目 录
2.2.实验一实验一实验一 细胞膜的通透性观察细胞膜的通透性观察 人蟒情深
3.3.实验二实验二实验二 植物细胞骨架的观察植物细胞骨架的观察
4.4.实验三实验三实验三 线粒体的超活染与观察线粒体的超活染与观察
5.5.实验四实验四实验四 叶绿体的分离与观察叶绿体的分离与观察
6.6.实验五实验五实验五 线粒体的分离与观察线粒体的分离与观察
7.7.实验六实验六实验六 酸性磷酸酶的显示方法酸性磷酸酶的显示方法
细胞生物学实验
细胞生物学是当前生命科学中核心学科之一，也是重要的专业基础课，其理论与实验技术已广泛地用于研究细胞的形态结构、基因表达与克隆、病毒、细菌、胚胎发育、远缘杂交、人类疾病的发病机制、药物机理等领域，随着分子生物学的研究渗入，分子细胞生物学也得到了突飞猛进的发展。目前
许多综合大学、农业、医学及药科大学把细胞生物学作为本科生和研究生的必修课或基础理论课，同时也开设了专门的细胞生物学实验课，学生们通过实验，进一步地加深了对理论课的理解，也为今后的专业实验课和毕业论文实验奠定了基础。本讲义精心选择了细胞生物学中的常规实验，作为教材面向全院本科生进行讲授。
实验一实验一 细胞膜的通透性观察细胞膜的通透性观察
一、实验目的
1.1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。了解细胞膜对物质通透性的一般规律。
2.2.了解溶血现象及其发生机制。了解溶血现象及其发生机制。
二、实验原理
细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等 渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。
三、实验用品
(一) ) 材料材料材料 鸡血细胞鸡血细胞
（二）器材器材 普通显微镜、普通显微镜、普通离心机、扭力天平、10ml 10ml 试管、试管、10ml 10ml 刻度离心管、刻度离心管、
试管架，试管架，2ml 2ml 2ml 注射器（无需针头）或注射器（无需针头）或注射器（无需针头）或5ml 5ml 5ml 移液管、洗耳球、滴管、载玻片、移液管、洗耳球、滴管、载玻片、擦镜纸、记号笔等。
（三）试剂
1．Alsever Alsever 溶液溶液
葡萄糖葡萄糖 2.05g 2.05g 柠檬酸钠柠檬
酸钠(Na9C6H5O7.2H (Na9C6H5O7.2H 2O) 0.89g 柠檬酸（柠檬酸（C6H 6O7.H C6H 6O7.H 2O ） 0.05g 氯化钠氯化钠 0.42g 0.42g 蒸馏水蒸馏水 100ml 100ml 调PH PH 至至7.27.2，过滤灭菌或高压灭菌，过滤灭菌或高压灭菌，过滤灭菌或高压灭菌10min 10min 10min，置4℃冰箱保存。，置4℃冰箱保存。
2. 0.128 mol/L NaCl 2. 0.128 mol/L NaCl 溶液。溶液。
3． 0.05 mol/L NaCl 0.05 mol/L NaCl 溶液。溶液。
4． 0.4 mol/L NaCl 0.4 mol/L NaCl 溶液。溶液。
3. 0.128 mol/L NH 4Cl Cl 溶液。溶液。
4. 0.128 mol/L NH 4AC 溶液。
5. 0.128 mol/L NaNO 3溶液。
透明国际7. 0.32 mol/L mol/L 葡萄糖。葡萄糖。
8. 0.32 mol/L mol/L 甘油。甘油。
9. 0.32 mol/L mol/L 乙醇。乙醇。
10. 0.32 mol/L mol/L 丙酮。丙酮。
11. 11. 蒸馏水。蒸馏水。
四、实验操作
1．从集市买一只活鸡现杀取血．从集市买一只活鸡现杀取血5ml 5ml 5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s 液瓶（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s 液瓶
中，混匀后置冰箱保存备用（中，混匀后置冰箱保存备用（2 2 2 周内使用）。周内使用）。
2. 2. 使用前，取用使用前，取用Alsever’s 液保存的新鲜鸡血Alsever’s 液保存的新鲜鸡血5ml 5ml 5ml ，加入，加入，加入8ml 8ml 8ml 的的0.128 mol/L mol/L 的的
NaCl NaCl 溶液，小心混匀，溶液，小心混匀，溶液，小心混匀，1000 r/min 1000 r/min 1000 r/min 离心离心离心5min 5min 5min，如此，如此，如此3 3 3 次洗涤，最后配成次洗涤，最后配成次洗涤，最后配成30%30%的鸡红细胞（的鸡红细胞（CRBC CRBC CRBC）悬液。）悬液。
3. 3. 取取11 11 支试管，支试管，支试管，按附表中所示测试溶液，按附表中所示测试溶液，按附表中所示测试溶液，分别取样各分别取样各分别取样各3ml 3ml 3ml，，作出标记后，作出标记后，各管均加各管均加
入红细胞悬液入红细胞悬液2 2 2 滴，混匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的时间及滴，混匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的时间及其变化。
五、观察结果
去离子水ph1. 1. 试管内液体分两层：上层浅黄透明，下层红不透明为不溶血（－），镜检红试管内液体分两层：上层浅黄透明，下层红不透明为不溶血（－），镜检红
细胞完好呈双凹盘状。
2. 2. 如果试管内液体混浊，上层带红者，称不完全溶血（＋或＋＋），镜检有部分如果试管内液体混浊，上层带红者，称不完全溶血（＋或＋＋），镜检有部分
红细胞呈碎片。
3. 3. 如果试管内液体变红而透明者，如果试管内液体变红而透明者，如果试管内液体变红而透明者，
称完全溶血称完全溶血称完全溶血（＋＋＋），（＋＋＋），（＋＋＋），镜检发现细胞全部呈碎镜检发现细胞全部呈碎
片。
六、实验建议
1. 1. 鸡血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。鸡血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。
2. 2. 目测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，目测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，加入生理盐水配成加入生理盐水配成30%30%30%的红细胞悬液；的红细胞悬液；
3. 3. 试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。
七、实验报告及作业
表4-1 4-1 各种溶液的溶血现象观察结果各种溶液的溶血现象观察结果
编号编号 测试溶液测试溶液测试溶液 是否溶血是否溶血是否溶血 时间时间时间 分析原因分析原因
1 0.128 mol/L NaCl
2 0.05 mol/L NaCl
3 0.
