液相谱仪检定规程

液相谱仪检定

一、简介

液相谱仪是一类利用混合物在固定相和流动相间分配比的差异,对混合物进行分离、分析的仪器。可用于分离分析占有机物总数近80%的高沸点、热不稳定、高分子化合物,其中高效液相谱仪更具有高速、高效、高选择性、高灵敏度等优点,现已被广泛应用于实验室、化学化工、生物、医药学、环境、食品等领域。

JJG705-2014液相谱仪检定规程(以下简称新规程)由国家质量监督检验检疫总局于2014年2月14日颁布,并于同年8月14日正式实施,用以替代JJG705-2002液相谱仪检定规程。

（一）工作原理

液相谱仪由输液系统(包括输液泵、流动相储器和梯度仪)、进样系统、分离系统(包括谱柱和柱恒温器等)、检测系统和数据处理系统等组成。流动相被高压泵打入系统中,混合样品溶液由进样系统注入,跟随流动相流入谱柱。由于混合样品中不同组分在固定相和流动相间的吸附与分配系数不同而产生不同的运动速度,经多次吸附-解析过程逐步分离,由流

动相带入检测器中,并转换成电信号输送至记录仪,以谱图形式输出,进行定性或定量分析。

（二）检定方法

新规程在后续检定中主要考察仪器以下几项技术指标。

1泵流量稳定性SR

将仪器各部分连接好，流动相用100%甲醇,通过工作站或仪器操作面板设置检定流量(如表1所示,选择高、中、低三档流量逐一测定)，启动仪器，待压力稳定后,在流动相出口处用容量瓶(空瓶质量为W1)收集流出液,并同时用秒表计时t。在经检定合格的分析天平上称重,质量为W2,按式(2)、(3)计算实际所测流量值Fm,重复三次,得三次实测流量平均值,按式(1)计算SR。SR为三档流量中最大值。

其中ρt为经温度校正后的甲醇密度,T为测定流速时温度。

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表1泵流量设定值和收集时间

细胞骨架

流量设定值（mL/min）	收集时间（t/min）
光伏并网发电模拟装置0.2～0.5	10～20
0.6～1.0	5～10
＞1.0	5

2基线噪声和漂移

选用100%甲醇为流动相,流速定为1.0mL/min,C18谱柱,开启仪器,基线稳定后记录30min,读取瞬时最大基线峰-峰高值,再乘以检测器衰减倍数得到基线噪声(Nd),30min内基线偏离起始点的最大值为基线漂移,均用仪器自身物理量表示。不同检测器自身物理量和检定条件如表2所示。

表2检测器自身物理量和检定条件

延胡索酸检测器类型	自身物理量	检定条件
紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器	AU	波长254 nm
荧光检测器	FU	激发波长290 nm 发射波长330 nm
示差折光率检测器	RIU	参比池充满流动相
蒸发光散射检测器	mV	漂移管温度70℃（低温型35℃）、雾化气体流速2.5～3.0 L/min或气体压力280～350 kpa

3最小检测浓度

检定条件同2.2,记录进样量V为10~20μL标准物质(表3)所得谱图,积分得谱峰高H,根据式(4)计算最小检测浓度CL。

表3最小检测浓度检定标准物质选用

检测器类型	标准物质	标准物质浓度
紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器	萘-甲醇	1.00×10-7 g/mL
荧光检测器	萘-甲醇	1.00×10-7 g/mL
示差折光率检测器	甲醇中胆固醇	5.0 μg/mL
蒸发光散射检测器	甲醇中胆固醇	5.0 μg/mL

4整机性能

检定条件同2.2,注入一定体积标准物质(表4)得谱图,积分得谱峰保留时间(用于定性)和峰面积(用于定量),重复6次,根据式(5)分别计算定性、定量重复性。

表4整机性能检定标准物质选用

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检测器类型	标准物质	标准物质浓度
紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器	萘-甲醇	1.00×10-4 g/mL
荧光检测器	没有革命的理论就没有革命的运动萘-甲醇	1.00×10-5 g/mL
示差折光率检测器	甲醇中胆固醇	200 μg/mL
蒸发光散射检测器	甲醇中胆固醇	200 μg/mL

二、检定规程解读

1.泵流量误差检定中,新规程增加了不同温度下流动相密度的折算公式,引入了温度校正系数(0.00093g/cm3·℃-1),减小了由温度变化引起的误差。但甲醇具有一定挥发性,所以每次收集完流动相,应迅速盖上瓶塞及时称重,且三次计时和收集流出液应配合熟练,尽量降低人为误差对泵流量稳定性的影响。

2.基线稳定性是仪器性能好坏的一项重要指标,液相谱仪系统中若有未被排出的气泡则会引起谱带展宽,干扰检测器正常工作,影响基线稳定,使噪声偏大,因此在运行检定之前应先充分脱气,并用流动相冲洗泵和检测器。

3.新规程中所有检测器的性能检定均使用100%甲醇作为流动相。谱级甲醇是实验室中易得的常用试剂,针对多个检测器串联的仪器使用相同的流动相可避免在切换检测器进行检定时重新脱气、冲洗系统,大大缩短了检定时间。

4.原JJG705-2002中荧光检测器和示差折光率检测器在检定时分别选用的标准物质为硫酸奎宁/高氯酸水溶液和丙三醇/水溶液,但在检定过程中发现这两种标准物质的峰型较差,不可避免存在裂峰,且经常伴有一些杂峰难以区分,重现性较差,给检定带来一定困难。荧光检测器是利用化合物具有光致发光性质,受紫外光激发,能发射比激发波长较长的荧光对组分进行

检测,因此需要化合物中具有能够产生荧光的不饱和共轭键,新规程采用萘-甲醇溶液标准物质出峰利落,且对称性较好,可达到良好的分析效果。

5.蒸发光散射检测器是新规程中新增的检测器。在以往的校准工作中笔者一般采用85%甲醇/水作流动相,糖柱,葡萄糖为标准物质进行校验,峰型清楚,且重现性较好。新规程中采用胆固醇-甲醇溶液作为检定用标准物质,可直接使用C18柱,且流动相中没有水的存在,大大减小了对仪器本底造成的影响。

6.选用胆固醇-甲醇溶液作为示差折光率检测器和蒸发光散射检测器检定用标准物质时,会在进样初期出现倒峰,特别是对示差折光率检测器来说,胆固醇的响应值较低,影响到整机性能的检定。由于定性重复性和定量重复性是根据6次进样的相对标准偏差得到的,是一个统计的概念,与进样量无关,因此可以适当增加进样量以利于积分。

三、规程的主要修订内容及主要技术关键

主要修订内容:增加了蒸发光散射检测器的检定内容,同时将旧规程中荧光检测器检定用标准物质由硫酸奎宁-高氯酸水溶液改为萘-甲醇溶液,将示差折光率检测器检定用标准物质由原

来的丙三醇-水溶液改为甲醇中胆固醇溶液标准物质等。下面对修订的相应内容进行具体介绍及解释:

（一）增加了引言内容

根据JJF1002-2010《国家计量检定规程编写规范》的规定,引言内容为必备章节,主要列出了与旧规程相比较的主要技术变化,所替代规程的历次版本发布情况等。

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