网络出版时间：2021-3-635：08网络出版地址：https：//kuski.ueVkcms/561—34.1473.R.20214362.0910.020.html 侵袭性纤维瘤病中CTNNB1基因突变与复发的相关性 陈修文，罗森源，汤显斌，王铁延，王莉，黄育刚
摘要：目的分析CTNNB1基因在侵袭性纤维瘤病中的突变 情况，探讨其与肿瘤复发的相关性。方法回顾性分析2014年~245年十堰市太和医院收治的32例CTNNB1突变阳性侵袭性纤维瘤病，采用免疫组化和PCRWanyer测序法分别检测B-cateuio蛋白表达和CTNNB1基因突变状态，分析侵袭性纤维瘤病局部复发的可能因素。结果32例侵袭性纤维瘤病中女性26例，男性6例；其中5例发生于腹壁45例发生于腹壁外,5例发生于腹腔内及肠系膜。免疫组化标记侵袭性纤维瘤病中B-cateuio的阳性率为84.4%，以核表达为主，部分伴有胞质着。不同CTNNB1基因突变 类型之间B-caten—阳性率差异无统计学意义（P＞4.45）。不同CTNNB1基因突变位点在患者年龄、性别、肿瘤大小、发生部位之间差异均无统计学意义（P均＞4.45）。32例中14例患者首次术后出现复发，单因素生存分析结果显示，CT-NNB1突变位点可能与肿瘤局部复发相关（P＜4.05）o结论CTNNB1基因突变是侵袭性纤维瘤病中较为常见的分子病理事件，不同肿瘤突变位点可能与局部肿瘤复发有关。 关键词：侵袭性纤维瘤病；B wateuio;CTNNB1；复发
中图分类号:R73&1文献标志码：B
文章编号：1041-7369（246543-4337-04
Poi：14.13315/jhi./cep.2021.03.024
侵袭性纤维瘤病又名韧带样型纤维瘤病或韧带样瘤，是一种发生于筋膜、肌腱膜或深部软组织的纤维性肿瘤，由纤维母细胞和肌纤维母细胞过度增生形成。目前认为该病为中间性肿瘤，由于肿瘤周围界限不清，常向周围邻近组织浸润性生长，不易切除干净，极易复发⑴o已有文献报道, Bwateuio蛋白核阳性和CTNNB1基因突变可用于侵袭性纤维瘤病与其它梭形细胞病变的辅助鉴别诊断，而两者与侵袭性纤维瘤病局部复发的关系在国内少见报道。本实验收集32例CTNNB1突变阳性侵袭性纤维瘤病，分析Bwateuio蛋白表达和CTNNB1分子病理改变情况，探讨其与侵袭性纤维瘤病局部复发的联系，为临床评估该疾病复发提供依据。
1材料与方法
1.1材料收集2410年~2019年十堰市太和医院病理科
接受日期：2920-12-5
作者单位：湖北医药学院附属医院十堰市太和医院病理科，十堰442000
作者简介：陈修文，男，硕士，技师。E-mail：hbsycxwU86@U3 汤显斌，男，副主任医师，通讯作者。E-mail：paVv—e@
163ceom 确诊的侵袭性纤维瘤病32例，其中复发病例只纳入第1次术后样本。纳入标准:（1）病灶组织病理学证实为相应的病理类型;（2）所有病例均进行CTNNB1基因突变检测证实为突变阳性;（3）无其他恶性肿瘤病史。排除标准4（）只有细胞病理学（如穿刺细胞学）诊断依据;（2）临床资料不全。所用样本均有至少1名高年资病理医师复片，同时记录临床相关信息，包括发病年龄、性别、肿瘤大小、原发肿瘤部位等，并对所有病例进行随访，记录复发情况。
1.2免疫组化及结果判读所有样本均经14%中性缓冲福尔马林固定、常规脱水、石蜡包埋、3R m厚切片,HE染，显微镜下观察。免疫组化染采用EnVisiou两步法。抗原修复方法为Ttv-TDTA（pH9.0）高压蒸汽修复。所用一抗为鼠抗人B woeum单克隆抗体（UMA4B5，北京中杉金桥公司），以PBS代替一抗作为阴性对照。结果判读参照文献J],B-caten-以细胞核着判为阳性，同时阳性细胞数比例＞14%判读为阳性。
