中国艾滋病性病2020年12月第26卷第12期Chin J AIDS STD Vol.26No.12Dec20201283 DOI:10.13419/jki.aids.2020.12.04.论著.
靳廷丽，易志强，刘丽萍，张娜，唐翼龙，丁晨，雷达，吴争
(江西省疾病预防控制中心，南昌330029)
摘要：目的基于行标《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断(WS293—2019)》中病毒载量作为新增的艾滋病病毒(HIV)感染诊断方法，探讨HIV病毒载量检测对HIV感染诊断的可行性和存在的问题。方法采用蛋白
印迹法(WB)对442例标本进行HIV抗体确证检测和HIV病毒载量检测，对比结果的一致性。结果确证检 测为HIV-1抗体阳性样本275例和HIV抗体阴性样本167例，275例HIV-1抗体阳性样本中，病毒载量值全部
高于检测线(20拷贝/mL)，其中272例病毒载量值>5000拷贝/mL,167确证阴性样本病毒载量值均低于检测线。
结论病毒载量检测值>5000拷贝/mL作为艾滋病诊断的方法可靠.«5000拷贝/mL需综合判断并随访。
关键词：艾滋病病毒；病毒载量；诊断
混合糖电解质注射液中图分类号：R512.91；R373.9文献标志码：A文章编号:1672-5662(2020)12-1283-03
Feasibility and problems on HIV viral load test for diagnosis of HIV infection JIN Tingli,YI Zhiqiang,LIU Liping,
ZHANG Na,TANG Yilong,DING Chen,LEI Da,WU Zheng.(Jiangxi Provincial Center f or Disease Control and Prevention,
Nanchang330029,China)
Corresponding author:YI Zhiqiang,************************
Abstract：Objective To analyze the application of HIV viral load test for diagnosis of HIV infection based on the standard"Diagnosis of AIDS and HIV Infection^^(WS293-2019).Methods442samples were detected by HIV-1antibody
confirmation test and HIV-1viral load test.Results275cases of the samples were HIV-1antibody positive and167cases
人的异化
公共厕所TOILETwere HIV antibody negative.The viral load value was all higher than the detection line(20CPs/mL)for all the HIV-1antibody
positive cases,and272cases with load value>5000CPs/mL.The167cases of HIV-1antibody negative cases did not re
ceive HIV-1viral load test.Conclusion The value of HIV-1viral load>5000CPs/mL is reliable as HIV-infection diagnosis
method,otherwise it will require comprehensive analysis and follow-up.
ahbKeywords:HIV;viral load;diagnosis
艾滋病病毒（HIV）病毒载量通过检测HIV在人体血浆中的病毒核酸含量获得，一直作为HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人的随访指标，判断病人的效果以及传播风险，从《全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版）》“将HIV核酸试验作为检测策略的补充试验后，HIV病毒载量开始作为HIV重要的辅助诊断方法。在2017年中国疾病预防控制中心段星等*1对云南德宏地区做过相关调查研究也得出了核酸定量检测〉5000拷贝/mL可用于HIV的诊断结论。行标《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断（WS 293-2019）》（简称《行标》）［3］正式将HIV病毒
