张继斌;王玉;徐浪;陈志元;丁苗
【摘 要】建立苦荞麦中芦丁、槲皮素、酚、酚-3-o-芸香糖苷4种黄酮类成分的含量测定方法,比较不同产地苦荞麦中黄酮类成分的含量差异.采用高效液相谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定不同产地苦荞麦样品中黄酮类成分的含量,采用统计学方法分析不同产地4种成分含量的差异.方法学考察中线性范围、精密度、稳定性、重复性及加标回收试验均符合规定,云南产苦荞麦中槲皮素、酚含量明显高于其他产地,芦丁、酚-3-o-芸香糖苷含量相差不大.该方法可用于苦荞麦中黄酮类成分的含量测定,为苦荞麦原料的采购提供技术依据.
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2018(039)024
【总页数】6页(P143-148)
【关键词】苦荞麦;黄酮成分;含量;产地
【作 者】张继斌;王玉;徐浪;陈志元;丁苗
民事案件案由规定【作者单位】劲牌生物医药有限公司,中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室,湖北大冶435100;劲牌生物医药有限公司,中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室,湖北大冶435100;劲牌生物医药有限公司,中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室,湖北大冶435100;劲牌生物医药有限公司,中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室,湖北大冶435100;劲牌生物医药有限公司,中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室,湖北大冶435100
【正文语种】中 文
苦荞麦为蓼科（Polygonaceae）荞麦属植物苦荞麦（Fagopyrum tataricum L.Gaertn）的干燥成熟种子，又名野荞麦、鞑靼荞、万年荞、野南荞[1]。《本草纲目》中记载：苦荞麦味苦、性平寒，有益气力、续精神、利耳目、降气、宽肠健胃的作用。苦荞麦营养丰富，含有黄酮类化合物（如芦丁、槲皮素、山萘酚等，其中芦丁含量较多）、多种氨基酸、肌醇衍生物、多糖、不饱和脂肪酸及多种微量元素等成分[2-7]。现代药理研究表明，苦荞麦具有抗氧化、抗肿瘤、抗敏、抗菌、抗病毒、降血脂、降血压等作用[8-11]。苦荞麦主要集
中种植在我国西南地区的四川、云南、陕西、甘肃、山西、贵州等省的高海拔山区、高原和高寒地区[12]，四川凉山和云南昭通地区为主要产地。试验建立苦荞麦中芦丁、槲皮素、酚、酚-3-o-芸香糖苷4种黄酮类成分的含量测定方法，选用四川、云南重点产区及贵州、陕西产地的苦荞麦样品，分别对其中的4种黄酮类成分进行含量测定与对比，为苦荞麦原料的采购提供技术依据。
1 试验材料
1.1 仪器与设备
1200型高效液相谱仪：美国安捷伦科技公司；AB135-S型电子天平：梅特勒-托利多公司；W3-100SP型恒温水浴锅：上海申生公司。
1.2 材料与试剂
苦荞麦样品（采自不同产地）：直接在产地收集；芦丁标准品（批号：100080-201610，纯度：91.9%）、槲皮素标准品（批号：100081-200907，纯度 96.5%）、酚标准品（批号：100861-201310，纯度 93.2%）、酚-3-o-芸香糖苷标准品（批号：100083-2
01509）：中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈（谱纯）：Fisher Chemical；磷酸（谱纯）：Honeywell；无水乙醇（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司。
佛冈县第四小学2 试验方法
2.1 谱条件
液相谱条件：紫外检测器，Sepex C18谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相；按照表1条件进行梯度洗脱，检测波长为360nm，流速 1.0 mL/min，进样体积：10 μL，柱温：30 ℃，上述谱条件下，芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚对照品高效液相谱图见图1。
表1 梯度洗脱表Table 1 Gradient elution table时间/min 乙腈/% 0.1%磷酸/%0 10 90 20 25 75 40 40 60
灶神之妻
图1 芦丁、酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、酚混合对照品高效液相谱图Fig.1 HPLC chromatograms of a mixture of rutin，quercetin，kaempferol and kaempferol-3-o-rutinoside
2.2 供试品溶液制备河北科技师范学院图书馆
取苦荞麦样品粉碎，过四号筛，精密称取粉末3 g，精密加入60%乙醇50 mL，称定重量，90℃水浴回流2 h，取出，冷却，称重，并用60%乙醇补足减失的重量，用0.45 μm微孔滤膜过滤后取续滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液制备
分别精密称取芦丁对照品47.24 mg于10 mL容量瓶中、酚-3-o-芸香糖苷对照品20.89 mg于50 mL容量瓶中、槲皮素对照品14.51 mg于50 mL容量瓶中、酚对照9.31 mg于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为对照品储备液，芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚的浓度分别为4 341.356、417.8、280.043、173.538 4 mg/L。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性范围试验
分别精密吸取2.3项下芦丁对照品储备液9 mL、酚-3-o-芸香糖苷对照品储备液8 mL、
槲皮素对照品储备液2 mL、酚对照品储备液5 mL于25 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，得到混合对照品使用溶液，其中芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚浓度分别为1 562.888 16、133.696、22.403 44、34.707 68mg/L。分别吸取上述混合对照品使用溶液0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、5.0、10.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，甲醇稀释并定容至刻度，用0.45 μm微孔滤膜过滤后作为对照品溶液。按照2.1谱条件进行谱分析，经谱分析分别得到各浓度芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚对照品谱峰的峰面积，分别以对照品溶液浓度（x）为横坐标，以对照品溶液峰面积（Y）为纵坐标建立标准曲线。
