●杆状病毒表达系统介绍
●杆状病毒蛋白表达系统的优势
●杆状病毒表达载体系统（BEVS）
●杆状病毒表达宿主细胞
●表达优化条件
●翻译后修饰对蛋白表达的影响
●高通量表达
●总结
杆状病毒介绍
1.杆状病毒是一类具有囊膜包裹的双链环状
DNA病毒。
2.杆状病毒在其生命周期中有两种不同的形态：
一种为出芽型病毒（budded virus, BV），另
一种为包含体病毒（Occlusion‐derived virus, OV）。
3. BV由糖蛋白GP64包裹的单一囊膜蛋白和膜蛋白构成。
4. OV由蛋白结晶基体包裹的多囊膜病毒粒子。
5. 研究最多的杆状病毒株为苜蓿银蚊夜蛾(autogra—
phacalifornica)多核型多角体病毒(multiple nuclear
polyhedro‐sis virus，MNPV)，简称AcMNPV或AcNPV。
6. AcMNPV只侵染鳞翅类幼虫。
竹镂舟蛾杆状病毒生命周期
●早期（0‐6h PI）
•核衣壳迁移到细胞核
•病毒DNA释放
•开始早期基因表达
●晚期（6‐24h PI）
•更多DNA复制
•新产生的核衣壳离开细胞核，随后在离开细胞质
•的过程中得到囊膜蛋白
•产生新的出芽病毒
●极晚期
Courtesy: Dr. Linda Lua, The University of Queensland, Australia •出芽病毒减少
•核衣壳在细胞核内得到囊膜蛋白形成MNPVs
平望实验小学
•MNPVs以多晶体形式出芽，主要是多角体蛋白，形
夏目漱石从此以后成包含体病毒。
多角体启动子是杆状病毒表达载体系统的主要元件。
优点缺点
大肠杆菌成本低、表达量高。缺乏蛋白质翻译后加工机制；目的蛋白不可溶，蛋白生物活性低。
酵母表达量高，可以翻译后加工，易实现高密度发酵。蛋白质量不理想。哺乳动
物细胞
重组蛋白生物活性高。成本高；表达水平低，技术和环境要求高。昆虫
细胞
反垃圾邮件系统
重组蛋白生物学活性高；表达水平高；能同时表达多个基因。重组蛋白糖基化程度低。RTS 快速，无需克隆，表达量高。成本高。
酵母
哺乳动物细胞昆虫细胞RTS体外表
达系统大肠杆菌昆虫杆状病毒与其他蛋白表达系统比较
在辉瑞制药公司，杆状病毒是其第二
大蛋白表达系统。
山东辱母案例分析
杆状病毒系统表达重组蛋白的优势
表达量高（可达细胞总蛋白的50%），大多数为有生物功能的可溶性蛋白；
可进行翻译后修饰；
可进行磷酸化修饰；
可形成正确折叠的二硫键；
可进行N‐和O‐型糖基化修饰；
可去除信号肽；英德市卫生局
易进行规模化生产，昆虫细胞比哺乳动物细胞操作简单；
相对于其他真核表达系统成本较低；
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