1.3CTNNB1基因突变检测采用FFPE组织DNA提取试剂盒（天根生化北京公司,DP331W0）提取组织样本DNAo 选取肿瘤组织＞34%，肿瘤细胞含量＞200个的蜡块,5p m 厚连续切片6张，放入灭菌EP管中，二甲苯脱蜡后严格按照试剂盒说明书进行操作。使用VeuP/M DX PCR仪扩增CTNNB1基因3号外
显子目的片段，引物由生工生物上海公司合成，上游引物序列5JTCCAATCTACTAATGCTAATACT GTTTCGTA2,，下游引物5"-GCAAAAAGTTTTCCTGTTATC CAW，，长度为308bp。PCR反应体系为0x Rea/Vu Min 10.5pL，上下游引物（（4pM）各1pL,Golden DNA Polymeu ase4.0p L,DNA模板0p L,RNase-free Water&3p L总体系25p Lo扩增条件：95t预变性5m-；25°C34s,60°C34s, 72C45s，共40个循环；最终77C延伸5m-。PCR产物交由生工生物（上海）公司武汉测序部进行测序，测序结果与基因组DNA序列进行比对，参考序列为NM_04544.3。
1.6统计学方法所有数据采用SPSS16.4软件进行统计学分析。对分类资料比较采用X6检验或精确Fcher概率 法；采用局部无复发生存率（Uwai recurreuce free survival, LRFS）评估复发状态，其中生存资料起点为手术日期，终点为术后肿瘤第-次复发时间，生存分析描述采用Kanmb-Meier法，组间比较采用Lopwaoh检验，生存曲线绘制采用Graphpad pUmm。以P＜4.05为差异有统计学意义。
2结果
22临床特征32例侵袭性纤维瘤病中男性7例，女性26
例，男女比为1 : 4.3°年龄4 ~65岁，平均34岁，中位年龄
32岁。肿瘤发生部位：腹壁者U 例，皆为女性，其中4例有
明确剖宫产史9例有阑尾炎手术史；腹腔内及肠系膜者5
例，其中男性3例，女性2例9例有多发子宫肌瘤病史；腹
壁外者U 例，其中男性3例，女性U 例。肿瘤最大径1. 5 -
U cm，平均7. 5 cm，中位数7. 5 cm °随访截至2022年4月
22日，随访时间7~63个月，中位随访时间29个月，平均42
个月，其中7例失访，未失访病例中未出现患者死亡，其中复
发U 例，复发时间在术后7 ~44个月°
2.2病理检查 眼观：肿瘤切面多为灰白，实性质韧，与
周围界限不清（图U °镜检：可见梭形细胞条束状增生，由 纤维母细胞和肌纤维母细胞组成（图2），部分细胞排列也可
呈波浪状（图3），病灶周围可见梭形肌纤维母细胞向周围肌
肉组织穿插，可见多核肌巨细胞（图4 °免疫表型：32例侵
袭性纤维瘤病中B-catein 核阳性病例占84. 4%，多伴有胞 质阳性（图5），部分病例未出现核表达（图7）°
2.3分子检测结果32例CTNNB1突变阳性侵袭性纤维
瘤病中，T41A 21例（图7） ,S45F 4例（图8） ,S45P 4例（图
丽绿刺蛾
1） , S33P 1 例（图 U ） , S33T 合并 G32R 1 例（图 11） ,A39_ G48hei 1例（图U ）°不同CTNNB1突变位点与B-cate/h 蛋
白表达无明显相关性（P>0.05，表1）°同时发现5例B
cate/h 阴性但CTNNB1基因突变阳性病例，其中3例T41A 、 1例S45P 、、例S45F 皆存在不同程度胞质阳性2例出现胞
