文章编号：（）
董淑英，位绍文，孙静，于秋华，李梅
（青岛农业科学研究所，山东青岛）
摘要：利用茎尖培养、茎尖培养与热处理相结合、二次取尖等方法进行苹果脱毒技术研究。结果表明，茎尖大小对分化率和脱毒率有很大的影响；并且发现不同品种适宜分化培养基不同，长富在上分化率高，而早乔纳金在培养基上分化率较高。热处理能显著降低苹果茎尖分化率，长富茎尖分化率比对照低，早乔纳金比对照低；但热处理能大幅度提高脱毒率，长富茎沟病毒（）脱毒率提高，褪绿叶斑病毒（）脱除率提高；早乔纳金茎沟病毒脱除率提高，褪绿叶斑病毒脱除率提高。对长富和早乔纳金脱毒试管苗二次取尖，小茎尖（!）的脱毒率提高了，大茎尖（!，"）的脱毒率提高了!；二次取尖对分化率的影响因品种而异，对长富的茎尖分化率影响较大，二次取尖分化率降低了。 关键词：苹果；脱毒；茎尖培养；热处理；分化
中图分类号：文献标识码：
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众所周知，苹果病毒病严重影响果品的质量和产量。据报道，在我国不同地区造成的减产达到!左右［!］。常规脱毒技术是取旺长新梢的茎尖进行培养，以获取无毒苗［，］。在茎尖培养中，要获得较高的脱毒率，需要取较小的茎尖，操作难度较大，其分化率又太低［］。为了提高脱毒率，降低取尖难度，我们将材料热处理后剥茎尖进行培养，再对苹果脱毒试管苗进行二次取尖处理，以期
莱阳农学院学报（）：!，
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收稿日期：
作者简介：董淑英（），女，山东招远人，大学本科，助理研究员，现主要从事于马铃薯脱毒研究与开发工作。
通过这两种方法，可取较大茎尖，并可获得较高的分化率和脱毒率。在苹果脱毒试管苗木质化到一定程度，即可进行二次脱毒，避免了大田取材需要灭菌、污染率高的缺点，并可取较大的茎尖进行培养，降低操作难度，取得了较好的效果。
材料与方法
试验材料
试验品种为长富和早乔纳金。一次取茎尖直接由试验田取材，二次取尖材料为生长健壮的脱毒试管苗，木质化程度较高。热处理则取处理后长出的新梢进行茎尖培养。
试验方法
热处理在温室进行。将盆栽的试验材料摆放整齐，四周架起竹竿，拉上电热线，与继电器连接控制温度，然后用塑料薄膜扣棚。温度控制在左右，处理周。取热处理后长出的新梢剥茎尖培养。
从试验田或温室取旺长新梢!，带回实验室进行常规灭菌，然后在立体显微镜下剥取茎尖。二次取茎尖时，在培养室挑选已经脱毒的生长健壮试管苗，在强光下闭瓶炼苗!天，增加其木质化程度。在无菌条件下取出，进行二次脱毒。
茎尖大小
茎尖培养和二次脱毒取茎尖大小相同，!，!，!。热处理取茎尖大小为!。
培养基
／／
／／
／（为水解酪蛋白）
以上培养基加蔗糖／，琼脂／，调至!，在高压灭菌。
培养条件
培养室每层培养架用支日光灯照明，光强为!，光照时间为／，温度保持在。培养容器为直径的培养皿。
每皿接种个茎尖。接种茎尖的培养皿覆盖层报纸。
病毒检测
采用酶联免疫和指示植物双重芽接法进行病毒检测［，］。酶联免疫法用茎尖增殖的试管苗进行检测，血清购自中科院微生物所；指示植物双重芽接法使用移栽成活的茎尖苗，指示植物为俄罗斯苹果、光辉、弗吉尼亚小苹果、君袖。每种处理检测个茎尖株系。检测病毒：苹果茎沟病毒（）、苹果褪绿叶斑病毒（）。
结果与分析
常规茎尖培养
人脸识别atm问世
天弩无人机茎尖大小和培养基对苹果分化率的影响茎尖大小对苹果茎尖分化的影响达极显著水平。茎尖越大，茎尖越容易成活，分化率就高；茎尖小，不容易成活，分化率明显降低。长富和早乔纳金表现出同样的规律，!茎尖分化率均极显著高于!茎尖的分化率，而
!茎尖的分化率均显著高于!
