258?中国抗生索杂志2001年8月第26卷第4期
文章累号:1ool一8689(2OO1)04—0258—03
主动载药与被动载药制备盐酸左氧氟沙星脂质体
邓意辉李炔秋王绍宁张鸡
(沈舟药科太学药学系，沈阳110015)
王鹤东
(辽宁省医药工业研究院，沈阳110015)
摘要：建立了阳离子交换树脂一荧光分光光度法测定盐酸左氧氟沙星脂质体包封率的方法.该法具有 简单，方便，省时，经济等优点.用所建立的方法考察了主动载药与被动载药制备的脂质体包封率，结果表明,
主动载药中采用硫酸铵度法包封率最高，可达71.5.
关键词：盐酸左氧氟抄星；脂质体?主动载药；被动载药
中国分类号:R943文献标识码:A
包封率是脂质体制剂的一项重要指标，一个化学
物质是否具有开发成为脂质体产品的价值，首先考虑
的是其包封率.影响包封率的因素很多，如物质的理化
性质，脂质的种类及配比，药脂比，制备方法等.
至今已见报道的脂质体制备方法有十余种，如薄
膜分散法，乙醇注入法，逆相蒸发法等.在制备方法中,
根据脂质体载药的方式不同，可将其分为主动载药和
被动载药两大娄.一般而言，通过跨膜离子或化合物梯
度作为载药动力的方法.称为主动载药(active
loading)；其它未采用跨膜梯度载药的方法，称为被动
载药(passiveloading).本文以盐酸左氧氟沙星为模型
药物，比较不同制备方法对其包封率的影响.
1仪昌和试药
荧光分光光度计(HITACHI650—60)；阳离子交
换树脂(上海树脂厂)}盐酸左氧氟沙星(珠海联邦药业
有限公司)；大豆磷脂(注射用，德国,Epikuron170);
其它试剂为分析纯.
2方法与结果
2.1舟楫奇交
盐酸左氧氟沙星的含量测定采用荧光分光光度法
(另文发表)，其最大激发波长为34.7nm，最大发射雷恪生小品
波长为505om.
2.2电封幸剥定方法建立
2.2.1旧离子交换树脂柱的制备将国产阳离子交
换树脂按常规方法处理活化后，悬于去离子水中.装入
5ml注射器内，高度5ml.
2.2.2柱对药物的吸附取0.2ml盐酸左氧氟沙星
收稿日期:20000§一l
作着简介：邛意辉.男.生于1964年一博士，副教授.研究方向：靶向制剂. 溶液(2mg/m1)置于柱顶端，用10ml去离子水洗小柱,
收集滴出液于100ml容量瓶中，磷酸盐缓冲液(PBS,
pH4.0.内含0.1mg/mITritonX一100)稀释至刻度，混
匀，按”2.1”测定荧光强度F值.同法重复lO次，结果
见表1.
表1阳离子树脂拄对盐酸左氧氟抄星的吸附
由表1数据可知，该小柱可完全吸附药物，并可重
复使用1O次.
2.2.3脂质体柱回收率取空白脂质体0.2ml，按
“2.2.2”操作，于4.50nm处测定过柱前，后样品的吸收
度，计算回收率，结果脂质体柱回收率可达99.6(“
一5)
2.2.4柱对物理混台样品中药物的吸附取空白脂
质体，分别加入不同量的盐酸左氧氟沙星，使成l,2,
3,4,5mg/ml，按”2.2.2”操作，测F.结果见表2.
由表2数据可知，阳离子树脂柱能全部除去物理
混合样品中的药物.
表2拄对物理混合样品中药物的吸辟f
主动载药与被动载药制备盐酸左氧氟抄星脂质体邓意辉等?259? 22.5药物在脂质体申的回收率取空白脂质体，加
入不同量的药物，用PBS稀释，测F.计算回收率，结
果见表S.
由上述实验建立包封率测定方法取样品0.2ml
置于阳离子交换小柱顶部，去离子水lOml洗脱，收集
滴出液于1OOml容量瓶中,PBS加至刻度，混匀，于k
为347nm，为505nm测荧光强度F，按E=×
100计算包封率(E：包封率;F：过柱后样品的荧
光强度;F：未过柱样品的荧光强度).
表3药物在脂质体中的回收率
2.3被动载药和主动载药制备脂质体
所有方法中，采用的磷脂与胆固醇配比为4:1
(w/w)，磷脂终浓度为2，药物终浓度为2mg/ml.
2.3.1被动载药
(1)乙醇注入法将脂质溶于乙醇中，通过注射针
头，注入到正在搅拌的药液中，减压除乙醇.调节体积,
即得.
(2)逆相蒸发法将脂质用乙醚溶解，按有机溶媒
：水为3:1的比例加入药液，混合，超声波处理，得
W/O型乳剂，减压除去有机溶媒.室温搅拌5min，调
节体积，即得.
(3)复乳法按文献一进行.第1步，将脂质溶于
氯仿中，加入盐酸左氧氟沙星溶液(溶解于150mmol/ I蔗糖中)，振摇形成w/o型乳剂为.子液”；另取与
“子液”中等量的脂质溶于乙醚，加到200mmol/L的蔗糖溶液中，振摇形成o/w型乳剂，称为”母液”.第2 步，将.子液”加入”母液”中，立即振摇.形成内含水滴
的氯仿”微球”.即w/o/w型复乳，通氮气，不断轻
摇.在37C水浴中，蒸发除去溶剂.即得.
