实验方案镧铈对铜胁迫下豌豆种子萌生和生长的阻碍
(Ⅲ)、Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌生阻碍的显效剂量挑选
(1)浓度梯度设计：
LaCl3/ CeCl 3溶液配置：先配置1g•L-1的LaCl3/ CeCl 3溶液母液，然后将母液别离稀释成浓度为五、10、20、40，60 mg•L-1梯度浓度，调剂PH（HCL/NAOH）至，对照(CK)为PH 调剂至的去离子水。 重金属Cuso4浓度的设置：10、2五、50、100、200、400 mg•L-1，对照用蒸馏水。
(2)试材培育
种子预处置：选取均匀饱满的豌豆种子用%HgCl2溶液消毒15min，别离用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。
（3）实验设置：CK，La，Ce，Cu（共4组18个浓度57个样品）
（4）试材处置：
选取LaCl3、CeCl3和CuSO4各个梯度溶液溶液，豌豆种子经预处置后用各个梯度溶液浸没处置，对照
用蒸馏水，置于25±1℃浸种24h后，将处置后种子均匀排列在直径9cm、垫有2层滤纸的培育皿中，每处置加入必然量水培育（以没过种子2/3为标准），每处置3皿重复，每皿20粒。 氢氧化钾指标测定方式：
种子发芽第三天测α—淀粉酶，第四天测发芽势，前三天测发芽指数和发芽率，第五天测量根长、茎长，第六天测根系活力、叶绿素含量、可溶性蛋白质、可溶性糖、SOD、POD、CA T、MDA.
2．La(Ⅲ)和Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌生及爱惜酶的阻碍
诺日吉玛
(1)试材培育
种子预处置：选取均匀饱满的豌豆种子用%HgCl2溶液消毒15min，别离用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。
（2）实验设置：在上一步骤中别离挑选出LaCl3、CeCl3的低剂量、适宜剂量、高剂量三个有效浓度和CuSO4的一个有效浓度，别离记为A1，A2，A3；B1，B2，B3；C。
（3）实验步骤：有以下几组：
人机交互论文A+C:A1+C、A2+C、A3+C
B+C:B1+C、B2+C、B3+C
A+B+C：A1+B1+C 、A1+B2+C 、A1+B3+C、A2+B1+C、A2+B2+C、A2+B3+C、A3+B1+C 、A3+B2+C、A3+B3+C
酸盐缓冲液（PBS）配制方式
磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M）
pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.2M NaH2PO4/ml
Na2HPO4·2H2O分子量＝0.2M溶液含35.61g/L
Na2HPO4·12 H2O分子量＝0.2M溶液含71.64g/L
NaH2PO4·H2O分子量＝0.2M溶液含27.6g/L
NaH2PO4·2H2O分子量＝0.2M溶液含31.21g/L
PBS
PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH
PBS缓冲液（～）：NaCl 137mmol/L，KCl L，Na2HPO4 L，KH2PO4 L 称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸馏水中，用HCl调剂溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1 L。保留于4℃冰箱中即可。
母液的配制：
Na2HPO4：称取Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水
NaH2PO4：称取NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水
各类浓度PB(pH=的配制：
先配PB (pH=，100ml)：取19ml L的NaH2PO4， 81ml L 的Na2HPO4, 即可。
然后只需将PB (pH=按相应比例适当稀释即可，如：
PB（PH=）：取500ml PB，加水稀释至1000ml 即可。
PB （PH=）：取50ml PB，加水稀释至1000ml 即可。
PB （PH=）：取100ml M PB，加水稀释至1000ml 即可。
假设需要NaCl的话，加入NaCl 至%（g/100ml）即可。
另：其它各类另PH值的PB（100ml)配方：
pH NaH2PO4（ml）Na2HPO4（ml）
38 62
0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方式
称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调剂溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保留存于室温或4℃冰箱中。
需要注意的是，通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调剂渗透压的。若是是用于免疫组化的话，那么需要在配置的时候别离加入100 u/ml青霉素和链霉素以后再调PH、定容、灭菌消毒。
PH
H2O 1000 1000 1000 1000
NaCl
Na2HPO4
NaH2PO4
PBS缓冲液
称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO412H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至，加水定容至1L，常温保留备用。
L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制：
甲液：L Na2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g，加蒸馏水至1000ml ;
乙液：L KH2P04溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g，加蒸馏水至1000m1。
将甲乙液分装在棕瓶内，于4℃冰箱中保留，历时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液，见下表:
pH 甲液ml 乙液mI
实验01根系活力的测定（TTC法）
