·75·
本研究课题组前期研究已发现苦荞茎叶提取物对马铃薯、甘薯PPO 具有显著抑制效果，但对其中有效活性成分还未知。有研究发现，氨基酸和黄酮类物质对PPO 具有抑制效果，因此本研究采用高效液相谱法对苦荞茎叶提取物中的黄酮类物质和氨基酸进行定性和定量分析。 1.材料与方法1.1 材料 黔农70141.2 实验方法1.
①仪器： ThermoFisher U3000液相谱仪。
②试剂：17种氨基酸酸混合标准品；浓盐酸、异硫氰酸苯酯、三乙胺、乙腈（谱纯）、醋酸钠。
③溶液制备：5%盐酸甲醇溶液：用量筒取5 mL 盐酸缓慢加入95 mL 甲醇中；
氯仿甲醇溶液（体积比1: 1）：取50 mL 氯仿与50 mL 甲醇混合。
④ 样品分析方法
中俄边境
参照任羽（2018）报道的方法进行样品前处理和测定1.2.2 黄酮类物质含量测定①仪器
Agilent 1260高效液相谱仪配备DAD 检测器。②对照品溶液的制备
分别精密称取对照品芦丁 10 mg、槲皮素 10 mg 和山柰酚，酚-3-O-芸香糖苷 10 mg，于 10 mL 量瓶中，用甲醇定容，配成浓度分别为 1.0，1.0，1.0和1.0 mg /mL 的对照品贮备液。
将储备液芦丁，槲皮素，山柰酚稀释制备成浓度为200 mg/L，100 mg/L，50 mg/L 的混标，过0.45μm 滤膜，上机分析。
酚-3-O-芸香糖苷样品浓度为1000 mg/L，500 mg/L，100 mg/L，过0.45μm 滤膜，上机分析。
③供试品溶液的制备
四种形态和教育惩处相结合
分别精密称取样品 5 g，用90%甲醇索氏提取90 min，旋转蒸发浓缩，用甲醇定容至50 mL，取样过0.45μm 滤膜上机分析。
④谱条件
谱柱: CAPCELL PAK-C18 (4. 6 mm × 250 mm，5
μm)
流动相组成：不同配比的乙腈-0. 2% 磷酸溶液混合液（见下表）
上样量为10 μL、进样速度为1 mL·min-1、检测波长为
365 nm。
时间 /min 乙腈 / %0.2%磷酸水溶液(0. 2 % H3PO4 ) / %
0～820808～13406013～ 22
40
60
⑤含量计算公式：
含量（g/kg）=浓度*定容体积/（取样量*1000）2 结果与分析2.1 氨基酸成分分析
图1 苦荞茎叶提取物中游离氨基酸测定HPLC谱峰图
A，氨基酸HPLC测定标准品谱峰图；
苦荞茎叶提取物中黄酮与氨基酸含量测定
刘 辉 尹 旺 熊 江
（贵州省农业科学院生物技术研究所，贵州 贵阳 550006）
进坑村摘 要：苦荞茎叶提取物中的氨基酸对薯类块茎多酚氧化酶(PPO)具有抑制效果。以黔农7014为材料，进行室内发
芽培养获得幼苗，收集茎叶，并磷酸盐缓冲液为提取液获得苦荞茎叶提取物，利用高效液相谱法对其中的氨基酸和黄酮类物质进行鉴定并确定其含量。结果表明，苦荞芽苗提取物中以精氨酸和胱氨酸含量最高，由于胱氨酸中含有巯基基团，对PPO 具有螯合作用，因而可以推测胱氨酸和芦丁是抑制薯类褐变的主要氨基酸成分。研究结果可为探寻PPO 的天然抑制剂奠定关键基础。
关键词：苦荞；茎叶；黄酮；氨基酸文章编号：ISSN2096-0743/2019-30-0075
B，黔苦7014苦荞茎叶提取物中氨基酸HPLC谱峰图表2 苦荞茎叶提取物中游离氨基酸含量大学生新闻联播
测试项目含量（g/kg）
精氨酸9.63
胱氨酸 2.91
甘氨酸 2.78
丝氨酸 1.88
组氨酸 1.14
苏氨酸 1.1
丙氨酸 1.08
缬氨酸0.82
蛋氨酸0.62
酪氨酸0.58
亮氨酸0.57
赖氨酸0.56
苯丙氨酸0.52
异亮氨酸0.5
脯氨酸0.3
天冬氨酸0.11电解质饮料
谷氨酸0.02
从表2与图1中，可以看出，苦荞茎叶提取物中精氨酸含量最高，达9.63 g/kg，含量在1 g/kg以上的氨基酸包括7种（精氨酸、胱氨酸、甘氨酸、丝氨酸、组氨酸、苏氨酸、丙氨酸），考虑到氨基酸浓度太低，对PPO抑制效果的贡献率越低，因此，后面的抑制PPO效果实验选取这7种氨基酸。由于胱氨酸中含有巯基基团，推测对PPO起主要抑制作用的氨基酸成分是胱氨酸。
2.2 黄酮类物质成分分析
图10 苦荞茎叶提取物中黄酮含量测定HPLC谱峰图
A，黄酮类物质HPLC测定标准品谱峰图；B，黔苦7014苦荞茎叶提取物中黄酮HPLC谱峰图
表3 苦荞茎叶提取物中黄酮含量测定结果
黄酮种类含量（mg/kg）
芦丁34546.63
槲皮素648.37
酚26.51
视频模块酚-O-芸香糖苷1772.3从图10表3中可知，苦荞茎叶提取物中芦丁含量最高，含量为34546.63 mg/kg，以苦荞粉干重计为3.46%。其次为山萘酚-3-O-芸香糖苷，它的含量1.77%，山萘酚的含量最低，仅为26.51 mg/kg，为0.0027%。结果表明芦丁是苦荞茎叶提取物中对马铃薯块茎多酚氧化酶起抑制作用的主要成分。
参考文献：
[1]刘 辉，卢 扬，刘 嘉，等.苦荞茎叶提取物对“红
宝石”马铃薯多酚氧化酶抑制效果研究[J].保鲜与加工，2017
[2]刘 辉，卢 扬，李 俊，等.苦荞茎叶提取物对黑
美人马铃薯多酚氧化酶的抑制效果[J].江苏农业科学，2016
[3]刘 辉，周罗娜，贺圣凌，等.四种苦荞茎叶提取物对
甘薯多酚氧化酶的抑制效果研究[J].农村经济与科技，2019
[4] Ali H M， El-Gizawy A M， El-Bassiouny R E，
Saleh M A. The role of various amino acids in enzymatic browning process in potato tubers， and identifying the browning products. Food Chemistry，2016
[5]任 羽.浓香型白酒丟糟栽培食用菌应用研究[D].成
都，西华大学.
基金项目：苦荞茎叶提取物对薯类块茎多酚氧化酶的抑制机理研究，贵州省农业科学院青年基金，黔农科院青年基金［2017］26号；苦荞茎叶提取物对薯类块茎多酚氧化酶的抑制机理研究，贵州省博士
基金，黔科合基础[2017]1191。
作者简介：刘辉（1986—），男，博士，贵州省农业科学院助理研究员，研究方向：农产品加工。
尹旺（1990—），男，硕士，贵州省农业科学院研究实习员，研究方向：农产品加工与检测。
熊江，男，硕士，贵州省农业科学院研究实习员，研究方向：农产品加工与检测。
Ａ
Ｂ
·76·
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议