病毒的检测方法

1. 血凝抑制试验
血凝抑制试验是于有血细胞凝集活性的病毒悬液中,加入特异性的病毒抗菌素血清,再加入适宜种类运动的红血球细胞,并在适宜温度和pH条件下孵育。由于特异性的病毒抗体与病毒的有血细胞凝集活性的表面蛋白质(如流感病毒的血凝素),可抑制血细胞凝集反应发生,这是血凝抑制(Hemagglutination Inhibition)现象。利用这一现象所设计的血凝抑制试验是鉴定血细胞凝集性病毒的常用方法。这种方法灵敏,除披膜病毒(Togavirus)以外,对于其它的病毒都有很高的特异性,而且方法简单、迅速、实验成本低。在试验时,抗血清必须经56℃、30分钟预处理,以除去非特异性抑制物。
杨虎城的最后岁月2. 中和试验
中和试验是病毒免疫学中一个非常重要的试验。在病毒的中和作用(neutralization)性质上建立,即某些特异性的病毒抗体与病毒作用后,能够使其失去感染性,抑制病毒的繁殖。这类病毒抗体叫作中和抗体(neutralizing Abs)。病毒的中和作用不但表现在质的方面,即一种病毒的感染性只能被特异性的抗体中和,而且还表现在量的方面,即中和一定量病毒的感染性必须有一定效价的病毒抗血清。中和试验仍是以测定病毒感染性的方法进行,因此又有不同的方法。
3.补体结合试验(Complement fixation assay)
补体结合试验可用于检测血清中病毒抗体的存在。补体的作用为能与抗原—抗体复合物结合,但不能与抗原单独结合,也不
易与抗体单独结合;补体的作用没有特异性,能与任何一组抗原抗体复合物结合,它也能与红细胞和溶血素的复合物结合,引起红细胞破坏(溶血)。病毒抗原与相应抗体结合后,其抗原抗体复合物可以结合补体,如再加入红细胞和溶血素,则不会产生溶血现象;若血清中无病毒抗体,补体与红细胞结合则会引起溶血。此反应即为补体结合反应。补体结合实验操作繁杂,且需十分细致,反应的各个因子的量必须有恰当的比例。
2012cctv民族器乐电视大赛4. 酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)
酶联免疫吸附测定是一种采用固相(主要为聚苯乙烯酶联板)吸附,将免疫反应和酶的高效催化反应有机结合的方法,其基本原理是以酶催化的颜反应指示抗原抗体的结合。ELISA 方法简单,灵敏度高,特异性强,适于大量样品的检测,目前该方法已被广泛用于植物病毒检测。在此基础上加以改进又发展了一些新的检测方法,如  A 蛋白酶联吸附(SPA-ELISA)、斑点免疫吸附(DIBA)、直接组织斑免疫测定(IDDTB)、伏安酶联免疫分析、快速ELISA 等。
5.免疫沉淀(Immunoprecipation)和免疫印迹(Immunoblotting)
免疫沉淀反应主要用于抗原或者抗体的定性检测。其原理是指可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的情况下,按适当比例所形成的可见沉淀物现象。据此现象设计的沉淀实验主要包括絮
状沉淀试验,环状沉淀试验和凝胶内的沉淀试验。凝胶内的沉淀试验依所用的实验方法又可分为免疫扩散实验和免疫电泳技术2类。
免疫印迹(Immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting),是一种借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的
免疫生化技术。将含有目标蛋白(抗原)的样品首先用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)或非变性电泳(Native-PAGE)等分离后,通过转移电泳原位转印至硝酸纤维素膜或其它膜的表面,然后将膜表面的蛋白质再用抗原抗体反应进行特异性检测。例如,将经SDS-PAGE分离的蛋白质带转移到膜上后,膜用封闭液处理,然后与第一抗体反应,膜经漂洗后再与偶有辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)的第二抗体反应,加人生底物反应之后,即可显示出目标蛋白的位置。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,其优点是方法简便、标本可长期保存、结果便于比较。
6. 免疫胶体金技术(Immunogold-label assay)银川市商业银行
八音盒珍品陈列馆
免疫胶体金技术最早起源于电镜方面的研究,由于金在生物学上是惰性的,且有良好的电荷分布,可以和蛋白质(如抗体、A 蛋白等)紧密结合,因此广泛应用于生物学和微生物学的各个领域。其原理是用柠蒙酸钠将氯金酸金离子还原为胶体金。胶体金颗粒在适当的条件下,以静电、非共价键方式吸附抗体IgG
>检测技术及应用>第十二届国家机构领导人

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