芦丁标准曲线方程：Y=9.543 206 76x+82.471 516，R2=0.999 56；酚-3-o-芸香糖苷标准曲线方程：Y=7.999 238 67x+3.329 378，R2=0.999 84；槲皮素标准曲线方程：Y=21.907 088 9x+0.188 849 5，R2=0.999 95；酚标准曲线方程：Y=23.426 031 9x+1.950 813 3，R2=0.999 85；结果表明，芦丁浓度在15.028 88 mg/L～1 562.888 16 mg/L范围内线性关系良好，酚-3-o-芸香糖苷在1.336 96 mg/L～133.696 mg/L范围内线性关系良好，槲皮素在0.224 03 mg/L～22.403 44 mg/L范围内线性关系良好，酚的浓度在0.347 08 mg/L～34.707 86 mg/L范围内线性关系良好。
2.4.2 精密度试验
精密称取苦荞麦样品3.086 7 g，按照2.2方法制备供试品溶液，在2.1谱条件下连续进样6次，记录各成分的谱峰面积，结果芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚峰面积的RSD值分别为0.32%、0.31%、0.39%、1.79%，表明仪器的精密度良好。
2.4.3 稳定性试验
取2.4.2供试品溶液，分别在2.1谱条件下于0、1、2、4、8、12 小时进样，记录各成分的谱峰面积，结果芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚峰面积的RSD值分别为0.47%、0.45%、0.40%、1.73%，表明供试品溶液在12小时内稳定性良好。
2.4.4 重复性试验
starswar6精密称取苦荞麦样品6份，每份3 g，按照2.2方法制备供试品溶液，在2.1谱条件下进行谱分析，利用建立的标准曲线分别计算各供试品溶液中各成分的含量。结果样品中芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚的平均含量分别为1.884%、0.133%、0.012 7%、0.000 73%，重复性试验的RSD值分别为1.38%、1.41%、1.61%、2.57%，表明检
测结果重复性良好。
2.4.5 加标回收试验
精密称取苦荞麦样品6份，每份0.75 g，分别加入相当于样品中芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚含量的80%、100%、120%3个梯度的对照溶液各2份，按照2.2方法制备供试品溶液，在2.1谱条件下进行谱分析，利用标准曲线计算芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚的含量及回收率。计算所得芦丁、酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素、酚的平均回收率分别为98.80%、105.88%、96.08%、107.04%，加标回收试验的RSD值分别为3.54%、2.61%、3.47%、3.32%，表明检测方法的准确度良好。具体数据见表2～表5。
表2 芦丁加标回收试验数据Table 2 Data of rutin plus standard recovery test取样量/g 样品中质量/mg加入标准品质量/mg实际测得质量/mg 回收率/%0.750 1 14.132 45 10.959 63 24.974 61 98.93 0.751 0 14.149 41 10.959 63 24.658 13 95.88 0.771 5 14.132 45 13.882 19 28.440 34 103.07 0.757 3 14.268 11 13.882 19 28.555 72 102.92 0.750 2 14.134 34 18.804 76 30.100 59 95.01 0.758 6 14.292 60 18.804 76 30.591 85 96.99
表3 酚-3-o-芸香糖苷加标回收试验数据Table 3 Data of kaempferol-3-o-rutinoside plus standard recovery test取样量/g 样品中质量/mg加入标准品质量/mg实际测得质量/mg 回收率/%0.750 1 0.998 01 0.907 20 1.959 08 105.94 0.751 0 0.999 22 0.907 20 1.928 28 102.41 0.771 5 1.026 49 1.149 12 2.269 97 108.21 0.757 3 1.007 60 1.149 12 2.268 67 109.74 0.750 2 0.998 15 1.391 04 2.437 82 103.50 0.758 6 1.009 33 1.391 04 2.476 60 105.48
表4 槲皮素加标回收试验数据Table 4 Data of quercetin plus standard recovery test取样量/g 样品中质量/mg加入标准品质量/mg实际测得质量/mg 回收率/%0.750 1 0.095 57 0.080 09 0.174 18 98.15 0.751 0 0.095 68 0.080 09 0.169 50 92.17 0.771 5 0.098 29 0.098 58 0.196 30 99.42 0.757 3 0.096 48 0.098 58 0.194 22 99.16 0.750 2 0.095 58 0.117 06 0.202 52 91.35 0.758 6 0.096 65 0.117 06 0.209 30 96.23
表5 酚加标回收试验数据Table 5 Data of kaempferol plus standard recovery test取样量/g 样品中质量/mg加入标准品质量/mg实际测得质量/mg 回收率/%0.750 1 0.005 46 0.004 51 0.010 01 100.71 0.751 0 0.005 47 0.004 51 0.010 05 101.57 0.771 5 0.005 62 0.
005 55 0.011 65 108.65 0.757 3 0.005 52 0.005 55 0.011 46 107.12 0.750 2 0.005 46 0.006 59 0.012 19 101.92 0.758 6 0.005 53 0.006 59 0.012 58 107.04铁布衫
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