软件天地150 ml 5 M NaCl，加超纯水定容至500 ml，常温保存。
EB（10 mg/ml）：10 mg EB，加超纯水1 ml，溶解，室温保存。
质粒大量提取的步骤（CsCl超速离心纯化DNA）
A. 取1 ml含目的质粒的菌液，接种到400 ml含80 μg/mL氨苄青霉素的LB培养基中，37 ℃摇床上剧烈振荡（200 rpm）培养12 h左右。
B. 将菌液倒入离心瓶，4200 rpm离心13 min；弃上清，菌体沉淀用6 ml含25％ 蔗糖的50 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）溶液重悬。 C. 加入1.5 ml新鲜配制的10 mg/ml溶菌酶，室温静置10 min；加入1 ml 0.5 M EDTA（pH 7.6），混匀，再加入100 μl 10 mg/ml RNase A，混匀，最后加入7 ml Triton裂解缓冲液充分混匀。
D. 将溶液倒入50 ml离心管中，4 ℃ ，40000 g，离心45 min；将上清倒入新管中，加入1/2农业生产结构上清体积的30％ PEG8000，颠倒混匀数次，4 ℃中放置4-6 h（或过夜）。
E. 4000 rpm 离心5 min，弃上清，用3 ml 1×TE（pH8.0）溶解约1 h；加入3.5-4 g CsCl，溶解完全。
F. 在超离管中加入驱逐出境20 μl EB（10 mg/ml），将溶液移入超离管中，称重，用配平（以1% CsCl 配平），以矿物油补平高度，封口，颠倒数次将溶液混匀。
G. 60000 rpm超速离心16 h，可见EB集中于两条带，一条位置较高较细浅的带为开环或线状质粒DNA，另一条位置较低较粗的带为超螺旋质粒DNA。
H. 用5 mL注射器抽取超螺旋质粒DNA的EB带，放入15 ml管中，加入等体积1×TE（pH 8.0）。
I. 以等体积的水饱和正丁醇溶液将EB萃取除去，直到溶液澄清无，再用等体积的水饱和正丁醇溶液继续萃取三次，确保EB去除干净。
J. 将2.5倍体积的无水乙醇与萃取好的质粒DNA混匀，4 ℃，13000 rpm离心3 min，去上清；加入450 μl水，溶解，室温过夜，直到溶解完全。
K. 将质粒溶液转移到1.5 ml离心管中，加20 μl 5 M NaCl和1 ml无水乙醇，4 ℃，13000 rpm 离心10 min传染病信息报告管理规范，去上清，以适当体积1×TE（pH 8.0）溶解完全后即可用于转染细胞，测定浓度后存于-20 ℃备用。
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