HA、HI 试验方法

红细胞凝集试验及红细胞凝集抑制试验

1．红细胞凝集试验采用50孔板或试管法按表1，若采用96孔微量板法按表2进行，用生理盐水将待检抗原按术式稀释成不同倍数，加入1%鸡红细胞悬液。将50孔板或试管前后左右摇匀；将96孔微量板在振荡器上摇匀，置于20～30℃，20～40分钟后（微量板法时间短, 15～30分钟）判定结果，使50%红细胞凝集的最高稀释度，作为判定终点。

表1 50孔板或试管法测定凝集价单位：ml

	孔或管号								对照
	1	2	3	4	5	6	7	8……	对照
血凝素稀释倍数	10	20	40	80	160	320	640	1280……	0.5
生理盐水	0.9	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5……
	}	}	}	}	}	}	}	} 弃0.5
待检抗原	0.1	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
1%鸡红细胞悬液	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5

表2 96孔微量板法测定凝集价单位：μl

	孔号								对照
	1	2	3	4	5	6	7	8……	对照
稀释倍数	2	4	8	16	32	64	128	256……	25
生理盐水	25	25	25	25	25	25	25	25……
	}	}	}	}	}	}	}	} 弃25
待检抗原	25	25	25	25	25	25机甲战士3	25	25
1%鸡红细胞悬液	25	25	25	25	25	25	25	25	25

2．红细胞凝集抑制试验

2.1血凝素凝集价测定 50孔板或试管法按表3，若采用96孔微量板法按表4进行。

表3 50孔板或试管法测定凝集价单位：ml

	孔或管号								对照
	1	2	3	4	5	6	7	8……	对照
血凝素稀释倍数	5	10	20	40	80	160	320	640……	0.25
生理盐水	0.4	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25……
	}	}	}	}	}	}	}	} 弃0.25
血凝素	0.1	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25
1%鸡红细胞悬液	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25街头三维立体画	0.25	0.25	0.25	0.25
生理盐水	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25

表4 96孔微量板法测定凝集价单位：μl

	孔号								对照
	1	2	3	4	5	6	7	8……	对照
稀释倍数	2	4	8	16	32	64	128	256……	25
生理盐水	25	25	25	25	25	25	25	25……
	}	}	}	}	}	}	}	} 弃25
血凝素	25	25	25	25	25	25	25	25
1%鸡红细胞悬液	25	25	25	25	25	25	25	25	25
生理盐水社会科学辑刊	25	25	25	25	25	25	25	25	25

2.2 4单位抗原工作液配制及检验

2.2.1 4单位抗原工作液配制选用上述2.1项抗原进行。如果抗原50%凝集价测定结果为1∶1024（举例），4个50%血凝单位抗原（即4HA50）Sao40=1024/4=256（即1∶256）。取生

理盐水9ml，加抗原液1ml，即成1∶10稀释度，将1∶10稀释液1ml加入到生理盐水24.6ml中，使最终浓度为1∶256。

2.2.2 检验检查4HA50抗原的血凝价是否准确，应将配制的1∶256倍稀释液分别以1ml的量加入生理盐水1、2、3、4、5和6ml中，使最终稀释度为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6和1∶7。然后，从每个稀释度取液体0.25ml，加入1%鸡红细胞悬液0.25ml，再加入生理盐水0.25ml，混匀。

如用微量板，方式相同。即将每个稀释度取液体0.025ml，加入1%鸡红细胞悬液0.025ml，再加入生理盐水0.025ml，混匀。

将血凝板在室温下放置20～40分钟后，如果配制的抗原液为4HA50，则1∶4稀释度将给出50%凝集终点，如果4HA50高于4个单位，可能是1∶5或1∶6为终点；如果较低，可能1∶2或1∶3为终点。应根据检验结果作适当调整，使工作液确为4HA50。

2.3 血凝抑制试验（HI）

2.3.1 采用50孔板法或试管法

按表5用生理盐水将被检血清做2倍系列稀释，加入含4HA50的抗原液，并设生理盐水和病毒对照，充分振荡后，在37℃作用15分钟；再加入1%鸡红细胞悬液，置20～30℃，20～40分钟后判定结果。使50%红细胞凝集抑制的最高稀释度，作为判定终点。

2.3.2 采用96孔微量板法与50孔板法方式相同，各成分量及加样顺序见表6。

表5 50孔板法或试管法血凝抑制试验单位：ml

春天里农民工

	孔或管号							病毒对照	红细胞对照
	1	2	3	4	5	6	7……	病毒对照	红细胞对照
稀释倍数	5	10	20	40	80	160	320……	0.25	0.50
生理盐水	0.4	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25……
	}	}	}	}	}	}	} 弃0.25
被检血清	0.1	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25……
4HA50抗原	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25……	0.25
1%鸡红细胞悬液	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25……		0.25

表6 96孔微量板法血凝抑制试验单位：μl

	孔或管号							病毒对照	红细胞对照
	1	2	3	4	5	6	7……	病毒对照	红细胞对照
稀释倍数	2	4	8	16	32	64	128……	25	50
生理盐水	25	25	25	25	25	25	25……
	}	}	}	}	}	}	} 弃25
被检血清	25	25	25	25	25	25	25…..
4HA50抗原	25	25	25	25	25	25	25……	0.025
1%鸡红细胞悬液	25	25	25	25 中国专利信息中心	25	25	25……	25	25