ＤＯＩ：
１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．１１．０６
·新型冠状病毒肺炎·
作者简介：
崔蕾蕾，１９８０年生，女，副主任技师，硕士，研究方向为微生物免疫学和分子生物学，Ｅ ｍａｉｌ：８５４７１６２６＠ｑｑ．ｃｏｍ。崔蕾蕾，夏爱华，王伟，邵可可（盐城市第一人民医院检验科，江苏盐城２２４００１）
摘要：目的 评价不同检测系统对新型冠状病毒（２０１９ ｎＣｏＶ）核酸的检测能力差异，为选择２０１９ ｎＣｏＶ核酸检测试剂提供指 导。方法 用本实验室在用的提取试剂、扩增试剂及扩增仪组合成８个检测系统，分别对国家卫生健康委临床检验中心２０１９ ｎＣｏＶ室间质评发放的１２个样本进行检测。结果 纳入统计指标的１０个样本中，有５个２０１９ ｎＣｏＶ阴性样本， ８个检测系统对５份阴性样本均为未检出，与预期结果相符，另５份２０１９ ｎＣｏＶ阳性样本中，８个检测系统均未检出２０２０１０（１２８ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ），均
检测出２０２００４、２０２００８、２０２０１１。对２０２００２（６４０ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）弱阳性样本，只有Ｂ及Ｄ２个检测系统检出，其余均未检出。Ｂ及
Ｄ检测系统扩增试剂均为ｅ扩增试剂，检测的符合率总体优于ｆ扩增试剂。Ｎ区的阳性率高于ＯＲＦ区，样本２０１９ ｎＣｏＶ拷贝数
越低，这一现象越显著。Ａ Ｄ检测系统检测到的ＯＲＦ１ａｂ基因的阳性率高于Ｅ Ｈ检测系统，
Ａ Ｄ检测系统均使用的是ｂ快速提取试剂，而Ｅ Ｈ检测系统使用的是ａ提取试剂，提取试剂的提取效率对检测结果影响较大。结论 在关注扩增试剂检测性能的前提下，也要关注核酸提取试剂的提取效率，尽量选择配套试剂。如选择非配套试剂，要做好试剂比对，确保检测结果的准确性及一致性。此外，还要重视人员培训，提高检测人员操作技能。关键词：新型冠状病毒；核酸检测；核酸提取；检测系统
中图分类号：
Ｒ４４６．６ 文献标志码：ＡＡｎａｌｙｓｉｓｏｆ２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ
ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ
ＣＵＩＬｅｉｌｅｉ，ＸＩＡＡｉｈｕａ，
ＷＡＮＧＷｅｉ，ＳＨＡＯＫｅｋｅ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＰｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＹａｎｃｈｅｎｇＣｉｔｙ，Ｙａｎｃｈｅｎｇ２２４００１，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｆｏｒ２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ（２０１９ ｎＣｏＶ），ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｇｕｉｄａｎｃｅｆｏｒｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆ２０１９ ｎＣｏＶｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓｉｎｏｕｒｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｉｇｈｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｔｈａｔｗｅｒｅｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓ，ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓａｎｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓｕｓｅｄｉｎｏｕｒｌａｂｏｒａｔｏｒｙｗｅ
ｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅｎ，１２ｓａｍｐｌｅｓｉｓｓｕｅｄｂｙＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓｆｏｒｔｈｅｅｘｔｅｒｎａｌｑｕａｌｉｔｙａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆ２０１９ ｎＣｏＶｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｓｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｔｏｔａｌｏｆ１０ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ．Ａｍｏｎｇｔｈｅｍ，５ｗｅｒｅｎｅｇａｔｉｖｅｆｏｒ２０１９ ｎＣｏＶ，ａｎｄａｓｔｈｅｅｘｐｅｃｔｅｄ，ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆ８ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｗｅｒｅａｌｌｎｅｇａｔｉｖｅ．Ａ ｍｏｎｇｔｈｅｏｔｈｅｒ５ｓａｍｐｌｅｓｗｉｔｈｐｏｓｉｔｉｖｅ２０１９ ｎＣｏＶ，ｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｒｅｓｕｌｔｏｆｓａｍｐｌｅ２０２０１０（１２８ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓａｍｐｌｅｓ２０２００４，２０２００８ａｎｄ２００２１１ｗｅｒｅｒｅｐｏｒｔｅｄｂｙａｌｌｏｆ８ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｓｕｌｔｏｆｓａｍｐｌｅ２０２００２（
６４０ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）ｗａｓｏｎｌｙｒｅｐｏｒｔｅｄｂｙＢａｎｄＤｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ，ａｎｄｔｈｅｏｔｈｅｒ６ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｄｉｄｎ′ｔｄｅｔｅｃｔ．ＴｈｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓｏｆＢａｎｄＤｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｓｙｓｔｅｍｓｗｅｒｅｆｒｏｍａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｅ，ｗｈｉｃｈａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｗａｓｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆａｍｐｌｉ ｆｉｃａｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｆ．ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆＮｒｅｇｉｏｎｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＯＲＦｒｅｇｉｏｎ．Ｔｈｅｌｏｗｅｒｔｈｅｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒｏｆ２０１９ ｎＣｏＶｗａｓ，ｔｈｅ
ｍｏｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｔｈｉｓｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｗａｓ．ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｓｏｆＯＲＦ１ａｂｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＡ ＤｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＥ Ｈｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ．ＴｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓｏｆＡ Ｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｗｅｒｅｆｒｏｍｒａｐｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｂ，
