在祖国传统医学日益走向世界的今天，分离活性植物化学物，确认其保健功能，并进一步开发成具有中国特的功能性食品，是目前营养学的研究方向之一。 近年来，随着国内、外对植物化学物研究和应用的逐渐广泛深入，银杏叶（Ginkgo biloba L.）中的总黄酮（Total flavonoids ,TF）已被证实为具有药用价值和较高保健作用的有效活性成分，日益得到重视，具有极大的研究价值和开发潜力。而银杏叶作为一味重要的中药材，早已被作为君药及复方辅药应用于多种疾病的预防与。随着对银杏叶有效成分及其药理作用的进一步研究，其在临床上也将得到进一步的应用。 为此，我们以银杏叶为研究原料，总黄酮为指标成分，对其所含的总黄酮成分进行提取、分离纯化及含量测定，以使其物质基础明确、质量稳定可控、使用检测方便，能作为功能性基料使用进行工业化生产，开发相应的保健食品，供应市场。
β-环状糊精（β-cyclodextrin,β-CD）具有超微结构，呈分子状，分散度大，易于吸收，因而可提高生物利用度；药物被包合于β-CD分子胶囊中，可控制释放，减少刺激性和副作用，减
少挥发，使液态药物粉末化，而且β-CD为碳水化合物能被人体吸收利用，无蓄积作用[1]。且不改变客分子的理化性质，在药物制剂中发挥了积极作用。环状糊精对化学药物具有良好的包合性能，因而在中药领域有着广泛的研究和应用。
因此本课题即是优化银杏叶总黄酮的提取、纯化工艺且采用β-CD作为包合材料，对水难溶性的药物分子进行包合，制得环状糊精包合物。由此可以大大提高银杏叶黄酮类化合物的生物利用度，并对其进行稳定性验证。
1.1 银杏叶简介
银杏（Ginkgo Biloba ）属裸子植物银杏科的单型种，落叶大乔木，又名鸭脚、白果。为新生代第四纪冰川时期的孑遗植物，素有“活化石”之称。银杏是我国的特产植物，世界上70%的银杏生长在我国。银杏集食用、药用、材用、绿化美化环境于一体，被誉为“东方的圣者”，是中华人文的有生命的纪念塔，堪称中国的国树，也称植物中的“大熊猫”。银杏叶（Ginkgo biloba L.）为银杏科植物银杏的干燥叶[2] 。秋季叶尚绿时采收，及时干燥。具有敛肺、平喘、活血化瘀、止痛的功效，临床用于改善微循环，防治心脑血管疾病等[3,4]。
银杏叶中黄酮类化合物含量较高，为2.5% 调查：中小学生劳动教育脱离日常～5.91%，主要有效成分为黄酮类和萜内酯类，其中银杏黄酮具有扩张血管、抑制血小板活化因子、抗氧化、调血脂等作用，可用于心脑血管疾病、肾病综合征、糖尿病、血管性痴呆等。
1.1.1 银杏叶的主要成分
黄酮类化合物(flavonoids)主要是指基本母核2-苯基原酮(2-Phenyl-chromone)类化合物，现在则是泛指两个苯环（A-与B-环）通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。其中，黄酮醇类(flavonol)化合物是在黄酮基本母核3位上连有羟基或其他含氧基团[5]。目前从银杏叶中分离得到的黄酮类化合物有35种之多[6,7]，已明确结构的有20种，其结构式可归为以下六种（见图1-1）。
图1-1 黄酮类化合物的结构图
银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶[1]。银杏叶中药用成分主要包括:银杏黄酮( Flavonoids) 、萜内酯、聚异戊烯醇、有机酸、银杏酸等，其中银杏黄酮和萜内酯含量较大，其效用也被广为认可。银杏黄酮具有捕获游离基、清除活性氧、促进血液循环、肝中毒、抗肿瘤活性及脑代谢等功能 [8] 。另外银杏叶还含有39种营养及功能成分，这其中包括:蛋白质、糖、维生素C、维生素E、胡萝卜素、18种氨基酸、25种矿物质营养微量元素，其中钙、磷、硼、硒含量较高，其他如人体所需的铁、氟、铜、锰、锌、铬等含量也较丰富。其中维生素C、维生素E、胡萝卜素、硒、锌、铜等作为营养性抗氧化剂与非营养性抗氧化剂—银杏黄酮、萜内酯、儿茶素、多酚类等对保护机体不受自由基所致的氧化和损伤发挥着重要的作用[9] 。
1.1.2 银杏叶黄酮的药理研究
（1）抑制血小板聚集