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 分析天平（感量）；3. 电子顶载天平（感量）；
4. 温箱；
5. 研钵；
6. 三角瓶50ml；
7. 漏斗；
8. 量筒100ml；
9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。
（三）试剂：1. 乙酸乙酯（分析纯）。2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。％TTC溶液准确称取，溶于少量水中。定容到100ml。历时稀释至各需要的浓度。 4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
5. 1mol/L硫酸用量筒取比重的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
6. L琥珀酸称取琥珀酸，溶于水中，定容至100ml即成。
三、实验步骤
（1）TTC标准曲线的制作取％TTC溶液放入10ml量瓶中，加少量Na2S2O4粉摇匀后当即产生红的甲月替。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后别离取此液、、、、置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即取得含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
（2）称取根尖样品，放入10ml烧杯中，加入％TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～3h，尔后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反映。（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
（3）把根掏出，吸干水分后与乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一路在研钵内磨碎，以提出甲月替。红提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在波长485nm下比，以空白实验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。
采油速度四、结果计算
四氮唑还原强度（mg/g(根鲜重)/h）＝四氮唑还原量（mg）/[根重（g）×时刻(h)] 实验02 脯氨酸含量的测定
（二）仪器设备：1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；
5. 大试管；
6. 一般试管；
7. 移液管；
8. 注射器；
9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪子。
（三）试剂1. 酸性茚三酮溶液：将茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol/L磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中；2. 3％磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml；3. 冰醋酸；4. 甲苯。
三、实验步骤
1. 标准曲线的绘制（1）在分析天平上精准称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。（2）系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml容量瓶，别离盛入脯氨酸原液，，，，及，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度别离为1，2，3，4，5及6μg/ml。（3）取6支试管，别离吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶
液，每管在滚水浴中加热30min。（4）冷却后各试管准确加入4ml甲苯，振荡30S，静置片刻，使素全数转至甲苯溶液。（5）用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波优势进行比。（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml测定液中脯氨酸的含量（μg/2ml）。
2. 样品的测定（1）脯氨酸的提取：准确称取不同处置的待测植物叶片各，别离置大管中，然后向各管别离加入5ml3％的磺基水杨酸溶液，在滚水浴中提取10min，（提取进程中要常常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。（2）吸取2ml提取液于另一干净的带玻塞试管中，加入2ml冰醋酸及2ml酸性茚三酮试剂，在滚水浴中加热30min，溶液即呈红。（3）冷却后加入4ml
甲苯，摇荡30S，静置片刻，取上层液至10ml离心管中，在3000rpm下离心5min。（4）用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红甲苯溶液于比杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上520nm波优势比，求得吸光度值。
四、结果计算依照回归方程计算出（或从标准曲线上查出）2ml测定液中脯氨酸的含量（Xμg/2ml），然后计算样品中脯氨酸含量的百分数。计算公式如下：
脯氨酸含量（μg/g）＝[X×5/2]/样重（g）。
实验03 叶绿素含量的测定
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 电子顶载天平（感量）；3. 研钵；4. 棕容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量滤纸；7. 吸水纸；8. 擦境纸；9. 滴管。
（三）试剂：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉。
三、实验步骤
1. 取新鲜植物叶片（或其它绿组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。
2. 称取剪碎的新鲜样品，共3份，别离放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。
3. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml 棕容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一路倒入漏斗中。
4. 用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体素全数洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。
5. 把叶绿体素提取液倒入光径1cm的比杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。
华大博雅四、实验结果计算：将测定取得的吸光值代入下面的式子：Ca=－；Cb=－。据此即可取得叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。最后依照下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。
实验04植物组织中可溶性蛋白质含量的测定（福林－酚试剂法）
（二）仪器设备：1. 722分光光度计；2. 离心机；3. 恒温水浴；4. 定量加样器；5. 冷凝回流装置一套；
6. 研钵；7. 离心管；8. 刻度移液管；9. 微量滴定管；10. 试管等；
（三）试剂：标准蛋白质溶液：称取25mg牛血清蛋白，溶于100ml蒸馏水中，使终浓度为250μg／ml；试剂甲；试剂乙。
第一配制A液：4%碳酸钠（Na2CO3）溶液与L氢氧化钠（NaOH）溶液等比例混合（2%Na2CO3，NaOH）；B液：1%硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶液与2%酒石酸钾钠溶液等比例混合（%CuSO4·5H2O，%酒石酸钾钠）。在利用前将A液与B液按50∶1的比例混合即成。此为FolIn－酚试剂甲液，此试剂只能利用1天。
酚试剂（相当于Folin试剂）的配备：称取钨酸钠（Na2WO4·2H2O）100g、钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）25g，加蒸馏水700ml溶解于1500Ml的圆底烧瓶中。以后加入85%胡冰心
的H3PO450ml，浓HCl 100ml，安上回流装置（利用磨口接头，假设用软木塞或橡皮塞时，就必需用锡铂纸包起来），使其慢慢沸腾10H。冷却后加入硫酸锂（Li2SO4·H2O）150g，水50ml，溴水2~3滴，不用回流装置开口煮沸15min，以释放出过量的溴。待冷却后稀释至1000ml，并过滤入棕瓶中，密闭于冰箱中保留（冷却后溶液呈黄，倘假设仍呈绿，须再滴加数滴液体溴，继续煮沸15min）。利历时用标准NaOH溶液滴定，以酚酞作为指示剂，滴定终点由蓝变灰，滴定后算出酸的浓度。利历时大约加水1倍，使最终浓度相当于1mol/L H+酸，此为Folin-酚试剂乙液（Folin试剂）。
在测按时要注意，因为酚试剂仅在酸性条件下稳固，但此实验的反映只在PH值为10的情形下发生，因此当加酚试剂时，必需当即混匀，以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏前即能发生还原反映，不然会使显程度减弱。
三、实验步骤
（一）标准曲线的绘制
1. 取18×200mm试管7支，1～7编号，别离加入0、、、、、、标准蛋白质溶液，用蒸馏水补足1ml，使每管含蛋白量别离为0、2五、50、100、150、200、250μg
／ml。
2. 用定量加样器给每支试管中加入5ml甲液，混匀，于30℃下放置10min。
3. 再向试管中喷射加入乙液，当即振荡混匀，在30℃下准确保温30min。
4. 以不加标准蛋白的1号管为空白，在650nm下用1cm光径的比皿测定吸光度。以标准蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（二）样品的测定
称取鲜样，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，定容25ml过滤，取滤液于试管中，然后重复标准曲线绘制中的2～4步骤，以空白管调零，测定吸光度。依照吸光度查标准曲线，求出样品中的蛋白质含量。
五、结果计算：
样品中蛋白的含量（mg/g）＝C×VT/（Vs×FW×1000）
式中：C－查标准曲线值（μg）；VT－提取液整体积（ml）；FW－样品鲜重（g）；Vs－测按时加样量（ml）
粗蛋白量（％）＝蛋白氮含量×
实验05 植物组织中可溶性糖含量测定（苯酚法）
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 水浴锅；3. 刻度试管；4. 刻度吸管。
（三）试剂：1. 90％苯酚溶液称取90克苯酚（AR），加蒸馏水10ml溶解，在室温下可保留数月；2. 9％苯酚溶液取3ml90％苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用；
3. 浓硫酸（比重）；
4. 1％蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精准称取克。加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；
5. 100μg/L 蔗糖标准液精准吸取1％蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水至刻度。
三、实验步骤
1. 标准曲线的制：向试管内加入1ml9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20S 加入5ml浓硫酸，摇匀。比液整体积为8ml，在室温下放置30min，比。然后以空白为参比，在485nm波长下比，以糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2. 可溶性糖的提取取：取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取～，共3份（或干材料），别离放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于滚水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复漂洗试管及残渣，定容至刻度。
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