摘要：植物病毒能影响植物的生长和发育，降低作物的产量和质量。利用草莓茎尖为材料，以茎尖培养结合低温保存方法脱毒来进行草莓脱毒研究日益成为一种有效快速可取的方法。研究表明离体茎尖在培养基上分化不定芽较好，采用玻璃化法超低温保存技术保存带有病毒的草莓茎尖，再生后植株能达到较高的脱毒率。 关键词：超低温保存；玻璃化法；草莓茎尖；脱毒
陈仁炳草莓是蔷薇科属多年生草本植物，一般采用营养繁殖，感染病毒便会世代相传，导致果实品质变劣，产量严重下降。世界上已知的草莓病毒有20多种，我国常见的有4种，即草莓轻型黄边病毒、草莓斑驳病毒、草莓皱缩病毒、草莓镶脉病毒。单一病毒感染时一般不表现症状，几种病毒复合侵染时，植株表现明显的矮小弱化，株高、叶面积、叶柄长度等明显降低，平均单果质量小，含糖量低，风味差，储存和运输性能下降。
1 低温脱毒原理
低温脱毒是基于超低温保存对细胞的选择性破坏的原理，结合组织培养和病毒检测技术达
到脱毒的目的，超低温保存是指在-80℃以下的超低温保存种质资源的一整套生物技术，常用的冷源有干冰和液氮。现在常用液氮做冷源。超低温保存的原理是在超低温条件下，含有病毒的顶端细胞液泡含水量较大，在超低温保存的过程中易被形成的冰晶破坏致死，而增殖速度较快的分生组织含水量少，不易被冻死，这样经过超低温处理过的植株再生后可能就是无病毒的。 清江论坛2材料和方法
2.1 材料
本实验以草莓匍匐茎为材料，截取3㎝-4㎝长的顶端经常规灭菌后，材料接种于MS诱导培养基上培养，然后以初代培养的材料进行继代，超低温保存材料也是由此继代的材料。
2．2 官谣方法
2.2 1材料预处理
取草莓再生芽，在超净工作台上分成单芽后，接种到MS附加0.5mol/L蔗糖的培养基上预培
养电影与国家形象3天然后在解剖镜下剥取茎尖约1mm左右，将该茎尖放在脱水剂（MS+甘油2mol/L+蔗糖）中处理。设蔗糖浓度和处理时间为变量，蔗糖浓度取 0.3 mol/L、 0.4 mol/L 、0.5 mol/L 、，时间分别取30min、40min、50min，相同变量下做三份材料，共做27个处理材料，做好标记。
2.2 2 超低温处理
相同变量材料用液氮处理，分别保存40min,60min,80min哈尔滨电视台都市零距离,然后经30℃、40℃、50℃解冻，共做81分材料。
2.2 3 接种诱导生芽
在其他条件不变的情况下，以6-BA,IAA的浓度为变量，在超净工作台上进行无菌接种培养，研究培养最佳条件。
2.3 病毒检测
利用植物指示法来检测病毒情况，将培养好的材料切取一段叶柄嫁接在指示植物上，培养一段时间后观察脱病毒情况。
附：
1 常规脱毒法：将顶芽用自来水冲洗长江大学学报30s，在超净工作台上用75%酒精浸泡30s，0.1%浸泡5~8min,无菌水冲洗4~5次。
2 液氮罐使用注意事项： 使用前进行检查液氮罐在充填液氮之前，首先要检查外壳有无凹陷，真空排气口是否完好。若被碰坏，真空度则会降低，严重时进气不能保温，这样罐上部会结霜，液氮损耗大，失去继续使用的价值。其次，检查罐的内部，若有异物，必须取出，以防内胆被腐蚀。
液氮的充 填充液氮时要小心谨慎。对于新罐或处于干燥状态的罐一定要缓慢填充并进行预冷，以防降温太快损坏内胆，减少使用年限。充填液氮时不要将液氮倒在真空排气口上，以免造成真空度下降。盖塞是用绝热材料制造的，既能防止液氮蒸发，也能起到固定提筒的作用，所以开关时要尽量减少磨损，以延长使用寿命。
使用过程中的检使用过程中要经常检查。可以用眼观测也可以用手触摸外壳，若发现外表挂霜，应停止使用；特别是颈管内壁附霜结冰时不宜用小刀去刮，以防颈管内壁受到破坏，造成真空不良，而是应将液氮取出，让其自然融化。
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