核阳性，但比例<U%°
2. 2 预后分析 Kaq/n-Meieo 结果显示，不同CTNNB1突变
类型之间LRFS 差异有统计学意义（P <0. 05，图U ），而不同一切的一切
年龄、肿瘤最大径、肿瘤原发部位、Bwate/in 蛋白表达水平中
LRFS 差异无统计学意义（P>0. 05）
表1
侵袭性纤维瘤病中0-catenin 蛋白表达与
CTNNB1基因突变情况
B-chenix n CTNNB ）基因突变
P 值T4)S48 其它突变类型
+
27-
5
U 3
63
5
0.742
2.4 CTNNB1基因突变与侵袭性纤维瘤病临床病理特征
的关系 在侵袭性纤维瘤病中，不同CTNNB1基因突变类型
中患者年龄、性别、发病部位、肿瘤大小差异均无统计学意义
（P 均 >0. 05，表 2）°
表7 CTNNB1基因突变与侵袭性纤维瘤病临床病理特征的关系临床病理
参数n
CTNNB1 基因突变辣椒红素的提取
P 值
T1S45其它突变类型
性别男
6321女26U 6
2/.076
禤沛钧
年龄（岁）
W35
20
11
72
>3512U 110. U5
部位
腹壁12
651腹壁外U U
3
20.012
腹腔内及肠系膜550
肿瘤直径（cm ）
W 5
8
341>524
U
4
2
0. U0
图1韧带型纤维瘤病大体切面呈灰白，实性质韧 图7镜下可见梭形细胞条束状增生 图7梭形细胞呈波浪状排列 图4肿
瘤组织向周围肌组织浸润生长 图5 B-chenix 胞核阳性，同时伴有胞质阳性,EnV/ic 两步法 图6部分病例仅有胞质着,EnVRiou
两步法
图7侵袭性纤维瘤病中CTNNB1基因T41A突变
<
>
划
瞑
峽
代
毎
咆
图13不同CTNNB1突变位点的LRFS曲线
图8侵袭性纤维瘤病中CTNNB1基因S45F突变
130
■._____■■
图9侵袭性纤维瘤病中CTNNB1基因S45P突变
图1侵袭性纤维瘤病中CTNNB1基因S33P突变图1侵袭性纤维瘤病中CTNNB1基因S33T合并G34R突变
人格 最高的学位图11侵袭性纤维瘤病中CTNNB1基因A39_G44del突变
7讨论
侵袭性纤维瘤病是一种发生于深部软组织，以纤维母细胞和肌纤维母细胞增生为主的疾病，伴有Wu信号通路异常激活⑴。P-catevin作为经典Wnt信号通路的关键因子之一，已有文献报道侵袭性纤维瘤病中存在P-caPvW核高表达，同时该现象有助于侵袭性纤维瘤病的诊断和鉴别诊断⑷。但其它研究J-6
］发现P-catevin也可在其它肿瘤，如孤立性纤维性肿瘤、皮肤隆突性纤维肉瘤、子宫内膜间质肉瘤和滑膜肉瘤中岀现一定程度核表达，尤其是需要鉴别诊断的梭形细胞肿瘤（如胃肠道间质瘤，低级别肌纤维母细胞肉瘤等、。因此,p-catevin核表达对于侵袭性纤维瘤病辅助诊断缺乏特异性，仅作为支持性依据。目前针对p-catevin免疫组化判读缺乏公认标准，多数文献以〉D%的肿瘤细胞核着判读为阳性12］，同时采用该标准判读P-catevin的阳性率69.5%〜9）.9%o本实验发现54.0%的侵袭性纤维瘤病中存在P catevin核阳性，同时部分病例伴有胞质着，与文献报道一致。