体外给予银杏双黄酮对ADP和胶原诱导的血小板聚集均有抑制作用，同时也抑制胶原诱导的血小板变形和减慢血小板最大聚集程度，抑制血栓形成[10]。
（2）调血脂
银杏黄酮可明显提高高密度脂蛋白 (HDL)，对抗血小板活化因子，降低血液黏度、血浆胆固醇、血纤蛋白原，改善血浆胆固醇和磷脂的比例。
（3）对血管的作用
槲皮素、山萘酚及异鼠李素3个化合物均具有扩张血管和解除痉挛的作用。能扩张冠脉血管，增加冠脉血液流量。Kubota等[11]实验证实银杏叶提取物(GBE)导致血管舒张的主要成分是槲皮索，它可通过促进血管内皮细胞内钙离子浓度的升高，促进NO联合早报合成和释放，导致血管舒张 。 （4）改善脑循环，保护大脑作用
GBE能降低脑血管阻力，改善脑循环，增加脑血流量，改善脑的营养，有助于改善记忆和脑功能不全或与年龄有关的中枢神经系统功能障碍，对大脑及血脑屏障有保护作用。
（5）抗氧化作用
银杏黄酮对细胞氧化损伤有保护作用。预先给予大鼠嗜铬细胞瘤细胞 (PC12)2mmol·L-1 过氧化氢，银杏黄酮标准提取物能提高PC12细胞的生仔能力。氧化损伤后给予抗氧化剂效果最明显。银杏黄酮防止细胞死亡最有效的浓度是机麻160mg·mL-1，能明显降低过氧化脂质产
物。在PC12细胞中，抗氧化剂对氧化所致的蛋白质损伤保护效果不明显，对脂质保护效果较强[12]。
雌激素能阻断氧化损伤所致的神经元变性。实验表明，两种银杏提取物EGb761和Cp202都能阻止肾上腺和神经 PC12细胞死亡；在神经 PCl2细胞，槲皮素和1 7-β雌二醇能逆转甲苯吡啶神经毒性效应。蛋白质印迹技术显示，甲苯吡啶所导致的损伤能影响多巴胺载体蛋白表达，但不影响雌激素β受体蛋白的表达。在神经细胞中EGb76l和Cp202也调节多巴胺和雌激素β受体蛋白的表达。从以上结果可见，银杏黄酮具有抗氧化作用并可影响蛋白质的表达[13]。
（6）抗动脉粥样硬化作用
银杏黄酮苷对人巨细胞病毒 (human cytomeg-- alovirus，HCMV)感染在促进动脉粥样硬化发生和发展中有保护作用。银杏黄酮苷可抑制竹镂舟蛾HCMV感染 HUVEC304细胞的超常增生及NO分泌量的降低，对动脉粥样硬化有一定的防治作用[14]。
（7）促进脂肪细胞的脂解作用
银杏黄酮能促进脂肪细胞的脂解。用完全不同的3T3-LI脂肪细胞，银杏黄酮浓度范围在0.005～100μmol·L-1 时，对脂肪细胞的脂解作用进行研究。未处理过的细胞脂解活性是每1h(0.62±0.15)μmo1·mg-1，除金松双黄酮外，其它银杏黄酮以浓度依赖性方式促进脂肪分解。银杏黄酮 0.1～0.5μmol·L-1时，细胞脂解活性出现最高峰。随着浓度逐渐升高，细胞脂解活性逐渐降低，在100 mol·L-1 时消失。银杏黄酮10新宽联～l00μmol·L-1 时只有部分细胞失去活性[15]。
（8）替代雌激素
银杏黄酮可作为雌激素受体调节器的一部分，成为绝经后妇女雌激素替代疗法的一种选择。在竞争性捆绑实验中，发现银杏黄酮对雌激素α受体和雌激素β受体均有作用，但对β受体亲和力强于α受体。在 E-screen筛选实验中，这些化学物质诱导的细胞中，受体阳性的MCF-7细胞增生，受体阴性的MDA．MB-23l细胞不增生。三苯氧胺能阻断这种化学物质诱导的细胞增生。而且，银杏黄酮能诱导 MCF-7细胞中PS2和黄体酮受体的转录。这些研究结果显示，银杏黄酮通过雌激素受体作用途径显示了微弱的雌激素活性[16]。
（9）抗肿瘤作用
银杏黄酮可防护环磷酰胺的致畸作用；对体内体外肿瘤细胞的增生均具抑制作用[17] 。 约翰穆勒
（10）对细胞转录的影响
对人膀胱癌细胞给予银杏黄酮后孵育后应用基因芯片研究mRNA的表达。结果显示，银杏黄酮能够促进血红素加氧酶-1、线粒体超氧化物歧化酶、g-谷氨酰半胱氨酸合成酶亚型的转录，促进相应的蛋白质合成。而且，银杏黄酮也使细胞内谷胱甘肽的合成增加，3H-胸腺嘧啶核苷的合成降低，促进 DNA 的修复合成。银杏黄酮促进的一系列转录反应增强了细胞的抗氧化能力，阻断了DNA的受损[18]。
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