第鳥卷年第月期
山东体育学院图书馆贵州医科大学学报
Vol.46 No.4
年 2 月
JOURNAL OF GUIZHOU MEDICAL UNIVERSITY
2221.4
-临床研究•
无创产前基因检测在血清学筛查风险值异常及高龄 孕妇中的应用*barkhausen
** ［基金项目］国家卫生计生委医药卫生科技项目(w2215cw S ch3 8* *通信作者 E-mOl ：272177239@ qq. com
景亚玲1刘晓芳12，陈俭辉1赵连芳1…，赵咏梅1
(/遂宁市中心医院产前诊断中心实验室，四川遂宁629(26 ； 4.遂宁市中心医院产科，四川遂宁722602)
［摘 要］目的 探讨无创产前基因检测(NIPT)在血清学筛查风险值异常及高龄孕妇中的临床应用价值及意
义。方法选取血清学筛查风险值异常、高龄的单胎并选择进一步检查的孕妇作为研究对象，将选择先行NIPT 检测、结果异常者再行羊水穿刺进行胎儿染体核型分析的孕妇作为NIPT 组，将直接选择羊水穿刺进行胎儿核 型分析的孕妇作为羊水穿刺组；收集2组孕妇产前检查的数据，比较2组孕妇的临界风险21-三体高风险23-三
体高风险及高龄孕妇的情况及胎儿染体异常检出率。结果NIPT 组共纳入1198例，包括血清学筛查临界风
景观水处理技术
险546例21-三体高风险54例23-三体高风险5例及高龄孕妇487例，17例NIPT 提示异常，分别为7例、、
例、、例和6例，后经羊水穿刺诊断胎儿染体异常的分别为8例、)例、0例及2例，检出率分别是0. 55%、
0.63% 2%及1.63% ；羊水穿刺组共纳入1 253例，包括血清学筛查临界风险15例、21-三体高风险515
例23-
三体高风险65例及高龄孕妇568例，其中33例核型异常，分别诊断出胎儿染体异常2例、、5例2例和19例， 检出率分别为/ 6% 2. 61% 2. 15%和2. 11% ；经”检验,NIPT 组与羊水穿刺组孕妇在血清学筛查临界风险、
21-三体高风险23-三体高风险及高龄孕妇中的染体异常检出率比较，差异无统计学意义(P>0.25)；经随访 NIPT 低风险孕妇中未发现假阴性者。结论NIPT 检测可作为产前诊断技术有效的辅助筛查方法，并且能够有
效降低染体异常胎儿出生的风险。
［关键词］产前诊断；血清学筛查；无创产前基因检测；羊水穿刺；高龄孕妇；产前筛查
［中图分类号］R714.55 ［文献标识码］A ［文章编号］20960388(2021)02020406
DOI ： 10.19367/j. cnki. 90660388.946 / 02.013
Application of NIPT in preynani women with abnormality in serological
screening and preynani women with advanced age
JING Ya/ny 1 , LIO Xiaofany 1，, CHEN Jiandui 1 , ZHAO Lianfany 1 , ZHAO Yonymei 1
(1. Laloratoru o/ Preratai Diagnosts Cenm-, Cuininn Central Hospital, Cuininn 629000, Cicauaa , CCina ；
2. Depart/nent U Obstetrics , Cuininn Central Hospital, Cuininn 622000, Cicauaa , CCina )
［Abstroch ］ Objechvv To explore the c/nical app/cyOon value and significydce d Nou-invasive
prenatal testing ( NIPT ) in p/p/nt women with adnorma/ty in semm screening and preanant women with advanced age. Mehlods
The preanant women with adnopnaOty in sno/pical screening or
advanced age with one preanancy were selected as stufy sufjects. The preanant women with adnopnal results in NIPT testing first and then sufjected to amniocentesis fdr fetal ka/otype analysis were
selected as the NIPT p/up , while the preanant women who directly pccepted amniocentesis for fetal
