【摘要】：糖苷类化合物作为一类具有较高生理活性和药理活性的糖类药物地塞米松抑制试验,历来都是药物化学的一个研究热点领域。红景天苷系糖苷类药物中的一类典型化合物,具有抗疲劳、抗衰老等优良的药理活性。目前,被用于药物使用的红景天苷主要是从植物中提取获得,但植物中红景天苷有效成分含量偏低,远不能满足市场需求,这就亟需探索出高效制备红景天苷的途径以满足市场需求。迄今为止,人工制备获取红景天苷的方法有化学合成法、愈伤组织培养合成、生物催化合成等,其中,生物催化合成以其具有独特的高立体、区域选择性,操作简单,反应条件温和等特点而受到广大研究者的亲睐。近年来,介质工程研究成为生物催化合成的热门领域,尤其围绕以离子液体作为新型、绿的反应介质的酶促反应,进行了广泛的探索研究。研究表明,表面活性剂在酶促反应中具有维持酶活性等方面的功效,但表面活性剂对酶催化反应的影响研究主要涉及脂酶,纤维素酶腔道介入
,磷脂酶等酶促反应,而在糖苷类化合物的催化合成反应中的应用却鲜见报道。基于上述缘由,本论文在纯水相、水-有机两相体系反应介质中分别引入了不同类表面活性剂,考察了它们对β-葡萄糖苷酶活性的影响变化,以及各自反应体系中对酶催化反应底物转化率的影响。此外,鉴于非离子表面活性剂吐温-20(Tween20)表现出优良的维持酶活稳定性功效,课题制备了吐温-20-酶复合物,在水-有机单相体系中考察了该复合物酶活性的变 化。实验发现,在纯水相中,表面活性剂表现出一定的抑制酶失活的作用,其中以吐温-20的维活效果最为明显,当Tween20的添加浓度为10g/L时,在50℃下反应6天后仍检测到高达79.7%大众投资指南的余酶活量值。非离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和十二烷基磺酸钠(SDS)表现出的抑制酶失活的作用略低于最牛班规Tween20。受体系中多种因素的影响,在分别添加有CTAB和Tween20的反应组中,底物转化率均提高了1.5倍。在水-有机两相体系中,SDS对酶的失活体现出最为有效的抑制作用,其余表面活性剂均对酶失活起了不同程度的加速作用。在几类表面活性剂各自最适添加浓度下,CTAB,SDS,Tween20三组均将底物转化率从9.2%提高到11%左右。不添加表面活性剂所测得的初始反应速率最高,Tween20组次之,离子型表面活性剂添加组最低。对于SDS添加组,当反应介质体系中含水量为10%时,底物转化率可以达到22.3%。通过分离纯化,从枯草芽孢杆菌中得到一类脂肽表面活性剂。在水相体系中研究了它对β-葡萄糖苷酶酶活的影响。另以缓冲液-正己烷为反应体系,考察了脂肽对酶催化合成红景天苷的影响。在一定时间内,该脂肽对酶的活性有一定的维持作用,但随着时间的延长反而会加速酶的失活。在2.5g/L的添加浓度下,测得的底物转化率可达13.7%。Tween20-酶交联复合物在水-乙腈单相体系中的酶活保持优于纯酶,且混合体系中含水量越低,这种效果就越明显。【关键词】：生物催化β-葡萄糖苷酶逆水解反应表面活性剂
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：TQ464.3
【目录】：中文摘要10-12ABSTRACT12-14第一章绪论14-251.1糖苷类化合物的合成现状14-211.1.1糖苷类化合物的简介14-151.1.2酶催化合成糖苷15-171.1.3酶催化反应介质研究17-201.1.4固定化酶复合物的研究20-211.2表面活性剂在酶催化反应中的应用21-231.2.1化学合成类表面活性剂21-221.2.2生物表面活性剂22-231.3本课题的研究目的及内容23-25第二章表面活性剂在水相体系中对β-葡萄糖苷酶催化合成红景天苷的影响25-342.1材料与方法25-262.1.1实验材料252.1.2主要仪器25-262.1.3实验方法262.2结果26-312.2.1β-葡萄糖苷酶的活性26-272.2.2表面活性剂及酪醇对酶活的影响27-292.2.3红景天苷标准曲线的测定292.2.4单个表面活性剂对底物转化率的影响29-312.2.5混合表面活性剂对底物转化率的影响312.3分析与讨论31-332.4本章小结33-34第三章表面活性剂在水-有机两相体系中对β-葡
萄糖苷酶催化合成红景天苷的影响34-413.1材料与方法帕蒂尼34-353.1.1实验材料及仪器343.1.2实验方法34-353.2结果与讨论35-393.2.1表面活性剂对酶活的影响35-373.2.2表面活性剂对酶催化合成反应的影响37-383.2.3两相体系中水浓度对底物转化率的影响38-393.3本章小结39-41第四章一种脂肽类生物表面活性剂对β-葡萄糖苷酶催化合成红景天苷的影响41-454.1材料与方法41-424.1.1实验材料414.1.2主要仪器414.1.3实验方法41-424.2结果与讨论42-444.2.1脂肽表面活性剂对酶活的影响42-434.2.2脂肽表面活性剂对酶催化合成反应的影响434.2.3讨论43-444.3本章小结44-45第五章Tween20-酶复合物在水胆熊/有机单相体系中酶活的变化45-485.1材料与方法45-465.1.1主要试剂455.1.2主要仪器455.1.3实验方法45-465.2结果与讨论46-475.2.1不同复合比例下的酶活465.2.2水-乙腈单相体系中的酶活46-475.3本章小结47-48第六章结论与展望48-506.1主要结论48-496.2展望49-50参考文献50-55攻读学位期间取得的研究成果55-56致谢56-57个人简况及57-59 本论文购买请联系页眉网站。
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