昆虫病毒空斑分析

5.1 4%低熔点琼脂糖培养基的配制
5.1.1 微波炉加热或者70℃水浴,溶化4%低熔点琼脂(PBS溶解)。当低熔点琼脂溶化后,将下列物品放入水浴中:
    空的100ml无菌瓶
    Sf-900II纸币识别器培养基
5.1.2 待低熔点琼脂溶化后,马上将低熔点琼脂、无菌瓶及Sf-900II培养基放入超净台。
5.1.3 将30ml 龙牙星Sf-900II培养基及10ml 4%低熔点琼脂放入100ml无菌瓶中,温和混匀。
5.1.4 准备好后,于40℃保存。
5.2 蚀斑试验
5.2.1在转染当天,收获sf9细胞,并准备30ml细胞悬液,调整细胞密度为6×105细胞,于6孔板中每孔铺2ml细胞。
5.2.2 室温放置1hr,让细胞贴壁。
5.2.3 1hr后,用倒置显微镜观察细胞贴壁的状态,汇合度50%细胞贴壁。
寒暄语5.2.4 在sf-900II SFM中将病毒稀释8个浓度梯度(10-110-8)。取0.如何遵守维护贯彻党章2ml病毒放入1.8ml培养基中,稀释为10-1,然后从10-1浓度的病毒中取0.2ml病毒放入1.8ml培养基中,稀释为10-2,依此类推。
5.2.5 将6孔板中的培养基移去,马上加入1ml病毒稀释液。
5.2.6 培养1hr后,马上将40℃水浴的平板培养基放入超净台。
5.2.7 将病毒液取出,马上将2ml的平板培养基放入。(动作要快,以免培养基凝固)。
5.2.8 室温放置10-20min。
5.2.9 将培养基放于27℃,5%CO2海尔大王子冰箱培养箱中培养。
5.2.10 在感染第四天时,用sf-900II SFM培养基配制1mg/ml的中性红溶液,抽滤除菌。
等量分流器5.2.11 将1.5ml的1mg/ml的中性红溶液加入16.5ml的sf-900II SFM培养基中配制中性红溶液,混匀,然后放入40℃水浴中。
5.2.12 将4%的低熔点琼脂溶解,放入40℃水浴中,5min。
5.2.13取6ml 4%的低熔点琼脂加入中性红溶液中,40℃水浴保存。
5.2.14 迅速将配好的低熔点琼脂中性红溶液,按每孔1ml,加入6孔平板培养基中。
5.2.15 待凝固后,于27℃,5%CO2培养箱中继续培养3-6天。
5.2.16 在转染后第7-10天时,用细胞培养级别的水配制1mg/ml的中性红溶液2。
5.2.17 每孔加入0.5ml的1mg/ml的中性红溶液2,室温培养1-2hr。
5.2.18 小心用移液器取出多余的染液,计数。
一般情况下,从杆状病毒中获得的病毒滴度为:
P1:1×106----1×107
P2:1×107----1×108

本文发布于:2024-09-21 06:02:32,感谢您对本站的认可!

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