ka/otype analysis were selected as the amniocentesis p/up. The prenatal examination data of the two p/ups were collected. The c/bcal PsP , the higU PsP for tnsomy 21 ( T21) , the higU PC of tnsomy 15
常熟市淼泉中学(T15) , and the detec/ox rates of fetal chromosomal adnorma/tivs in advanced preanant women were
222
2期景亚玲等无创产前基因检测在血清学筛查风险值异常及高龄孕妇中的应用
compared.Results A total of7175cases were iucluPed ix NILT gmap,iucluPiny546cases of c/Vcai risk ix semPpica-screeoiny,167cases of high/sk of T27,5cases of high/sk of T15,and 437cases of p agiie-womex with0:000—0-5X0.Sevexteex cases ix NIPT gmpp had aduopnaPties, iucluPiny7cases with critical/sh of semPpica-screeoiny,7caso with the/sh for T27,7caso with the/sh for T15,and9cases for advauced age,aspectively.Thoo cases were further Uiayuosed by amniotic/ui/,and ve/fied,iucluPiny3cases,7caso,7caso and6cases,respectively.The detection rates were7.25%,7.63%,7%,and7.23%,respectively.Io addition,a total of7253 cases were acaiod ix amniocextesis gmpp,iucluPiny175cases of c/t/ai Psh for sooPpica-shooOy,517cases of high Psh of T
27,65cases of high rish of T15,and565cases for aOvadceX age.Amoxy which,33c ases had aduoonai uoyotypes,Pter diayuosed as2cases with chVcai rish of semP/icai screeoiny,17cases with the Psh for T27,2cases with the Psh for T15,and17cases for aOvadceX age,aspoOCy.The detection rates were7.9%, 2.97%, 6.7%,and 2.7%, respectively.The丸4test analysis showed that there was uo staOsticaliy significau-diUerexces ix the detection rates of chamosomai aOuopnaPties amoxy oregnau-womex with high Psh of T27,high Psh of T15,and advadceX mateaal age Uet/eex NILT and amniocextesis gapps(P>7.75).No false uegatives were found amoxy o regnau-womex with Pw Psh of NILT after follow-up.Conclusion NILT test cau be used as au ehective auxiliam screeoiny method for yrexata-diayuosis and cau ekechvely reduce the Psh of bioh of fetuses with chamosomai adnormaPVes.
[Key wordi]yrexata-UOyuosis;semlo/icai screeoiny；dop-idvesive yrexata-testiny(NILT-；
amniocextesis;oregnau-womex with advadceX aye;yrexatal screeoiny
有研究报道，胎儿染体异常占出生缺陷遗传学病因的89%以上，常见类型有27-三体（唐氏综合征）35-三体（爱德华综合征）及性染体异常等，此类患儿大都伴有轻中度、甚至严重的智力障碍或结构畸形J_4]，目前尚无有效的方法该病，只能通过产前检查尽早发现并及时终止妊娠来避免胎儿的