针对P-catevin免疫组化在侵袭性纤维瘤病辅助诊断中的缺点丄e Guellec等J］针对254例侵袭性纤维瘤病和D5例形态学上易与侵袭性纤维瘤病相混淆的梭形细胞病变，进行CTNNB）基因突变检测，发现85%的侵袭性纤维瘤病中存在CTNNB）基因突变，而其它梭形细胞病变中未发现该基因excw3改变。相较于传统的p-catevin免疫组化检测，CTNNB）基因突变检测具有更好的特异性，结果判读更为准确和客观。侵袭性纤维瘤病中CTNNB）基因突变类型以T41A 最常见，其次为S45F、S45P，同时存在少量罕见突变类型，如T4D、G34A、S37A、S33T+G34A、S45C、D32G等12］。本实验选取CTNNB）突变阳性病例，发现其突变类型的分布与文献报道一致，同时伴有S33P、S33T、A32_G45dU等少见突变类型。近年有学者研究侵袭性纤维瘤病中P-catevin免疫组化检测与CTNNB）基因突变的关系，发现不同免疫组化评判标准对两者的一致性影响较大，当免疫组化以低强度染（核阳性〉1%或D%-为标准时，两者差异无统计学意义［-3］。采用本实验判读标准，不同基因突变
类型中P-catevin免疫组化表达无明显差异，与文献报道一致。同时本实验发现，部分病例CTNNB）突变阳性，而P-catevin免疫组化阴性，该部分病例都岀现不同程度胞质阳性，
考虑这部分病例虽然岀现
CTNNB1基因突变，致使B-cateu-蛋白结构异常，与降解复合物解离，在细胞质中异常累积，但未累积到一定水平，导致并未出现明显转位入核的现象。
侵袭性纤维瘤病中不同CTNNB1基因突变分型与临床病理特征的关系尚存在争议。部分文献发现S45作为一种独立的突变类型，更容易发生在患者腹壁外部位，尤其是四肢末端[64]o Colombo等认为S45突变类型更容易发生在肿瘤直径较大的病例中。而van BroeXPoveu等认为S45与肿瘤大小和发病部位无明确相关性。近期Kwke等-2]对104例侵袭性纤维瘤病研究发现，不同CTNNB1基因分型与患者年龄
、性别、肿瘤大小、发病部位无明显相关性。本组未发现不同CTNNB1基因突变类型与临床病理特征存在相关性，与部分文献报道一致，考虑可能是由于纳入S45突变类型的样本量较低所致。
侵袭性纤维瘤病通常与周围组织界限不清，常浸润至邻近软组织，临床上切除不净极易复发，因此针对侵袭性纤维瘤病肿瘤局部复发的研究具有重要临床价值。有学者认为CTNNB1基因突变型，尤其是S45F突变类型与侵袭性纤维瘤病患者复发密切相关^“5，同时仍有部分学者持相反观点工]o对于罕见突变类型位点如S33、G34等，与侵袭性纤维瘤病复发的关系却少见报道。本组发现不同CTNNB1突变位点之间LRFS存在差异，可能是由于不同位点突变对B cateuio激活程度不一致所致，而Bwatenio异常激活聚集又可以促进肿瘤细胞增殖[8]o相关基础研究也发现存在S45F 突变类型的侵袭性纤维瘤病细胞系更容易出现Bwateuio细胞核聚集现象E]o RePonisson等E]针对肝细胞腺瘤(Pepa-Vcellular adeuomas,HCA)和肝细胞癌(PepaVcellular carciuo-ma,HCC)的研究发现，在HCAHCC中exou3缺失突变和D30-737点突变导致B wateuio高强度激活,T41位点突变导致B-cateuio中等强度激活，虽然S45导致Bwateuio较弱的激活，但由于其等位基因的复制，导致B woeum强表达。
综上所述，本实验结果显示侵袭性纤维瘤病中存在B-cateuiu蛋白异常表达和CTNNB1基因突变等分子病理事件，同时CTNNB1基因突变位点可能是影响局部肿瘤复发的因素。但考虑本组纳入CTNNB1基因突变的样本量较少，计划后续进一步加大样本量进行验证。
参考文献：
[1]WHO classi/catVp of tumonu editoUal boarh.Soft tissue and bone
tumonu[M].5th eb.Lyon：IARC Press,2029：73-95.