ｗｈｉｌｅｔｈｏｓｅｏｆＥ Ｈｄｅｔｅｃ ｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｆｒｏｍｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔａ．Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｈａｄａｇｒｅａｔｉｍｐａｃｔｏｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｏｎｔｈｅｐｒｅｍｉｓｅｏｆｐａｙｉｎｇａｔｔｅｎｔｉｏｎｔｏｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓ，
ｗｅｓｈｏｕｌｄａｌｓｏｐａｙａｔｔｅｎｔｉｏｎｔｏｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓ．Ｍａｔｃｈｉｎｇｒｅａｇｅｎｔｓｓｈｏｕｌｄｂｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｆａｒａｓｐｏｓｓｉｂｌｅ．Ｉｆｎｏｎ ｍａｔｃｈｉｎｇｒｅ ａｇｅｎｔｓａｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ，ｒｅａｇｅｎｔｓｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓｈｏｕｌｄｂｅｄｏｎｅｔｏｅｎｓｕｒｅｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，
ｗｅｓｈｏｕｌｄｒｅｇａｒｄｐｅｒｓｏｎｎｅｌｔｒａｉｎｉｎｇａｎｄｔｒｙｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｏｐｅｒａｔｉｏｎｓｋｉｌｌｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｐｅｒｓｏｎｎｅｌ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ；ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；
ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ
核酸检测是新型冠状病毒肺炎（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ
ｄｉｓｅａｓｅ２０１９，ＣＯＶＩＤ １９）
确诊的重要手段。常用的核酸检测方法有实时荧光ＲＴ ＰＣＲ、转录介导的恒温扩增、高通量测序、ＰＣＲ－飞行时间质谱、ＰＣＲ－基因芯片［１ ２
］。为了解我国新型冠状病毒（２０１９ｎｏｖｅｌ
ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ，２０１９ ｎＣｏＶ；
国际病毒分类委员会将２０１９ ｎＣｏＶ
命名为ＳＡＲＳ ＣｏＶ ２）核酸检测的开展现
状及质量状况，帮助临床实验室发现检测中存在的问题并进行改进，使得核酸检测在疾病防控工作中更好地得到应用，国家卫生健康委临床检验中心于２０２０年３月１６日—２４日开展了２０１９ ｎＣｏＶ核酸检测室间质量评价活动，本实验室参加了此次室间质
评活动，并用本实验室使用的２种品牌提取仪、２种扩增试剂及２台扩增仪组合出的８个检测系统对质评标本进行检测，以了解不同检测系统的检测能力差异，为实验室选择检测试剂提供指导。
蹭蹭族
１ 材料与方法
１．１ 标本来源 国家卫生健康委临床检验中心于
２０２０年３月１６日—２４日发放的１２个２０１９ ｎＣｏＶ核酸检测室间质量评价样本，编号分别为２０２００１、
２０２００２、２０２００３、２０２００４、２０２００５、２０２００６、２０２００７、
２０２００８、２０２００９、２０２０１０、２０２０１１、２０２０１２。本次室间质评样本均为国家卫生健康委临床检验中心制备，
为基因工程方法制备的噬菌体病毒样颗粒模拟样本，无生物传染危险性。
１．２ 仪器与试剂 ３２通道全自动核酸提取仪
ＡＵ１００１及磁珠法核酸提取试剂盒（无锡百泰克公司）（ａ），全自动核酸提取仪ＳＳＮＰ ３０００Ａ及磁珠法
核酸快速提取试剂盒（江苏硕世公司）（ｂ），实时荧光定量ＰＣＲ仪７３００Ｐｌｕｓ（美国ＡＢＩ公司）（ｃ），实时荧光定量ＰＣＲ仪ＣＦＸ９６（美国Ｂｉｏ Ｒａｄ公司）（ｄ），
２０１９ ｎＣｏＶ核酸检测试剂盒（荧光ＰＣＲ法，上海伯杰公司）（ｅ），新型冠状病毒（２０１９）核酸检测试剂盒
（荧光ＰＣＲ法，江苏硕世公司）（ｆ）。１．３ 方法
１．３．１ ＲＮＡ提取 用全自动核酸提取仪ａ及ｂ及配套试剂分别提取１２个质评样本，严格按照说明书
进行提取。
１．３．２ 核酸扩增 分别用２０１９ ｎＣｏＶ核酸检测试剂盒ｅ及ｆ，对２种提取仪提取的核酸，分别在扩增