出生。血清学筛查可以从一般孕妇人中筛查出胎儿罹患7-三体或27-三体风险较高的孕妇，而高龄孕妇由于其卵细胞质量下降、生殖功能减退、生殖细胞或受精卵易发生染体畸变或不分离等导致胎儿染体异常发生率较高此类孕妇大多行羊水穿刺分析胎儿染体核型，但羊水穿刺属于有创检测技术，存在误伤胎儿、致畸、流产、宫内感染等风险⑷。无创产前基因检测（dox-iuvasOe yrexata-testing,NILT）由于简便、无创，并且对27、7、7号等染体非整倍体异常的筛查具有较高的灵敏度、特异性及阳性预测值，越来越多的孕妇选择先行NIPT检测，如果NIPT阳性者再行介入性产前诊断[5]o本文旨在通过比较孕妇先行NIPT检测（阳性者再行羊水穿刺）与直接行羊水穿刺间的胎儿染体异常检出情况，探讨NIPT 检测在血清学筛查风险值异常孕妇及高龄孕妇中的临床应用价值。现报告如下。
1对象与方法
•1研究对象
统计2215年7月一2719年2月接受遗传咨询的血清学筛查风险值异常及高龄的单胎孕妇检查的情况，以自愿选择先行NIPT检测、结果异常者再行羊水穿刺进行胎儿染体核型分析的孕妇作为NIPT组，以直接选择羊水穿刺进行胎儿核型分析的血清学筛查风险值异常孕妇及高龄孕妇作为羊水穿刺组。血清学筛查风险值异常包括：血清学筛查临界风险、27-三体（T27）高风险及7-三体（T18）高风险，设定T27和T18高风险切割值（Cut Off）分别为、：277和7：357，大于Cut off值为高风险，风险值在
Cut off值到7：1007的孕妇为临界风险。孕妇预产期年龄M35岁的归为高龄孕妇。所有检查者均严格签署知情同意书。
1.2方法
1.2.1无创产前检测方法及诊断标准采集孕妇静脉血17mL，离心分离血浆、提取血浆游离DNA、构建文库、文库定量、BeraGeoomics/ILumino Next-
225
贵州医科大学学报46卷
Sep CN500高通量测序机测序及数据分析，计算出132521三条染体和其它染体Z值J422］。利用z值评估样本的风险值,Z为-3＜〜＜3判定为非整倍体低风险，M3判定为非整倍体高风险; NIPT结果提示异常者行羊水穿刺及胎儿核型分析，对NIPT低风险孕妇详细解释检测结果及意义。
1.2.2羊水穿刺及核型分析在无菌条件下，超声引导定位抽取羊水22mL，均分为2管,800P min离心1min，留取细胞悬液1.9mL，采用平行法双线，分别接种于加有GBICO培养基8mL的2个培养瓶中，置于37°C培养箱培养7d、换液、转种,10d左右根据细胞生长情况收取细胞。经秋水仙碱终止羊水细胞生长、物理法刮取羊水细胞、低渗、预固定、固定、再固定、滴片、烤片、胰酶消化及Giemsa染制
备羊水染体片，经蔡司AxU Imager Z2全自动染体扫描分析仪扫片，每个标本至少分析8个核型，计数39个分裂相，有异常核型需增加分析和计数的个数。根据《人类细胞遗传学国际命名体制（I SCN201）》对所检染体进行命名，本研究未统计染体正常变异的核型结果。
1.2.2对妊娠或新生儿结局进行随访采用多种方式对所有研究对象妊娠或新生儿结局进行随访。•2统计学分析
数据采用SPSS20.2统计软件进行分析，计数资料用例数和（或）百分率描述，数据比较采用?检验；计量资料采用均数土标准差⑴土t表示，数据比较采用单因素方差分析，两两比较采用u检验；P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1染体异常检出情况
结果显示,NILT组共纳入1198例，包括血清学筛查临界风险546例21-三体高风险102例28-三体高风险5例及高龄孕妇487例；其中17例NIPT提示异常，经羊水穿刺后确诊胎儿染体核型（表1）；羊水穿刺组共纳入1253例，包括血清学筛查临界风险15例21-三体高风险519例28-三体高风险25例及高龄孕妇568例，其中33例核型异常（表6）o
表1NIPT组17例NIPT异常的胎儿染体核型及妊娠结局
Tad.0The ka/otype and preanancy outcome of17fetuses with adnormal NIPT in NIPT p/xp
序号年龄/岁NIPT时孕周/周检查指征NCPT结果胎儿染体核型妊娠结局12821+31：694(12)T2147,XN,+21终止妊娠228171：993(12)T2147,XN,+21终止妊娠88217+81：867(T21)ChP7+mes47,XN,+17[5]/46,XN[28]继续妊娠至分娩48219+41574(T21)ChrP-46,XN继续妊娠至分娩525161675(T21)ChrP-46,XN继续妊娠至分娩627171776(T21)ChrP-46,XN继续妊娠至分娩72216+41989(T21)ChrP+46,XN继续妊娠至分娩82525+2156(T21)ChrP-45,X终止妊娠98928高龄T2147XN，+21终止妊娠108516+5高龄T2147XN，+21终止妊娠118717高龄T1847XN，+18终止妊娠128716高龄T1847XN，+18终止妊娠188516高龄ChrP-45X终止妊娠148815+5高龄ChrP+47XXY继续妊娠至分娩158617高龄ChrP-46XN继续妊娠至分娩168818高龄T1846XN继续妊娠至分娩178816高龄ChrP-46XN继续妊娠至分娩