收稿日期：2020-02-18；修回曰期：2020-07-31
第一作者简介：靳廷丽（1978一），女，江西省九江市人，副主任技师，硕士，从事艾滋病实验室检测。Email：150225439@ qq
通信作者：易志强，主任技师,Email:*******************载量检测纳入H1V感染的诊断方法之一，该《行标》于2019年7月1日正式实行，为更好推行新《行标》，本研究对比HIV抗体确证结果与病毒载量结果，探讨HIV病毒载量用于HIV感染诊断在实际应用中的可靠性、优势、可能遇到的问题以及解决方法。
1材料与方法
1.1样本来源2019年HIV抗体筛查阳性的待确证标本，需符合首次HIV抗体确证检测且未使用相关抗病毒药物。
1.2方法根据江西省免费救治政策同，收集每位HIV 抗体待确证者1管血清、2管血浆和1管全血分别用于抗体确证、病毒载量和CD4+T淋巴细胞（简称CD4细胞）计数检测。以HIV抗体确证结果作为HIV感染判定标准，HIV抗体检测策略与程序按照《全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版）》执行。
1284中国艾滋病性病2020年12月第26卷第12期Chin J AIDS STD Vol.26No.12Dec2020
确证检测：蛋白印迹试验（WB），试剂：新加坡MP公司生产的HIV-1+2抗体蛋白免疫印迹试剂。按照试剂盒说明书步骤操作，按说明书判读标准进行结果的判读，两条env带加其他任何一条带判断HIV-1抗体阳性；无特异性条带，判HIV抗体阴性；有条带但数量未达到试剂盒阳性评定标准，判为HIV抗体不确定，HIV抗体不确定者2~4周后随访复检，根据最终随访的抗体确证结果判断HIV感染状态。
病毒载量检测：仪器：COBAS T aq M an96分析仪，试剂：Roche公司的COBASTaqManHIV-lTest，按照试剂盒说明书步骤操作，高于检测线报告检测值.最低检出线20拷贝/mL，低于检测线即报告“TND”。对于病毒载量W5000拷贝/mL的样本重新采样检测。
CD4细胞计数检测：仪器：BDcalibur，试剂：CD4/CD8/CD3抗体三试剂，按照试剂盒说明书步骤操作，按实际检测值报告结果。
1.3数据统计法用SPSS2
2.0软件处理数据，皮尔森於检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
共收集到标本合计450例，剔除既往确证及已进行抗病毒病例8例，符合要求标本442例，其中确
证为HIV抗体阳性标本275例，HIV抗体阴性标本167例。275例HIV抗体阳性样本病毒载量：＞5000拷贝/mL的272例；W5000拷贝/mL3例，分别为940拷贝/mL、2800拷贝/mL和2070拷贝/mL。167例HIV抗体阴性样本中病毒载量均为低于检测线。详见表lo
本研究中按照艾滋病分期标准151以CD4细胞数200个/yL和500个/pL作为分界点，样本中CD4细胞数＞500个/pL、200-500个/pL之间和V200个/pL的HIV-1抗体阳性率分别为6.6%、85.3%和94.5%,CD4细胞数与HIV病毒载量呈负相关。
442例样本中有154例标本初次确证为HIV抗体不确定，经2~4周的随访，确证检测诊断HIV抗体阳性37例，HIV抗体阴性117例。确证带型组合所占比率和阳转率分别为gpl60/gp160+p17带型45.0%和10.1%；p24/p24+pl7带型占26.0%和5.0%；包含p24、gpl60带型占20.0%和77.4%；含两条或三条env带占3.0%和100%；其他带型占6.0%和0。
HIV抗体确证阳性结果与病毒载量、CD4细胞数及窗口期的抗体带型等特征均有显著相关性（表2）。
样本的HIV-1抗体确证、病毒载量检测结果情况表（例）表1
第一次HIV抗体
-例数-病毒载量/拷贝/mL HIV抗体确证结果
确证结果确证带型TND20-5000>5000阳性阴性HIV抗体gpl60、gpl20200220不确定gpl60、gpl20.gp41200220 gpl60、p24200020200
p2******* gpl60、p39、p2*******