[4]Lo Guelloo S,SonPeyran I,Rochain P,et oh CTNNB1mutation
analysis is a useful tool for the diagnosis of desmoik tumors:a study
of269desmoik tumou and161potential mo/Pologio mimics[J].
Moh Pathoi,291445(17)：551-559.
[3]Huss S,Neblos J,B—ct E,et ah BwaVnin(CTNNB1-muta
tions and clinicoyathological features of mesenteric desmoik-tyye fibromatosis[J].Histoyathology,2913,64(7-：204-374.
J]姚伶俐，陈宗科，顾萍，等.韧带样型纤维瘤病55例临床病理分析[]•临床与实验病理学杂志，201844(6-：736-649.
[5]Carlson J W,FleVhes C D M.Immuuohistochemish/for bem-caV-
nin in the diRerextial diagnosis of spinhio cell lesions:analysis of a series and review of the literature[J].Histoyathology,2697,51
(4)：599-514.
[6]新，张彤，沈丹华，等.Bwatexin在纤维瘤病诊断及鉴
别诊断中的作用J]临床与实验病理学杂志，295,29(4)：
438-437.
[7]Koike H,Nishika Y,Kohhc K,et oh Is immuuohistochemicai
staining for BwaVn—the definitive pathologicai diagnosho tool for desmoik-Vyo fibromatosis?A multi-institutional study[J].Hum Pathoi,291944:55-163.
[8]Jilong Y,Jian W,Xiaoyan Z,et ah Analysis of APC/kem-caVnin
氯化镁genes mutations and Wnt signalling pathway in desmoik-tyye fibromatosis[J].Pathology,2097,39(3-：319-325.
[9]Lazar A J,Tuvin D,Hajikashi S,et aO Speci/o mutations in the
B-catexin gexo(CTNNB1-correlate with local recurrence in spc-radic desmoik tumou[J].Am J Pathol:2008.173(5-：1318-
547.
[16]Colombo C,MReli R,Lazar A J et ah CTNNB145F mutation C
a mcgecular proghosticatcs of increased postoperative p/ma/des-
moik tumor recuv'ence:an—Pepexhext,multyextos valikation study[J].Cancer,2013,116(20-：5796-3774.
[11]van BroePkovex D L,Verhoef C,GrUnhagex D J,et ah Proghostio
value of CTNNB1gexo mutation in p/ma/syoradic aggressive fibromatosis[J].Ann Sura Oncol,2013,24(5)：1494-1477. [14]Mullen J T,DePanep T F,Rosexbera AE,eh hO BwaVnin muta
tion status and onVomos in syoradic desmoik tumors J].Oncologist,2013,5(9)：1043-1049.
[5]Nusso R,Clevers H.Wnt/B-catexin signaling,disease,and emer
ging the/nexVo mohalities[J].Cell,2017,169(6-：985-999. [14]Hamada S,Uradawa H,Kozawa E,et aO CharacteUs/cr of cui-
tureb desmoik cells with PiRerext CTNNB1mutation status[J].
Cancer Med,2910,5(4-：534-369.
[5]RePonisson S,Franconi A,Calderaro J,et aO GexoVpe-pPexe-
tyyo cowelatVn of CTNNB1mutations reveals PiRerext B-catexin
activity associated with lives tumor progressioh[J].Hepatology,
201664(6)：2047-2061．
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议