222
2期景亚玲等无创产前基因检测在血清学筛查风险值异常及高龄孕妇中的应用
表2羊水穿刺组33例核型异常胎儿的穿刺孕周、检查指征及染体核型Tad.2Gestational age a-pudhu
a,examination correction,and chromosome koaOypes of33 cases of ietus with aOuopnai kdaompe o amniocextesis gmpy
序号年龄/
岁
羊水穿
刺孕周
/周
检查指征胎儿染体核型
72422+31：964(T21)47,XN,+27
22922+31：963(T21)47,XN,+27
32327+77：27(T21)47,XN,+27
4337+37：132(T21)47,XN,+27
32722+37：6(T27)47,XN,+27
6227+47：49(T27)47,XN,+27
72318+57：72(T21)47,XN,+27 827277：79(T21)47,XN,+27
92818+27：233(T21)46,XN,+21,dertl4；21)(ql7；ql7) 173322+37：46(T27)mcs47,XN,+21[18]/46，血[12] 172318+47：412(T27)mas47,XN,+7J]/46[29] 12297+47：423(T27)47,XYY
7307+27：79(T21)-0/5/[11]/46/223] 142820+27：25(T27)43,XN,roa(14；I5)(ql7；217)pa-72420+47：87(T21)43,XN,roa(15；7)(ql7；ql7) 162920+21：156(T21)46,XN7(2；3)(p25；yl7) 775727+57：425(T27)46,XN,dup(9)(q27)mat 序
号
年龄/
岁
羊水穿
刺孕周
/周
检查指征胎儿染体核型
18357+21：31(T18)47,XN,+18
73027+27：52(T18)47,XN,+18 2027277:77(118)47,XN,+18
27227+57:442(118)47,XN.+18 224227高龄47,XN,+27 235722+3高龄47,XN,+27
24367+3高龄47,XN,+18 234322+3高龄47,XN,+18
26477+5高龄47,XXX
274018+6高龄47,XXY
28407高龄47,XXY
293920高龄47,XXX
303820高龄42,XN,-(13；27)(ql3；ql3.3)
42,XN,-(I；2)(p5I.6；qlI.6), 57437+5高龄
iuv(9)(pllql5-323622+7高龄46,XN7(9；11)(p22；p13)
47,XN,iuv(3)(pl3.2q7), 334322+7高龄
iuv(9)(pl7ql5-
注：序号7〜7和30〜33的孕妇选择继续妊娠，新生儿健康，其余25例孕妇选择终止妊娠。
2.2随访及染体异常检出率界风险、27-三体高风险、18-三体高风及高龄指征2
结果显示,NIPT低风险的孕妇，其胎儿出生3组孕妇的染体异常检出率比较，差异均无统计学个月后的随访暂未发现异常病例；在血清学筛查临意义(P>6.25)。见表3o
表3NIPT组与羊水穿刺组的染体异常检出率
Tad.3Comya/sox of the detection rates Uet/eex NIPT and amniocextesis gmpps
血清学临界风险血清学27三体高风险血清学7-三体高风险__________髙龄________ NIPT组羊穿组NIPT组羊穿组NIPT组羊穿组NIPT组羊穿组例数(n)5461457457565487563
阳性(n)72170497
真阳性(n)32170467
假阳性L40000030
longshe
检出率/%02557900.63 2.210 6.7723 2.7
2 2.79 2.6730.3267212
P0.720.1020.5630.271
3讨论
血清学筛查风险值异常不仅可以提示怀有7-三体或27-三体胎儿的风险增高，还可以提示开放性神经缺陷、宫内发育迟缓和流产等的风险增加[5_5]；由于婚育观念的改变和计划生育政策的变化，我国高龄孕妇明显增多J7]，而高龄会导致胎儿染体异常发生率增高[17]，所以临床工作中要注意这两大类
