网织红细胞计数是评价骨髓造血功能和红细胞生成活力的重要指标，在临床上被广泛应用于贫血的诊断、鉴别诊断和疗效观察以及骨髓移植或化疗后造血能力恢复情况的监测。目前，网织红细胞计数的常规检测方法主要有传统的显微镜计数法、全自动血细胞分析仪法和流式细胞分析法等。但由于不同类型仪器所用的试剂和检测原理不同，导致不同仪器组间检测结果的差异较大。国外的室间质评结果显示，不同仪器组检测结果的变异系数可达16.1%～39.1%。虽然国际血液学标准化委员会（international council for standardization in hematology，ICSH）于1998年制定了网织红细胞计数的参考方法，但国内的标准化工作进展较为缓慢。
为了解决上述问题，为网织红细胞计数的校准和正确度验证提供依据，卫生部临床检验中心依据国际血液学标准化委员会推荐的网织红细胞计数参考方法文件，在多次召开专家讨论会和反复征求临床实验室技术骨干意见的基础上制定了《网织红细胞计数参考方法》标准。本标准已于2011年9月30日正式颁布，将于2012年4月1日起正式实施。
《网织红细胞计数参考方法》规定了网织红细胞计数参考方法的技术要求，适用于建立并运行网织红细胞计数参考方法的实验室。
标准规定的网织红细胞计数参考方法是一种新亚甲蓝活体染显微镜计数法。方法对所用的试剂和器具、血液标本的要求、染步骤、血涂片的制备和细胞计数方法都做了明确的规定。实验室在建立该参考方法时应严格按照本标准的要求进行。
对于仍然使用手工显微镜法的实验室，本标
制定背景
适用范围周文宾 谷小林
卫生部临床检验中心
2012年2月25日出版
准的相关要求亦可作为参考以提高检测结果的准确性。
网织红细胞是未完全成熟的红细胞，其胞质中含有嗜碱性的R N A物质，经碱性染料活体染后，形成蓝点粒状或丝网状结构。参考方法中，采用显微镜（明场或相差）对新亚甲蓝活体染后制备的血涂片进行网织红细胞计数，确定网织红细胞与红细胞的比值后，使用参考方法（ICSH，1994）计数红细胞，网织红细胞比值乘以红细胞计数结果，即为网织红细胞的绝对数。网织红细胞绝对数的表达方式为每升全血中含有网织红细胞的数量。
为了保证参考方法检测结果的准确性，建立参考方法的实验室必须与其他参考实验室进行结果比对。
1.血液标本的采集应使用真空采血管或注射器采血后注入含抗凝剂的洁净试管中，要注意防止溶血。
2.使用E D T A•K2抗凝剂，加入血液后抗凝剂的终浓度为
3.7μmol/m L~5.4μmol/m L （1.5mg/mL~2.2mg/mL）。
3.标本采集后要求在4h内进行染。
4.检测前应先轻柔地颠倒试管以混匀标本，颠倒次数至少为8次（试管的最佳颠倒次数取决于试管的种类和容积大小）。血液加入抗凝管后，管内剩余空间应至少占试管体积的20%。
5.不能使用旋涡混匀器和滚轴混匀器。
1.推荐使用的染料为新亚甲蓝。
2.染液的配制方法：将1.0 g新亚甲蓝（染料应干燥）溶解于100mL pH为7.4的等渗磷酸盐缓冲液（150 mmol/L的NaH2PO4 18mL，150mmol/L的Na2HPO4 82mL）中。
3.待染料溶解后，必须充分混匀并过滤，然后将其装入干净的棕瓶中，避光保存于2℃~8℃条件下，染液可稳定1个月。
4.使用前取适量的染液用过滤器或滤纸（要求孔径为11μm）再次进行过滤，以去除沉淀的染料和其他颗粒物质。
1.巴斯德移液管。
2. 75mm×10mm的玻璃试管。
3. 载玻片（经酸处理）。
1.将100μL过滤后的染液加至75mm×10mm 的试管中，再将约100μL的全血加至该试管中，加盖并充分混匀后，在室温条件下染3min~5min。
2.将细胞悬液重新混匀，在载玻片上推成薄血膜。血膜长度至少有2.5cm，血膜末端离玻片的末端至少有1cm的距离，且整个血膜周边应留有光滑连续的空白区。可用热吹风等方式使血膜快速干燥，（避免温度过高或时间过长）。