4 mol/L NaCl
4 0.128 mol/L NaNO 3
5 0.128 mol/L NH 4Cl
6 0.128 mol/L NH 4AC
7 0.32 mol/L 7 0.32 mol/L 甘油甘油
8 0.32 mol/L 8 0.32 mol/L 乙醇乙醇
9 0.32 mol/L 9 0.32 mol/L 丙酮丙酮
10 0.32 mol/L 10 0.32 mol/L 葡萄糖葡萄糖
11 H 2O
书写实验报告，并就细胞膜对不同物质的渗透性不同，对实验结果进行分析见表对实验结果进行分析见表4-14-14-1。。
目测法判断标准：快速溶血：＋＋＋；慢速溶血：＋＋或＋；不溶血：－
实验二实验二 植物细胞骨架的观察植物细胞骨架的观察
一、实验目的
1. 1. 掌握考马斯亮蓝掌握考马斯亮蓝R250 R250 对植物细胞骨架染的方法。对植物细胞骨架染的方法。
2. 2. 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。
二、实验原理
细胞骨架细胞骨架(cytoskeleton)(cytoskeleton)(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的
网络结构，根，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100 TritonX-100 的缓冲液处理植物材料的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 R250 染，在光学显微镜下可见一种网状结构。染，在光学显微镜下可见一种网状结构。
三、实验用品
(一)材料材料 洋葱洋葱
（二）器材（二）器材 显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、PH PH PH 计计
（三）试剂
西方普世价值观1. 0.01mol/L 1. 0.01mol/L 磷酸盐缓冲生理盐水磷酸盐缓冲生理盐水磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)(PBS)
0.2mol/L Na 2HPO 4- NaH 2PO 4缓冲液（缓冲液（PB PB PB，，P H7.3H7.3）） 50ml
长春密刺
0.15mol/L NaCl
双蒸馏水加至双蒸馏水加至1000ml 1000ml
2. PB
0.2mol/L Na 2HPO 4 77ml 0.2mol/L NaH 2PO 4 23ml
3. M-3. M-缓冲液缓冲液 咪唑咪唑((P H 6.7) 50mmol/L
KCl 50mmol/L MgC12 0.5mmol/L EGTA 1mmol/L EDTA 0.1mmol/L 巯基乙醇巯基乙醇 1mmol/L 1mmol/L 甘油甘油 4mmol/L 4mmol/L 用1mol/L HCl 1mol/L HCl 调调pH pH 至至7.27.2。。
怀铁二中4. 1%4. 1%的的Triton X-100/M-Triton X-100/M-缓冲液缓冲液
5. 0.2%5. 0.2%考马斯亮蓝考马斯亮蓝R250 R250 染液染液
甲醇甲醇 46.5ml 46.5ml 冰醋酸冰醋酸 7ml 7ml 蒸馏水蒸馏水 46.5ml 46.5ml
6. 3%6. 3%戊二醛戊二醛戊二醛- PB - PB - PB 溶液（溶液（溶液（PH
7.3PH7.3PH7.3））
四、实验操作见图见图4-44-44-4
取洋葱内皮取洋葱内皮1cm 1cm 1cm 左右左右左右
置于含PBS PBS 液的载玻片上液的载玻片上液的载玻片上
湿润后，吸去PBS PBS
加2 2 滴滴1%Triton X-100/M-1%Triton X-100/M-缓冲液，缓冲液，缓冲液，5min 5min 5min
吸去缓冲液，加吸去缓冲液，加3%3%3%戊二醛戊二醛戊二醛-PB -PB -PB 溶液，固定溶液，固定溶液，固定30min 30min 30min
加PBS PBS 洗洗2 2 次，共次，共次，共3min 3min 3min
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
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