gp160、p51、p2*******
gpl60、p24、pl7200220
gpl60701670
p24343400034
gpl60393900039西安事变新探
pl7440004
p3******* gpl60、p2*******
gpl60x pl7110001
p24、pl7440004
p5*******
p6*******
p66、p5*******
gp160、p66222200022 HIV抗体阴性无特异条带505000050 HIV-1抗体阳性-238022362380
3讨论
基于《行标》中新增“核酸定量（病毒载量）试验＞5000拷贝/mL提示HIV感染，阴性不能排除HIV感染，当样本检测值W5000拷贝/mL，报告检测值，结合临床及流行病史、CD4细胞检测值或者HIV-1抗体随访检测结果等进行诊断”，本研究中442例标本病毒载量结果与HIV抗体确证结果一致性很好，272例标本病毒载量＞5000拷贝/mL均为HIV 抗体确证
中国艾滋病性病2020年12月第26卷第12期Chin J AIDS STD Vol.26No.12Dec20201285阳性.按照诊断标准这两种诊断结果完全一致，病毒载量的阳性预测值100%,
表2CD4细胞数、病毒载量和窗口期确证带型与HIV-1抗体阳性关系
项目总例数-
HIV抗体阳性
例数率/%
/值P值
CD4细胞数/个/pL(442例)>50015110 6.6288.80.00
200-50016313985.3
v20012812194.5
初次确证不确定者带型(154例)gp160/gp160p+p1769710.179.40.00
p24/p24+pl7402 5.0黎明职业大学图书馆
包含p24、gpl6O312477.4
含两条或三条env带44100.0
其他带型1000.0
核酸定量值/拷贝/mL(442例)v2016700.0146.70.00
20-500033100.0
>5000272272100.0
将病毒载量W5000拷贝/mL的样本按《行标》要求均进行了重新采样复检，前后两次结果相差都在一个数量级以内，结果一致。病毒载量W5000拷贝/mL 的高于检测线的样本，在本研究中H1V抗体阳性预测值也达到100%，但是由于病毒载量低的样本易受到很多因素干扰，根据《行标》不能诊断为HIV感染，因此需要综合判断且以HIV抗体确证结果为参考。
本研究中首次确证为HIV抗体不确定者，在2~4周对其进行了随访，发现病毒载量值TND,HIV抗体均为阴性，载量值＞5000拷贝/mL,HIV抗体均为阳性，可见病毒载量检测大大缩短了HIV抗体检测的窗口期.因为感染早期病毒在体内大量复制，而抗体还未完全产生，所以病毒载量是早期HIV感染诊断首选方法。同时对H1V抗体不确定结果的确证条带进行了分析：本研究抗体不确定样本带型中gpl60/gpl60+pl7、包含p24、gpl60、p24/p24+pl7几种组合带型HIV抗体阳转率相似，阳转率20%左右；含两条或三条env阳转率达100%，出现这些带型建议及时做核酸检测或密切追踪随访.尤其是含两条或三条env带需高度警惕，而除此以外的其他带型阳转率极低。国内也有类似研究[5-6,o因此，HIV抗体窗口期出现阳转率高的确证带型提示尽早使用病毒载量检测.缩短窗口期，早期诊断、早、早
干预，减少失访率，减少病毒传播：HIV主要侵犯的是CD4细胞导致细胞的破坏，从而导致免疫细胞数量下降，在HIV感染后，通过CD4细胞可以了解患者的免疫状况，研究中对所有样本均进行了CD4细胞计数检测，CD4细胞数V500个/pL 的HIV阳性预测值显著升高，且发现CD4细胞数和病毒载量呈现负相关，与相关文献中指出的CD4细胞数与艾滋病感染免疫相关性一致|7-'°'，对于部分HIV晚期感染者由于免疫缺陷造成抗体确证条带少，CD4细胞数低，这时提示采用病毒载量检测是HIV感染诊断最有效的方法。因此CD4细胞计数可以作为HIV感染诊断重要的参考指标。
病毒载量检测具有敏感性和特异性高特点，尤其在感染早期和艾滋病终末期比HIV抗体确证检测更具优势。但病毒载量检测敏感性高，易出现污染，使用这种方法诊断时务必谨慎，做到实验前、中、后严格质量控制，对于W5000W贝/mL的病毒载量需要综合判断。病毒载量检测作为新的HIV感染诊断方法，将与HIV 抗体确证检测方法互为补充，合理使用这两种方法并结合CD4细胞检测将更精准、髙效诊断HIV感染。
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