仪ｃ及ｄ上进行扩增，按照试剂盒说明书设置上机的扩增检测参数和程序。由此分成下列检测系统，Ａ：ｂ＋ｆ＋ｄ；Ｂ：ｂ＋ｅ＋ｄ；Ｃ：ｂ＋ｆ＋ｃ；Ｄ：ｂ＋ｅ＋ｃ；Ｅ：ａ＋ｆ＋ｄ；Ｆ：ａ＋ｅ＋ｄ；Ｇ：ａ＋ｆ＋ｃ；Ｈ：ａ＋ｄ＋ｃ。１．３．３ 质量控制 每批次检测设立１份弱阳性质控及３份阴性质控，阴性质控随机放在临床样本中。弱阳性质控测定为阳性，３个阴性质控结果全部为阴性，视为在控，否则为失控，不可发出报告，应立即分析原因，必要时需重新检测。１．３．４ 结果分析与报告
１．３．４．１ 基线与阈值设定 根据分析后的荧光曲线进行参数的微调，基线取６～１５个循环的荧光信号
（每个检测批次最先起跳的荧光曲线起跳前１～２个循环处），阈值设定以阈值线刚好超过阴性质控检测荧光曲线的最高点。
１．３．４．２ 结果分析 有内标的试剂盒，先分析内标通道是否有扩增曲线，若有，表示本次检测结果有
效，可进行结果的分析；若待检靶基因通道检测到典型Ｓ型扩增曲线，且Ｃｔ≤设定阈值，表示该靶基因“检出”；若“待测靶基因”通道未检测到典型Ｓ型扩增曲线，或Ｃｔ＞设定阈值，表示该靶基因“未检出”。若内标通道未检出Ｃｔ或Ｃｔ＞设定值，表示本次检测样本浓度太低或者有干扰抑制反应，须重新检测。
１．３．４．３ 结果判断 要确认某病例为阳性，须满足以下条件：同一份标本中２０１９ ｎＣｏＶ至少２个靶标
（ＯＲＦ１ａｂ／Ｎ／Ｅ）实时荧光ＲＴ ＰＣＲ检测结果均为阳性。如１个靶基因阳性或检测结果落在设置的灰区内，标本需进行复测或选用另１种试剂再测，如结果仍然可疑则须重新采样（不同部位或不同样本类型）进行检测。２种试剂结果判断标准见表１。
表１ 不同核酸检测试剂结果判断标准
标准试剂ｆ试剂ｅ
阳性判断标准ＯＲＦ１ａｂ和Ｎ区Ｃｔ值≤３７，且有明显的Ｓ型扩增曲线扩增曲线呈Ｓ型，且Ｃｔ值≤３５
阴性判断标准ＯＲＦ１ａｂ和Ｎ区无扩增曲线或Ｃｔ值＞４０，且内对照有扩增曲线Ｃｔ值＞３８或未检出，且内对照有扩增曲线
可疑判断标准ＯＲＦ１ａｂ和Ｎ区，有１个通道结果Ｃｔ值≤３７，其他１个通道检测结果３７＜Ｃｔ≤４０，或２个通道结果３７＜Ｃｔ≤４０，且有明显的Ｓ
型扩增曲线ＯＲＦ１ａｂ和Ｎ区，有１个通道结果Ｃｔ值≤３５，其他１个通道检测结果３５＜Ｃｔ≤３８，或２个通道结果３５＜Ｃｔ≤３８，
且有明显的Ｓ型扩增曲线
复检规则复检结果Ｃｔ值仍然在３７～４０范围，曲线呈标准Ｓ型且有明显指数增长期，则可判样品为２０１９新型冠状病毒（２０１９ ｎＣｏＶ）阳性；
复检均为阴性可判断为未检测到２０１９新型冠状病毒
（２０１９ ｎＣｏＶ）ＲＮＡ复检结果Ｃｔ值仍然在３５～３８范围，曲线呈标准Ｓ型且有明显指数增长期，则可判样品为２０１９新型冠状病毒（２０１９ ｎＣｏＶ）阳性；复检均为阴性可判断为未检测到２０１９新型冠状病毒（２０１９ ｎＣｏＶ）ＲＮＡ
２ 结果
２．１ 提取试剂ｂ提取核酸的检测结果 提取试剂ｂ提取的核酸分别用扩增试剂ｅ和ｆ，在扩增仪ｃ及ｄ
上进行扩增，检测结果Ｃｔ值见表２。２．２ 提取试剂ａ提取核酸的检测结果 提取试剂ａ提取的核酸分别用扩增试剂ｅ和ｆ，在扩增仪ｃ及ｄ
上进行扩增，检测结果Ｃｔ值见表３。
表２ 快速提取试剂ｂ提取核酸的Ｃｔ值
样本号
扩增仪ｄ
ｆ
试剂扩增（系统Ａ）
ＯＲＦ１ａｂ
Ｎｅ试剂扩增（系统Ｂ）
ＯＲＦ１ａｂ区Ｎ区
扩增仪ｃ
ｆ
试剂扩增（系统Ｃ）
ＯＲＦ１ａｂ
Ｎｅ试剂扩增（系统Ｄ）ＯＲＦ１ａｂ区Ｎ区
２０２００１００００００００２０２００２０４２．０７／００３６．８９／３５．９８
０００３７．１１／３７．４５
２０２００３０
０
０００
０
００２０２００４４３．０８／０３８．４２／３６．１７
０３６．８０／３５．９２
３９．９８／４０．０２
３７．２７／３７．６９
０３５．６／３５．８７
２０２００５００００００００２０２００６００００００００２０２００７０００
０００００２０２００８３８．３７／３８．０４
３４．６３／３３．７３
３８．２１／３７．８９
３５．４２／３４．９８
３８．８７／３８．４６
３５．３９／３５．１９
３６．６／３６．８９
３４．６／３４．６５
２０２００９００００００００２０２０１０００００００００２０２０１１３７．９９／３６．１８
３２．２７／３２．１５
３７．１０／３８．０２
３３．４６／３３．８９
３６．７５３３．２８３５．４７／３５．６７
３３．３８／３３．４６
２０２０１２
０
０
０
０
０
０
０
０
表３ 提取试剂ａ提取核酸的Ｃｔ值
样本号
ｄ
宪政经济学
ｆ
试剂扩增（系统Ｅ）
中国政局ＯＲＦ１ａｂ
Ｎｅ试剂扩增（系统Ｆ）ＯＲＦ１ａｂ区Ｎ区
ｃ
ｆ
试剂扩增（系统Ｇ）
世界湿地大会ＯＲＦ１ａｂ
Ｎｅ试剂扩增（系统Ｈ）
ＯＲＦ１ａｂ区Ｎ区
２０２００１００００００００２０２００２００００００００２０２００３００００００００２０２００４０３６．４２／３６．７６
０３７．６６／３７．９８
０３５．８３／３６．６５
０３７．１５／３７．８７
２０２００５００００００００２０２００６００００００００２０２００７０
００００
０００２０２００８３９．５９／３９．６３
３４．７１／３４．５８