3.在低倍镜下（总的放大倍数为100倍）先浏览血膜的细胞分布情况，以确认细胞均匀地分布于适当的计数区域内，然后在油镜下计数血膜上的红细胞，如出现任何干扰因素（如疟原虫、Heinz小体），则不适用于参考方法。
1.要获得准确的计数结果，就必须把每个视
原理及总则
血液标本的要求实验器具操作过程
计数智投分析
染料和染液配制
野中的成熟红细胞和网织红细胞准确地区分开来。要求由两位经验丰富的检验技术人员通过视频监测器或者两人共用一台双头双筒的显微镜同时计数。
2.每份检测标本都应选用3张血涂片进行计数。
3. 计数过程中视野的移动顺序如图1所示。
4.计数红细胞的数量应以能够获得满意的精密度为标准（见表1）。
5.成熟红细胞和网织红细胞要分别记录，网织红细胞的比值（rp ）可用公式（1）计算：
化学战争6.网织红细胞绝对数为每升全血中所含的网织红细胞数。该值等于用参考方法计数出的红细胞总数乘以网织红细胞比值。
7.网织红细胞绝对数检测结果变异系数的计算方法见公式（2）：
式中：
CV RBC —计数所得的红细胞数的变异系数；CV rp —网织红细胞比值的变异系数。
1.检测结果精密度的理论计算公式见公式(3):
式中:
SE —标准差；
P —网织红细胞占成熟红细胞和计数所得网织红细胞的比值；
n —成熟红细胞数加上网织红细胞数。2.已知CV =（SE /P ）×100，可得到SE 的值为[SE =P ×CV /100]，因此在公式（3）中可替换
非同凡响的爱SE ，最后得到“n ”的值，该值代表要获得满意的
网织红细胞计数精密度需要计数的红细胞总数，见公式（4）如下：
所得结果就是理论上需要计数的红细胞总数。
3．当CV 值分别为2%、5%和10%时，对于不同的网织红细胞比值，要求计数的红细胞数如表1
科学信息
所示。
计数区域
图1：网织红细胞计数视野移动顺序示意图
（1）n = ×
产业结构调整指导目录(2011年本)1-P
1002P CV 2
（4）
（3）
SE =
P （1-P ）
n
精密度要求
（2）
CV RBC 2+CV rp
2
2012年2月25日出版
表1 当CV分别为2%、5%和10%时要求计数的红细胞数
透水率网织红细胞比值
要求计数的红细胞数
2%5%10%
0.01247 50039 6009 900
0.02122 50019 600 4 900
0.0547 5007 600 1 900
0.1022 500 3 600900
0.2010 000 1 600400
0.50 2 500400100
为了获得准确可靠的计数结果，需要进行控制的技术要点有3个方面。一是正确辨认网织红细胞。外周血中的网织红细胞主要为Ⅳ型，即网织红细胞中的嗜碱性物质较少、呈分散的细颗粒或短丝状。故所有含有2个以上网织颗粒或有1个颗粒连于丝状物的红细胞均应计为网织红细胞。二是计数足够数量的细胞。本标准规定了不同网织红细胞百分比时保证结果的精密度（CV%）达到相应要求所应计数的红细胞数量。三是为了防止因检验人员技术能力差异造成的偏差，要求由两位技术经验丰富的检验人员通过视频监视器或两人共用一台双头双筒的显微镜同时计数；而且规定每份检测标本都应选用3张血涂片进行计数。
此外，定期进行人员培训和比对、与其他参考实验室进行结果比对也是保证检测结果准确性的重要手段。
本行业标准所规定的网织红细胞计数参考方法仍为手工计数法，不仅耗时费力而且结果的精密度和准确性容易受人为因素的影响，所以国际血液学标准化委员会等国际标准化组织亦在研究通过流式细胞术原理建立新的网织红细胞计数参考方法，我们也在密切关注研究进展，并已经着手开展相关研究。因此，本行业标准所规定的参考方法实为一种过渡性质的参考方法。
作者简介：
周文宾，卫生部临床检验中心研究实习员，主要从事血液学检验质量控制相关研究工作。
谷小林，卫生部临床检验中心副主任技师，长期从事血液体液学检验的质量控制和标准化研究工作，负责多个血液体液学检验项目的室间质量评价活动。
保证计数结果准确可靠的技术要点本标准的定位
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议