背景和目的:消癌解毒方是国医大师周仲瑛教授根据多年辨治肿瘤的临床实践经验,创制的肿瘤的有效验方。导师吴勉华教授课题组通过大量的前期临床和实验研究,证实该方可以有效多种恶性肿瘤。
然而,对于消癌解毒方中的有效活性成分如何发挥抗癌效果以及活性成分之间的相互作用机制尚不明确。本课题旨在研究其君药白花蛇舌草的有效活性成分2-羟基-3-甲基蒽醌(HMA)的抗肺癌作用,并观察消癌解毒方提取物的抗肺癌、胶质瘤、乳腺癌和结肠癌作用,以及消癌解毒方中多种有效成分(山萘酚、熊果酸、齐墩果酸、豆留醇、麦角甾醇、常春藤皂苷元、2-羟基3-甲基蒽醌、人参皂苷Rg3、麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D’)的抗胶质瘤作用,并进一步深入探讨白花蛇舌草中的有效活性成分熊果酸(UA)和麦冬中的有效活性成分麦冬皂苷D’(OPD’)的联用抗胶质瘤效果,以期探究消癌解毒方抗肿瘤的物质基础,并评价复方中不同组分联用的协同作用。
三峡天丛方法:MTS、CCK-8法观察上述提取物及化合物对细胞增殖的影响;克隆形成实验检测对细胞活性的影响;Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞 周期;划痕实验和Transwell实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;肿瘤干细胞自我更新实验检测肿瘤细胞球形成能力;蛋白芯片检测多种相关的细胞因子表达;Real time-PCR法、Western Blot法分别检测相关基因和蛋白的表达水平。结果:HMA可以抑制肺癌细胞A549的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,抑制A549细胞的侵袭能力,此抑制作用与下调IL-6诱导的MMP-1,MMP-2和MMP-9有关。 HMA可以逆转IL-6诱导上升的JAK2和STAT3的磷酸化水平。除此之外,还可以降低A549细胞上清中一系列炎性相关因子的表达,包括IL-6、IL-6R、G-CSF、IL-8、MCP-1、RANTES和TNF-α等。uuv
ox0000008e河北华裕家禽育种有限公司消癌解毒方水提物、乙醇热提物、乙醇冷提物、正丁醇提取物有一定的抗肺癌、胶质瘤、乳腺癌、结肠癌作用,其中对胶质瘤细胞的抑制作用最显著。乙醇提取物和正丁醇提取物的效果优于水提物。
消癌解毒方中12种有效成分(山萘酚、熊果酸、齐墩果酸、豆甾醇、麦角甾醇、常春藤皂苷元、2-羟基3-甲基蒽醌、人参皂苷Rg3、麦冬皂苷B、短葶山麦冬皂苷C、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D’)对人胶质瘤U118、LN229、SW1783和SW1088细胞的增殖活性具有不同程度的
抑制作用,其中以君药白花蛇舌草中的有效成分UA和臣药麦冬中的有效成分OPB、DT-13和OPD’的作用尤为显著。UA和OPD’可显著抑制人胶质瘤U118、LN229、SW1783和SW1088细胞的生长,呈现剂量依赖性,其中以LN229细胞更为敏感。
UA和OPD’联用在抑制LN229细胞的增殖、活性、迁移侵袭能力和肿瘤干细胞自我更新能力上呈现协同效应,并且能协同增加LN229细胞的凋亡。OPD’能够引起LN229细胞G2/M期阻滞,在对细胞周期的调控上UA和OPD’联用未显示出协同作用。
此外,人凋亡因子蛋白芯片结果显示,UA和OPD’联用可以协同增加过氧化氢酶的水平,降低Survivin、Claspin、HO-1和HTRA2的水平。结论:消癌解毒方中有效活性成分HMA可以抑制人肺癌细胞的增殖和侵袭能力,可能与其下调IL-6诱导的JAK2/STAT3通路有关。
消癌解毒方中有效成分UA和OPD’具有显著的抗胶质瘤作用,二者联用效果优于单用组,显示出了协同作用。我们的研究验证了中药复方组方的科学性,为部分阐明消癌解毒方的抗癌作用机制提供了实验依据,并为研究中医复方中不同组分的协同增效作用提供了参考。
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