０３６．３８／３６．７４
３９．１８／３９．９７
３７．１９／３７．８９
０３６．４８／３６．３４
２０２００９００００００００２０２０１０００００００００２０２０１１４４．５７／４０．７１
３３．５８／３３．８２
０３３．０３／３３．６５
０３４．５７／３４．７４
０３４．０７／３４．７６
２０２０１２
０
０
０化学学报
０
０
０
０
０
２．３
各检测系统实际检测结果 １２个室间质评样本中，２０２００３及２０２００９未纳入统计指标，其余１０个样本的预期检测结果为５份２０１９ ｎＣｏＶ阳性，５份２０１９ ｎＣｏＶ阴性。８个检测系统实际检测结果见表４。８个检测系统均检测出２０２００４、２０２００８、
２０２０１１，均未检出２０２０１０（１２８ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）；对２０２００２（６４０ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）
，
只有Ｂ及Ｄ２个检测系统检出，
其余均未检出。表４ 各检测系统实际检测结果与预期检测结果比较
样本号２０１９ ｎＣｏＶ
预期结果成分
浓度
（ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）各检测系统实际检测结果Ａ
Ｂ
ＣＤＥＦＧ
Ｈ
２０２００１
阴性ＳＡＲＳ３．０×１０
６
阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性２０２００２
阳性２０１９ ｎＣｏＶ６４０
阴性阳性阴性阳性阴性阴性阴性阴性２０２００４阳性２０１９ ｎＣｏＶ３．２×１０３
阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性２０２００５阴性
ＰＢＳ—
阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性２０２００６
阴性ＮＬ６３１．６×１０６
阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性２０２００７
阴性ＨＫＵ１／２２９Ｅ９．４×１０５／２．７×１０６阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性２０２００８阳性２０１９ ｎＣｏＶ１．６×１０４阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性２０２０１０阳性２０１９ ｎＣｏＶ１２８
阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性阴性２０２０１１阳性２０１９ ｎＣｏＶ８．０×１０４
阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性阳性２０２０１２阴性
ＭＥＲＳ／ＯＣ４３
１．０×１０４／１．０×１０６
阴性
阴性
阴性阴性阴性阴性
阴性
阴性
２．４
不同检测系统对阳性结果各靶区域的检测情况 ２种扩增试剂扩增的靶区域相同，均为ＯＲＦ１ａｂ及Ｎ基因，８个检测系统对２个靶区域的检测结果见表５、表６。Ｎ基因的检测发现，
８个检测系统对于病毒载量高的样本的检测能力相同，主要区别在
于对病毒拷贝数低的样本的检测能力存在差异，
Ｂ
及Ｄ检测系统优于其他检测系统，起主导作用的主要是Ｂ及Ｄ２个检测系统所使用的ｅ扩增试剂的检测能力优于Ａ及Ｃ检测系统所使用的ｆ扩增试剂。对于ＯＲＦ１ａｂ基因检测发现，Ａ Ｄ检测系统检测到的ＯＲＦ１ａｂ基因的阳性率高于Ｅ Ｈ检测系统，Ａ Ｄ检测系统均使用的是ｂ快速提取试剂，而Ｅ Ｈ检测系统使用的是ａ提取试剂，提取试剂的提取效率对检测结果影响较大。
表５ 不同检测系统阳性结果的ＯＲＦ１ａｂ靶区域检测情况样本号ＡＢＣＤＥＦＧＨ２０２００２－－－－－－－－
２０２００４－－＋－－－－－
２０２００８＋＋＋＋＋－＋－
２０２０１１＋＋＋＋－－－－表６ 不同检测系统阳性结果的Ｎ靶区域检测情况
样本号ＡＢＣＤＥＦＧＨ２０２００２－＋－＋－－－－
２０２００４＋＋＋＋＋＋＋＋
２０２００８＋＋＋＋＋＋＋＋
２０２０１１＋＋＋＋＋＋＋＋
３ 讨论
本次室内质评的５份阳性样本中，要求实验室能够检出２０２０１１（８×１０４ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）、２０２００８（１．６×
１０４ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）、２０２００４（３．２×１０３ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）、
