MagBeads Polysaccharide & Polyphenol Plant Genomic DNA Extraction Kit
【目 录 号】PTDE-6005、PTDE-6030；
【运输条件】2~25℃；
【保存条件】磁珠分散液、β-巯基乙醇2~8℃；蛋白酶K -20℃；其它组分室温保存；
【试剂盒组成】
Kit Component 试剂盒组成 | PTDE-6005 （50T） | PTDE-6030 （300T） |
① PTDE-Buffer 裂解液 | 21mL | 125mL |
② PTDE-Binding Buffer 结合液 | 12mL (使用前加入18mL异丙醇) | 70mL (使用前加入105mL异丙醇) | 金元外交
③ PTDE Magnetic Beads 磁珠悬浮液 | 4mL | 24mL |
④ Wash Buffer 清洗液 | 30mL | 180mL |
⑤ Proteinase K 蛋白酶K | 1mL | 6mL |
⑥ β-ME β-巯基乙醇 | 42μL | 250μL |
⑦ Dealcohol Buffer 除醇液 | 20mL | 120mL |
⑧ Elute Buffer 洗脱液 | 5mL | 30mL |
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【注意事项】
1. 使用前请检查裂解液（组分①）和结合液（组分②）是否出现结晶，如有结晶请置于65℃温浴至重新溶解完全；
2. 初次使用全新试剂盒前，请按照结合液（组分②）标签标注量加入异丙醇，稀释备用；
3. 磁珠悬浮液（组分③）不可反复冻融或离心，使用前需充分摇匀；
4. 蛋白酶K（组分⑤）于-20℃长期保存，避免反复冻融；融化后4℃保存，并尽快使用；
5. 请仔细阅读本说明书，并按照操作指南建议操作。
【产品简介】
本试剂盒采用针对富含多糖多酚植物组织进行杂质去除的特殊磁珠，配合高性能缓冲液体系，可从各种富含多糖多酚植物组织样本中高质量的分离纯化基因组DNA。
特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的亲和力，而当条件改变时，磁珠会释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。提取所得的基因组DNA产物片段大、纯度高、质量稳定可靠，尤其适合高通量仪器自动化提取，特别是本公司生产的各类型号自动化核酸提取仪或工作站。使用本试剂盒纯化所得核酸产物可适用于各种常规分子生物学下游实验，如：酶切、 PCR、荧光定量PCR、文库构建、Southern杂交、芯片检测和高通量测序等。 【试剂盒说明】
样本类型 | 最适提取量 | 核酸得量范围 |
各种类型富含多糖多酚植物组织 | 20~100mg | 3~25μg |
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【自备仪器及耗材】
研钵&研磨棒(或者研磨机、匀浆机)、水浴锅、涡旋混合仪、高速离心机、EP管（1.5mL或2.0mL）、EP管配套用磁力架、核酸提取仪（仪器自动版操作步骤需准备）。
【自备试剂】
液氮、乙醇(80%, v/v)、异丙醇、RNase A溶液(100mg/mL，分散液10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH值8.0)。
【仪器自动法版操作步骤】
该方法配合磁棒法核酸提取仪使用，以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32份植物样本提取工作。
1. 准备96孔板
参照下表用量，向96孔板相应孔位中分别加入对应试剂：
样品位 | 1、7 | 2、8 | 3、9 | 4、10 | 5、11 | 6、12 |
试剂 | 磁珠悬浮液 80μL
清洗液 600μL | 结合液550μL （已加入异丙醇） | 80%乙醇
600μL | 80%乙醇
600μL | 除醇液
400μL | 洗脱液
100μL |
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注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排。
2. 组织样本前处理和裂解
取适量(≤100mg)植物组织样本，液氮研磨至粉末状，尽量完全转移至EP管中。加入400μL裂解液、0.8μL β-巯基乙醇和20μL蛋白酶K，涡旋振荡1~3min至混合均匀，呈云雾状。65℃温浴15min，每隔5~10min上下颠倒混匀一次。
注：1）若样本量大于100mg，但不超过400mg，需增加裂解液使用量，可按照每增加100mg组织样本增加150μL裂解液使用量，并延长裂解时间，其余试剂用量不变；
