1 范围
本章规定了HIV-1核酸定性和定量检测（病毒载量）的意义、实验室要求、检测方法、质量控制及结果判定标准，适用于HIV-1核酸的定性检测和定量的测定。 2 核酸检测的意义
核酸检测可用于HIV感染诊断、血液筛查、病程评估及抗病毒效果监测。
2.1 感染诊断
2.1.1 作为补充试验：用于筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性样本的判定；对筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性的疑似艾滋病晚期患者需将核酸检测、临床病史和CD4+T淋巴细胞计数检测结果综合判断。对于抗体筛查试验阴性但免疫功能低下者，也可进行核酸检测，结合临床综合判断。
2.1.2 急性期诊断：对近期有明确流行病学史的个体，包括患有性病或有性病史，有同性
和异性性接触不安全性行为，有共用注射器史，有医源性暴露史，有职业暴露史，HIV/AIDS 患者的配偶或性伴侣，HIV/AIDS 母亲所生子女等，如抗体筛查试验无反应，可通过核酸检测判定是否为急性期感染。核酸检测结果阴性或低于最低检测限不能排除HIV-1感染。
2.1.3 HIV-1暴露婴儿感染早期诊断
HIV-1感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV-1核酸检测均为阳性即可作出诊断。18个月龄以上儿童诊断与成人相同。
2.2 血液筛查：对献血者及采供血机构的原料血浆进行核酸检测，可及时发现窗口期感染，降低输血的“残余危险度”，减少二代传播。
2.3 抗病毒效果监测
HIV感染者和艾滋病病人经抗病毒药物后，定期进行HIV-1病毒载量检测，可判断抗病毒药物的疗效。病毒载量结果动态分析，对决定是否继续使用原定的方案以及是否需要更改方案起到重要作用。一般启动抗病毒6个月后应进行病毒载量检测，以
监测效果，每年应检测一次。前进行检测可了解病人的病毒载量基线，有助于评价后效果。如适时重复检测病毒载量，没有低于检测限，需要考虑是否失败。此外，HIV-1DNA定量检测可判定HIV储存库含量，可更准确预测HIV传播风险和病程进展。HIV-1 DNA定量高者，传播风险的可能性高，病程进展快而严重，DNA定量测定为进一步疗效评价提供新的技术手段。
3 HIV核酸检测实验室要求
HIV核酸检测应在符合要求的实验室中进行，应制定严格的管理制度和建立与实验和实验室管理相关的标准操作程序。实验人员必须充分了解并严格遵守各项规定和掌握操作技能，并严格遵照执行。核酸定性、定量检测要严格满足分子生物学实验室的要求。
3.1 实验室的设计及工作基本原则
HIV核酸检测实验室设计及实验室的基本工作原则应符合《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》附件中“医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则”和《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南》的要求。
3.2 实验室人员和要求
进行HIV核酸检测的人员需具有艾滋病核酸检测的上岗资格，接受过市级以上的实验操作技术培训及相关技术设备及检测产品提供商的培训，并接受过实验室生物安全培训。
3.3 实验室生物安全
实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。
4 HIV-1核酸检测方法及程序
HIV核酸检测分为定性和定量试验。HIV核酸定性检测主要采用实时荧光定量PCR方法，HIV核酸定量检测主要基于靶核酸扩增和信号放大两种方法。定性和定量检测均可用作HIV感染诊断，定量检测还可用于抗病毒效果监测。
4.1 HIV-1核酸定性检测
4.1.1 方法：HIV-1核酸定性检测包括RNA检测和DNA检测。RNA检测主要是检测血浆或
血清中的RNA，DNA检测主要是检测全血、干血斑或组织细胞中的前病毒DNA或总核酸。二者相比，HIV-1DNA检测的稳定性更好。
目前，HIV核酸定性检测主要有实时荧光定量PCR方法、荧光探针PCR法及以焦磷酸化激活聚合酶（PAP）反应为基础的核酸扩增PCR方法。
4.1.2 试剂：必须是经国家药品监督管理局注册、在有效期内的试剂。严格按产品说明书操作。
4.1.3 结果判定与报告：检测结果显示“有反应”或“检测到”，报告本次核酸阳性；检测结果显示“无反应”或“未检测到”，报告本次核酸阴性。核酸定性检测阴性不能排除HIV-1感染，特别是对有高危行为、暴露前或暴露后预防用药的个体，需要根据流行病学史、临床表现和实验室其他相关指标进行诊断。
4.2 HIV-1核酸定量检测
4.2.1 方法
4.2.1.1 RNA检测
主要是定量检测血浆中的病毒RNA，检测的主要原理是实时荧光定量PCR（Real Time-PCR）。主要步骤包括提取、纯化血浆中的病毒RNA，逆转录，进行PCR扩增，通过实时荧光定量PCR检测得到结果。
由于HIV-1高度变异，影响HIV-1RNA定量检测的敏感性，且同一样本由于不同试剂的方法学差异（例如，不同的试剂盒之间的扩增片段或荧光探针的差异），可能出现不同的结果，因此应选择能够检测出当地主要HIV-1流行毒株的试剂。评估抗病毒效果和病程进展，对同一病人最好始终使用同一种试剂，有助于合理解读病毒载量的变化。要考虑检测试剂版本的更新情况。不同试剂间的检测结果无固定的转换关系。
4.2.1.2 DNA检测
包括全血、干血斑、PBMC及组织中DNA检测。血液中总HIV-1DNA含量测定是目前最常用的方法。同定性检测一样，总HIV-1DNA含量测定主要有荧光探针PCR法及以焦磷酸化激活聚合酶（PAP广东茂名监狱惊天黑幕）反应为基础的核酸扩增PCR方法。针对整合的HIV-1DNA的检测方法主要有Alu-gag PCR法，但由于灵敏度低等缺点未在临床上广泛应用。
4.2.2 试剂
必须是经国家药品监督管理局注册、在有效期内的试剂。严格按说明书操作。
4.2.3 结果判定与报告
按照试剂盒说明书判定检测结果：软交换技术
4.2.3.1 用于HIV-1感染的诊断：检测值>5000 CPs/ml(或IUs/ml)，报告检测值；检测值稳定同位素≤5000 CPs/ml(或IUs/ml)，需严格按核酸检测的要求，再次采样检测后报告检测值。结果>5000 CPs/ml爱欲(或IUs/ml)可以作为诊断依据；结果仍为≤5000 CP深圳市水务局s/ml帝国主义在中国，则需结合流行病学史、临床病史、CD4+T淋巴细胞计数和HIV-1抗体随访检测结果等进行综合判断。检测值小于检测下线，报告低于检测限。对于暴露前或暴露后预防用药的个体，检测值低于最低检测限不能排除HIV-1感染，需要根据流行病学史、临床表现和实验室其他相关指标进行综合判断。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议