２０２００２（６４０ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）４个浓度水平的样本。８个检测系统均检测出２０２００４、２０２００８、２０２０１１；主要的
问题存在于对６４０ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ弱阳性样本检出能力。由于２０２００２（６４０ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）病毒拷贝数均低于ｆ扩增试剂及ｅ扩增试剂的检测下限，８个检测系统中，只有Ｂ及Ｄ２个检测系统检出，其余均未检出。
Ｂ及Ｄ检测系统中，提取试剂均为ｂ快速提取试剂，扩增试剂均为ｅ扩增试剂，扩增仪分别为ｃ及ｄ，提
取试剂及扩增仪相同的Ａ及Ｃ检测系统却未检出，说明其差别主要在于扩增试剂不同，２种扩增试剂均使用实时荧光ＲＴ ＰＣＲ法，虽然２种检测试剂声称的分析灵敏度均为１０００ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ，但从实验结果来看，２种试剂的分析灵敏度存在差异。扩增试剂ｅ各阳性样本检测的符合率总体优于ｆ扩增试剂。导致检测假阴性的原因涉及核酸提取和检测２个过程。
本实验室使用的核酸提取方法为自动化仪器＋磁珠提取法，使用的核酸提取试剂种类为２种。２种核酸提取试剂的磁珠吸附效率、用于核酸提取的样本量、洗脱体积也各有不同，因此，即使２种提取试剂磁珠吸附效率相同，提取核酸浓度亦不相同。本实验结果发现，阳性标本经提取试剂ｂ提取的靶基因检出率高于提取试剂ａ，同时其Ｃｔ值亦较ａ低。目前，多数试剂厂家选择２０１９ ｎＣｏＶ核酸序列的２个或２个以上的区域进行检测，ＯＲＦ１ａｂ、Ｎ区和Ｅ区是常见的检测区域［３］。本实验室使用的２种扩增试剂都是检测ＯＲＦ１ａｂ、Ｎ区，不同靶区域的敏感性也存在差异。本次室间质评样本为ＯＲＦ区和Ｎ区连接在一起的病毒样颗粒，因此ＯＲＦ和Ｎ区的数量完全一致，但是２种扩增试剂对２个区域检测的阳性率差异明显。总的来说，Ｎ区的阳性率高于ＯＲＦ区，病毒拷贝数越低，这一现象越显著。本次室间质评含有５份２０１９ ｎＣｏＶ阴性样本，主要考核检测的特异性以及是否存在实验室污染。从实验结果来看，８个检测系统对５份阴性样本均为未检出，与预期结果相
符，未发现假阳性，说明本室使用的２种扩增试剂与其他冠状病毒无交叉反应。
本研究使用的样本为基因工程方法制备的噬菌体病毒样颗粒模拟样本，与人体标本基质不同，可能导致不同核酸提取试剂对其处理能力的不同而使得结果产生差异，结果不能完全代表实际检测结果。另外，本研究仅仅对各试剂某一批号的检测能力作了简要比较分析，并且由于样本数量有限，也不能完全代表试剂的总体检测性能。因缺乏２０１９ ｎＣｏＶ核酸阳性样本，如有条件，应使用阳性样本代替室间质评样本，同时扩大样本数量，进一步对核酸提取试剂的提取质量、检测试剂性能等指标进行有效评价。实验室应尽量选用配套检测系统，如选用非配套系统，应该对配套系统与非配套系统进行比对，确保所选用的检测系统检测结果的准确性。同时，实验室应使用参与核酸提取过程的弱阳性样本和多份（如３份）阴性样本，进行室内质量控制，以有效监测实验室对弱阳性样本的检测能力和实验室污染；还应加强人员实验操作和结果解读能力的培训。
上海公安局长张学兵４ 参考文献
［１］王旭东，施健，丁伟峰，等．２０１９新型冠状病毒核酸检测的研究状况与应用探讨［Ｊ］．临床检验杂志，２０２０，３８（２）：８１ ８４．［２］李晨希，赵呈雪，鲍金凤，等．新型冠状病毒实验室检测技术及其进展［Ｊ］．临床检验杂志，２０２０，３８（４）：２７６ ２７９．［３］ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓ
ｅ（ＣＯＶＩＤ １９）ｔｅｃｈｎｉ ｃａｌｇｕｉｄａｎｃｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｔｅｓｔｉｎｇｆｏｒ２０１９ ｎＣｏＶｉｎｈｕｍａｎｓ［ＥＢ／ＯＬ］．（２０２０ ０４ ２７）．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｅｍｅｒｇｅｎｃｉｅｓ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／ｎｏｖｅｌ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ２０１９／ｔｅｃｈｎｉｃａｌｇｕｉｄａｎｃｅ／ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｇｕｉｄａｎｃｅ．
（收稿日期：２０２０ ０８ ０２）
（本文编辑：刘）
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