碱裂解法质粒DNA提取原理
质粒DNA提取主要包括以下几个方面:如何将细胞裂解释放质粒DNA，如何将质粒DNA和基因组DNA分离开来，如何去除RNA污染，如何去除蛋白质和其它杂质。
质粒提取方法中，最常用的方法是碱裂解法,它具有得率高,适用面广，快速，纯度高等特点.其原理是：
强碱性条件下,质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来，并发生变性.在pH中性,并有高盐浓度存在的条件下，质粒DNA会迅速发生复性,仍为可溶性状态，染体DNA之间交联形成不溶性网状结构,在去垢剂SDS作用下，染体DNA与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，通过离心去除沉淀后，再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA，用异丙醇或乙醇沉淀可将之纯化出来。 BIOMIGA公司质粒DNA纯化系列试剂盒，采用碱裂解法质粒提取原理，在高盐环境下，采用硅胶膜特异性的吸附质粒DNA，而蛋白质不被吸附，最后用低盐洗脱液将DNA从膜上洗
脱下来,方法简单，快速，质量好,收获量高。
影响质粒提取的因素
影响质粒提取的因素有很多种，如质粒拷贝数,宿主菌株的种类，细菌的培养时间、培养基种类、培养条件等等。
质粒拷贝数
质粒DNA最终收获量取决于质粒的拷贝数和质粒的大小。BIOMIGA 公司质粒DNA提取系列试剂盒,操作步骤适用于高拷贝数质粒的纯化，对于低拷贝质粒纯化提取，应加大起始菌液量的体积，并且相应地增加各种缓冲液的用量。
下表给出一些常用质粒载体的拷贝数：
质粒种类
复制起点
拷贝数
1 mL菌液质粒DNA收获量（µg）
pSC101
pSC101
5
0。1-0。2
wcg2010世界总决赛pACYC
P15A
10-12
0。4—0.6
pSuperCos
pMB1
10—20
0。4-1
pBR322
pMB1
15-20
0.6—1
pGEMR
Muted pMB1
300-400
6—7
pBluescriptR
ColE1
300—500
6—8
河南教育学院学报
pUC
Muted pMB1
500—700
8—12
宿主菌株
宿主菌株的种类将会影响质粒的收获量。含内源核酸酶的宿主菌株，如JM101, JM110, HB101， TG1以及它们的衍生菌株，通常因为内源核酸酶的存在,或者在提取过程中释放出来的核酸酶的作用下，将会显著影响最终收获量，或者纯化到的质粒容易降解,推荐客户将质粒转化至不含内源核酸酶的宿主菌株中，如Top10， DH5a进行质粒纯化。
如果从含内源核酸酶的宿主菌株中纯化质粒DNA，请用试剂盒附送的核酸酶去除溶液，去除核酸酶的污染.或选用HP系列试剂盒进行质粒的纯化。
下表给出一些常用的宿主菌株种类：
EndA— Strains of E. Coli
DH5α
DH1
DH21公安部汪凡
JM106
JM109
SK2267
SRB
XLO
TOP10
DH10B
JM103
JM107
雪地里的红棉袄SK1590
MM294
Stbl2™
山西商务旅行社XL1-Blue
BJ5182
DH20
JM105
JM108
SK1592
Select96™
Stbl4™
XL10—Gold科技传播
EndA+ Strains of E。 Coli
C600
JM110
RR1
ABLE® C
CJ236
KW251
P2392
BL21（DE3)
HB101
TG1
TB1
ABLE® K
DH12S™
LE392
PR700
BL21(DE3) pLysS
JM101
JM83
TKB1
HMS174
ES1301
M1061
Q358
BMH 71-18
All NM strains
All Y strains
菌液培养
BIOMIGA 公司质粒DNA提取系列试剂盒，标准操作适用于在LB培养基中培养12～16小时,OD600在2。0～3.0的菌液质粒DNA的提取。如果使用丰富培养基，如TB,2 x YT培养基,
请保证OD600不超过3。0。菌液过量,将会影响最终的收获量和纯度。
培养方式
如果用于质粒小提，请从固体培养基平板上挑取新鲜单菌落，接种到加入筛选抗生素的培养基中,震荡培养12~16小时。
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