猪瘟检测方法
(一)试验材远南运动会料
1．96 孔 110~120°V《国家新型城镇化规划(2014-2020年)》 型医用血凝板
美图天下
3 ．塑料咀
4 ．猪瘟间接血凝抗原(猪瘟正向血凝诊断液) ，每瓶 5 毫升，可检测血清 25非政府间国际组织
~30 头 份
5 ．阳性对照血清，每瓶 2 毫升；阴性对照血清，每瓶 2 毫升
6 ．稀释液每瓶 10 毫升
7 ．待检血清每份 0.2~0.5 毫升( 56℃水浴灭活 30 分钟)
(二)操作步骤
1 ．检测前，应将冻干诊断液，每瓶加稀释液 5 毫升浸泡 7~10 天后方可应用。
2 ．稀释待检血清：在血凝板上的第 1 孔~第 6 孔各加稀释液 50 微升。吸取待检血清
50 微升加入第 1 孔，混匀后从中取出 50 微升加入第 2 孔，依此类推直至第 6 孔混匀后丢 弃 50 微升，从第 1 孔——第 6 孔的血清稀释度依次为 1：2、 1：4、 1：8、 1：16、 1：
32、 1：64。
3 ．稀释阴性和阳性对照血清：在血凝板上的第 11 排第 1 孔加稀释液 60 微升，取阴 性血清 20 微升混匀取出 30 微升丢弃。此孔即为阴性血清对照孔。
在血凝板上的第 12 排第 1 孔加稀释液 70 微升，第 2—— 7 孔各加稀释液 50 微升， 取阳性血清 10 微升加入第 1 孔混匀，并从中取出 50 微升加入第 2 孔混匀后取出 50 微升 加入
第 3 孔……直到第 7 孔混匀后弃 50 微升，该孔的阳性血清稀释度为 1：512。
4 ．在血凝板上的第 1 排第 8 孔加稀释液 50 微升，作为稀释液对照孔。
5．判定方法和标准：先观察阴性血清对照孔和稀释液对照孔，红血球应全部沉入孔底， 无凝集现象 ( — ) 或呈 ( + ) 的轻度凝集为合格；阳性血清对照应呈 ( +++ ) 凝集为合格。
在以上 3 孔对照合格的前提下，观察待检血清各孔的凝集程度，以呈“++ ”凝集的待 检血清最大稀释度为其血凝效价(血凝价) 。血清的血凝价达到 1：16 为免疫合格。
“ - ”表示红细胞 100% 沉于孔底，完全不凝集
“+”表示约有 25% 的红细胞发生凝集
“++”表示 50% 红细胞出现凝集
“+++”表示 75% 红细胞凝集
“++++ “表示 90— 100%红细胞凝集
6 ．注意事项
( 1 ) 勿用 90°或 130°血凝板，以免误判。
( 2 ) 污染严重或溶血严重的血清样品不宜检测。
( 3 ) 冻干血凝抗原，必须加稀释液浸泡 7~10 天，方可使用，否则易发生自凝现象。
( 4 ) 用过的血凝板，应及时冲冼干净， 勿用毛刷或其他硬物刷洗板孔， 以免影响孔内
光洁度。
( 5 ) 使用血凝抗原时，必须充分摇匀，瓶底应无血球沉积。
( 6 ) 液体血凝抗原 4~8℃贮存有效期四个月，可直接使用。冻干血凝抗原 4~8℃贮 存有效期三年。
( 7 ) 如来不及判定结果或静置 2 小时结果不清晰，也可放置第 2 天判定。
( 8 ) 每次检测，只设阴性、阳性血清和稀释液对照各 1 孔。
( 9 ) 稀释不同的试剂要素时，必须更换塑料咀。
( 10 )血凝板和塑料咀洗净后，自然干燥，可重复使用。
枕式包装机控制系统
(李树春)
猪瘟病毒强弱毒鉴别诊断 ELISA 操作方法
(一)试验材料
1．猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原和猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原， 分别供检测经猪 瘟弱毒疫苗免疫后产生的抗体和感染猪瘟强毒后产生的抗体之用。
2 ．酶标抗体
3 ．猪瘟阳性、阴性血清
4 ．酶联板及其他必要的试剂。
(二)操作步骤
1 ．用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各作 100 倍
稀释，以 100 微升分别加入做好标记的酶联板孔中，置湿盒于 4℃过夜。
2 ．弃去孔内液体。用洗涤液冲洗酶联板 3 次，每次间隔 3~5 分钟，拍干。
3 ．用稀释液将待检血清作 400 倍稀释，每孔加 100 微升。同时，将猪瘟阳性、阴性 血清以 100 稀释作对照， 37℃培育 1.5~2 小时。
5 ．用稀释液将兔抗猪 IgG—辣根过氧化物酶结合物作 100 倍稀释，每孔加入 100 微 升， 37℃培育 1.5~2 小时。
6 ．重复第 2 步。
7．每孔加入底物溶液(每块板所需的底物溶液按邻苯二胺 5 毫克+底物缓冲液 5 毫升 +30%过氧化氢 18.75 微升配制) 100 微升，室温下观察显反应(一般阴性对照孔略微 显，立即终止反应，并以阴性孔作空白调零) 。
8． 每孔加入终止液 50 微升，于酶联读数仪上测定 490nm 波长的光密度( OD )。
(三)判定标准
在猪瘟弱毒酶联板上： OD>0.2 为猪瘟弱毒抗体阳性
OD<0.2 为猪瘟弱毒抗体阴性
在猪瘟强毒酶联板上：中档化妆品 OD≥0.5 为猪瘟强毒抗体阳性
OD<0.5 为猪瘟强毒抗体阴性
(四)注意事项
1 ．运输单抗纯化酶联抗原时，必须使用冰盒低温运输； 猪瘟强弱毒单抗纯化酶联抗 原在 4℃保存 6 个月，在— 18℃保存 12 个月。
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