2）若样本个数较多，可预先将蛋白酶k、β-巯基乙醇和裂解液提前混合备用；
3）如需去除菲涅尔双棱镜RNA，需在加入蛋白酶K之前额外加入5μL RNase A溶液。
3. 上机提取
将裂解完毕样本室温（勿低于15℃）、13000rpm离心10min，吸取200~400μL上清液转移到在96孔板的2/8列孔位。将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中，并插入磁棒套；打开仪
器操作软件，调用“植物组织DNA提取实验方法”程序，点击“运行”执行程序。
“植物基因组DNA提取程序”各参数设置如下，如机器和说明书不一致，请以说明书为准：
步骤编号 | 孔位 | 运行类型 | 振荡时间 (s) | 分离时间(s) | 挥发时间 (s) | 振荡幅度 | 振荡强度 | 一组温度(℃) | 二组温度(℃) | 三组温度(℃) | 四组温度(℃) |
1 | 1 | 转移磁珠 | 1 | 5 | 0 | 5 | 弱 | 0 | 0 | 0 | 0 |
2 | 2 | DNA结合 | 180 | 5 | 0 | 4 | 中 | 0 | 0 | 0 | 新婚夫妻健康教育片 0 |
3 | 1 | 清洗1 | 180 | 5 | 0 | 5 | 强 | 0 聚四氟乙烯乳液 | 0 | 0 | 0 |
4 | 2 | DNA结合 | 300 | 10 | 0 | 4 | 中 | 0 | 0 | 0 | 0 |
5 | 1 | 清洗1 | 180 | 5 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
6 | 3 | 80%乙醇 | 180 | 5 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
7 | 4 | 80%乙醇 | 120 | 5 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
8 | 5 | 除醇 | 0 | 5 | 0 | 3 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
9 | 6 | 洗脱 | 360 | 30 | 0 | 2 | 中 | 60 | 60 | 60 | 60 |
10 | 3 | 弃磁珠 | 15 | 0 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 偶氮二甲酰胺 | | | | | | | | | | |
4. 核酸转移
程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程完毕，此时可以弃去96孔板。
【手动法版操作步骤】
1. 组织样本前处理和裂解
参照【仪器自动版操作步骤】中步骤2进行操作。
2. 核酸结合
将裂解完毕EP管室温（勿低于15℃）、13000rpm离心10min，吸取200~400μL上清液转移至另一只干净EP管中，加入80μL磁珠悬浮液以及550μL结合液（已加异丙醇），颠倒混合均匀。将EP管高速涡旋振荡6min，使磁珠与核酸充分结合，振荡完毕静置2min。
3. 磁性分离
将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全；如果EP管内盖有磁珠，可保持EP管在磁力架上，整体上下颠倒2~3次至磁珠被完全吸附。保持EP管固定于磁力架上，用移液吸弃上清液，期间避免接触磁珠。
名古屋 南京4. 清洗1
向EP管中加入600μL清洗液，将EP管从磁力架上取下，用移液吹散磁珠，涡旋震荡2min，磁性分离（参照步骤3操作）。
5. 清洗2
使用600μL 80%乙醇，参照步骤4操作2次。
6. 除醇
将除尽上清夜后的EP管保持在磁力架上，切勿取下，加入800μL除醇液，迅速手动摇动EP管冲洗磁性吸附的磁珠表面，并快速弃去除醇液。
注：若植物组织糖类或多酚类物质含量较高，此时EP管壁上会吸附少量特异性结合了杂质
的磁珠，尽量弃去除醇液和管壁上的除杂磁珠。
7. 洗脱
取出除醇完毕的EP管，加入100μL洗脱液（或去离子水）至管底，小心吹散磁珠，切勿溶解或吸取到管壁上的除杂磁珠。将重悬后磁珠转移至另一干净EP管中，65℃温浴5min，然后涡旋洗脱2min，确保磁珠与核酸完全洗脱解离。
注：洗脱液要求大于50μL，100~200μL较好，洗脱液体积较少时会影响核酸得率。
8. 核酸转移
洗脱完毕后，将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液将洗脱液转移至另一干净EP管中，提取过程完毕，此时可弃去磁珠。4
（0702修订版）
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