二氧化氯
(4)薄膜分散法将脂质溶于适量氯仿中，减压除
去氯仿成膜.加入药液，水浴50℃水化20min.室温搅拌5min.调节体积，即得.
将四种方法所得样品进行柱分离，测定包封率，结
果见表4.
2.3.2主动载药
(1)pH梯度法将脂质用适量氯仿溶解，于旋转
衰4被动载药制备脂质体的包封率一3)
薄膜蒸发器上除氯仿，制备磷脂膜.加入柠檬酸缓冲液(pH2.5)水化磷脂膜，振摇，搅拌.超声波处理，制备脂柳倩月
质体.将所得脂质体依次通过0.8,0.65,0.45,0.3,
0.22m微孔滤膜，进行整粒.于整粒后的脂质体中加
入药液，并用lmol/INa2HPOI将pH调至6.5.于变线人生
55℃水浴保温lOmin.冷却至室温.即得
(2)硫酸铵梯度法将脂质用少量乙醇溶解(1g
脂质用5～10ml乙醇)，加入3硫酸铵水溶液，搅拌lOmin水化后，于探头式超声波仪上进行超声，得脂质体.将脂质体装于透析袋中，于100倍体积的9蔗糖液中进行透析，每隔一定时间更换透析液.共3次，总时间24h.收集透析后的脂质体，过0.22m滤膜进行
整粒.取此空白脂质体，加入药液，于55℃水浴孵化
10min，冷却后测定包封率，结果见表5
裹5主动载药制备脂质体的包封率”=3)
3讨论甲基橙
3.1盐酸左氧氟沙星脂质体包封率测定方法未见报道，而常见的凝胶过滤法，超速离心法，透析法和高教毛细管电泳(HPCE)法等存在价贵，耗时，需特殊仪
器等缺点.由于盐酸左氧氟沙星(1evofloxacinhydro—chloride,LVIx)分子结构中有”一N一”，在本实验所
用的溶液中荷正电.可与阳离子树脂中的Na发生交换，吸附于树脂上；当其包人脂质体后.一N一”被双
分子层掩盖，不被阳离子树脂吸附，从而与游离药物分
离，其示意图如图1.
田lLVLX包人脂质体后不被阳离子树脂吸附
示意图
囊墨
一～～～
△△
260中国抗生索杂志2001年8月第26卷第4期
采用阳离子交换树脂一荧光分光光度法测定包封
率，具有样品用量少，耗时短，操作简单，无需样品提取
等优点，更适合工业化生产过程中质量控制及游离药
物的除去.
3.2被动载药制备脂质体的包封率受脂质体内水相
的体积，脂质体数目，膜材组成，药物与脂膜作用力等
因素的影响，在膜材组成和膜材浓度一定时，同一药物
的包封率主要受内水相体积和药物与膜材的作用有
关.本文的四种方法中，以乙醇注入法制备的脂质体包
封率最低，逆相蒸发法和复乳法依次增高，其原因是复
乳法制备的脂质体内水相体积最大0].在薄膜分散法
中，由于有机溶媒已挥尽，磷脂以薄膜状态存在，药液
能充分与磷脂接触，通过离子键，氢键和疏水键等作
用，使双分子层表面吸附的药物分子较多，从而提高包
封率.
3.3被动载药的四种方法中，无论何种方法制备的脂
质体，其包封率均未达到10，而利用主动载药制备
的脂质体.其包封率可达6O以上，其中硫酸铵梯度乌托邦主义
法最高，可达71..文献报道’]，硫酸铵梯度法的原
理是，由于NH售NHs+H,NHa跨膜外溢速度远远
大于H的外溢速度，从而造成内水相H浓度增加,
pH值下降，亦即产生跨膜的pH梯度，成为药物主动
装载的驱动力.本实验中硫酸铵梯度法的包封率明显
高于常规的pH梯度法，由此设想，硫酸铵梯度法中除
了由于NH的外滥造成pH梯度外,NH,sOi一等亦
对包封率有影响，具体何种影响有待进一步深入研究.
参考文献
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Preparationoflip~somesentrappedlevofloxacinhydr0chloride bypassiveloadingandactiveloading
DengY ikui,IiHuan—qiu,WangShao—ningandZhangHong
(Department0fPharmacy,ShenyangPhazmaceuticalUniversiry.Shenyang110015)
WangI-’e-tong
(TheIn~LtuteofPharmaceuticalIndustryofLiaoni~ProvincetShenyang110015) ABSTRACTAmethodforthedeterminationofentrappedefficiency(EE)oflevofloxacinhydrochlorid e
loadedliposomes(LVLX)Lycationexchangeresin—flyorospectrophotometrywasestablishedandth eEEof
IVIXderivedfromvariouspreparativetechnologies(passiveloadingandactiveloading)werecompare d,The resultshowedthattheammoniumsulfategradientmethodwasthehighest. KEYWORDSLevofloxacinhydrochloride;Liposomes;Activeloading;Passiveloading
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