体的进一步产前检查。当临床医生建议临界风险孕妇先行NIPT检测异常者再行羊水穿刺，血清学筛查高风险孕妇及高龄孕妇直接行羊水穿刺术，孕妇出于紧张、焦虑和恐惧等自身原因，会出现临界风险孕妇愿意直接做羊水穿刺确诊胎儿染体，但也有血清学筛查高风险孕妇和高龄孕妇不愿或有介入性产前诊断禁忌症而不适行羊
227
贵州医科大学学报46卷
吴元欣
水穿刺术的情况。
血清学筛查临界风险孕妇为NIPT的适用人［2］o在充分知情同意情况下，本研究的251名临界风险孕妇中,567名孕妇选择先行NIPT，只有7名孕妇NIPT提示异常(1.23%)需要接受侵入性产前诊断。由于孕周不适宜再等待、想要准确率更高的检测、追求“一步到位”等多种原因，另外的105名(12.13%)临界风险孕妇选择直接行羊水穿刺确诊胎儿染体核型，最终检出21-三体2例(/96%)，在临界风险孕妇的NIPT组与羊水穿刺组的检出率差异无统计学意义(P>6-05)，表明对于临界风险孕妇先行NIPT检查可以显著减少孕妇接受有创性产前诊断的例数。
研究表明血清学筛查高风险可以提示21三体和3-三体以外的其他多种染体异常，如环状染体、易
位染体等［15-15］，所以血清学筛查高危孕妇如果仅行NCPT检测而不行羊水穿刺，可能会存在漏诊除染体数目异常外的其它染体异常类型的风险［4］o本研究有102名21-三体高风险孕妇及5名18-三体高风险孕妇选择先行NIPT，只有1例提示性染体异常，后经羊水穿刺诊断为45, X；其余519名21-三体高风险孕妇和25名3-三体高风险孕妇孕妇选择直接羊水穿刺，检出12例孕妇胎儿染体有异常。且在2种高风险孕妇的NIPT组与羊水穿刺组的检出率间差异均无统计学意义(P>0.05)，表明NIPT在血清学筛查高风险人已具有十分良好的表现,NIPT可以降低由于筛查高风险而接受介入性产前诊断病例数量、减轻产前诊断的工作量等［I2-I2］o
高龄孕妇胎儿多较为珍贵，由于介入性产前诊断存在重新穿刺、宫内感染和流产等风险，所以高龄孕妇对介入性产前诊断的依从性并不高。本研究中有457名(46.16%)高龄孕妇共选择先行NIPT,2例NIPT提示异常，经穿刺后检出2例胎儿染体有异常，其中、例核型分析结果为47,XXY 的高龄孕妇由于怀孕困难，选择继续妊娠，新生儿生殖器异常。其余505名(53.84%)高龄孕妇选择直接行羊水穿刺，检出12例胎儿染体有异常。在高龄指征中NIPT组与羊水穿刺组的检出率间差异无统计学意义(P>0.05)，表明NIPT在高龄孕妇中也具有十分良好的表现o
在138例的NIPT组中，共有17例NIPT提示异常。其中1例提示3号染体增加高风险，经羊水穿刺确诊为3号染体三体嵌合体，该孕208妇拒绝进一步检查，孕期超声监测未发现异常，后足月分娩，外周血核型正常、未见嵌合体，随访时孩子已经7个月，生长发育未见异常，主要考虑胎盘嵌合体、母体
细胞污染、羊水培养细胞分化出畸形克隆和实验误差等原因导致的假性嵌合，所以当产前诊断检测出嵌合体时，应采用染体微阵列技术(chromosomal micoacay analysis,CMA)、荧光原位杂交技术(00010(0X(:0in situ hyaonizatio/,FISH)和胎儿脐带血核型等方法验证，并结合B超等结果，提供科学准确的信息，减少正常胎儿的丢失J5］o本研究发现7例NIPT假阳性,NIPT假阳性的可能原因是胎丿L/胎盘嵌合体、双胎之一胎死宫内、母体嵌合体、母源性拷贝数变异、母源性恶性肿瘤，而性染体由于X染体含有较多的GC 碱基和失活现象以及与Y染体标记序列的相似性等原因导致检测准确率较低［"""o NIPT检测也会出现假阴性的现象［3'24］o因此，要科学对待和处理NIPT结果，当NIPT提示异常时应当进行产前诊断以避免由于假阳性引起正常胎儿被引产，当NIPT阴性时应加强后期B超等监测，避免由于假阴性导致严重的染体病患儿的出生，从而最大程度地达到优生的目的J1］o
在1253例的羊穿组中，发现33例染体异常，其中有6例胎儿染体异常结果若孕妇选择先行NIPT检查可能无法检出，包括1例3-三体嵌合体、、例重复、4例平衡易位、2例罗伯逊易位和1例倒位，因此，临床医生有义务告知孕妇NIPT的局限性。遗传咨询后建议3号染体三体嵌合体的孕妇进一步检查验证是否为假性嵌合体的干扰，但该孕妇拒绝进一步检查，选择终止妊娠。9q21区段重复的胎儿核型，经追溯与其母亲核型一致，孕期超声监测未发现异常，在充分告知胎儿可能会出现的情况后，该孕妇选择继续妊娠，随访至孩子、岁，生长发育未见异常。染体异常携带者在减数分裂过程中会产生不平衡配子，可能会有不孕不育、自然流产和染体异常患儿的出生等风险叫24o在充分告知胎儿
可能会出现的异常情况后，本研究中的7例染体异常携带者的孕妇均选择继续妊娠，且新生儿未见异常。
综上所述，血清学筛查风险值异常可以提示除3-三体和21-三体以外的其他染体异常，而高龄孕妇的年龄越大，胎儿染体异常发生率越高。本研究表明NCPT检测可作为产前诊断技术有效的辅助筛查方法，对于不愿或无法接受产前诊断的血
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议