茎尖的分化率。
培养基对茎尖分化的影响极为显著。长富
不同大小的茎尖在上分化率均极显著高于上分化率，高出分化率!，差异显著；而早乔纳金正与其相反，茎尖在上分化率均高出分化率!，差异显著。试验结果表明，品种不同，茎尖分化培养基也不同。
不同品种各有其适宜分化培养基（见表）。长富适于在培养基上分化，同样大小的茎表茎尖大小和培养基对苹果茎尖分化的影响
品种
茎尖大小
（）
分化率
环球华报（）
分化率
（）长富!
!
!
早乔纳金!
!
!
注：方差分析采用法，大小写字母分别表示"、"
显著水平（下同）。
空间光调制器尖，在上分化率显著高于在上分化率，!
茎尖分化率高达，而在上分化率仅有，差异极为显著。而早乔纳金则适于在培养基上分化，相同大小的茎尖，在上分化率均极显著高于；在培养基，!
茎尖的分化率最高，达，而在上最高为；!茎尖在上分化率比
高；!茎尖分化率高出。由此可知，长富的适宜分化培养基为，早乔纳金为。
期董淑英，等：苹果脱毒方法的比较研究
茎尖大小对苹果脱毒率的影响
茎尖大小对脱毒率的影响即：脱毒率与茎尖大小成反比。茎尖小，脱毒率高；随着脱毒茎尖的增大，脱毒率逐渐降低，这与韩礼星的结果是一致的［］。!的茎尖，（褪绿叶斑病毒）脱除率达，（茎沟病毒）脱除率达
!；!的茎尖，脱毒率为!，仅有，而!的茎尖，脱毒率只有!。从以上试验结果可知，比容易脱除。相同大小的茎尖，的脱除率均高于!个百分点（表）。
表茎尖大小对苹果脱毒率的影响
品种茎尖大小
（）
脱除率
（）
脱除率
（）
长富!
!
!
早乔纳金!
!
!
二次取茎尖培养
二次取尖对苹果分化率的影响
由表可知，随着脱毒茎尖的增大，分化率逐渐升高，长富和早乔纳金表现出相同的规律，但二者又不
完全相同。同样大小的茎尖，长富的分化率均高于早乔纳金。取小茎尖（!），长富的分化率为，而早乔纳金仅有；!茎尖，长富的分化率达
，早乔纳金为，二者相差以上。二次脱毒的茎尖分化率低于第一次脱毒的分化率。取小茎尖（!），长富一次取尖的分化率为，二次取尖分化率为，二次取尖分化率降低；大茎尖二次脱毒分化率为，比一次取尖低。而早乔纳金一次取茎尖和二次取茎尖的分化率差异因茎尖大小而不同，小茎尖分化率差异小，大茎尖分化率差异大。小茎尖（!）一次脱毒分化率比二次脱毒高，!茎尖分化率高，
茎尖分化率高。试验结果表明，二次取尖脱毒的分化率均低于一次取尖，并且因品种和茎尖大小的不同，分化率差异也不同。
二次取尖对苹果脱毒率的影响
二次取尖的脱毒率高于一次取尖，但个品种间有差别。二次脱毒，取小茎尖（!），长富的脱除率即达，早乔纳金也达，都比一次取尖的脱毒率提高；个品种的一次取尖即达的脱毒率；!
茎尖，个品种二次取尖的脱毒率提高!，长富的脱毒率提高，早乔纳金仅仅提高；!的大茎尖，二次脱毒的和脱除率均提高!。
表二次取尖对苹果分化率和脱毒率的影响
南京雾霾天气
品种茎尖大小
（）
一次取尖
分化率（）
二次取尖
分化率（）
脱除率（）脱除率（）
一次取尖二次取尖一次取尖二次取尖
长富!
!
!早乔纳金!
!
!
从以上试验结果可以看出，不管是一次脱毒还是二次取尖，取小茎尖虽然分化率低，但能显著提高脱毒率。同样大小茎尖，二次取尖降低分化率，脱毒率能提高以上。因此，为了获得较高的分化率和脱毒率，可以进行脱毒试管苗的二次取尖，以简化操作程序，可取较大茎尖!，两种病毒都可获得以上的脱毒率。
热处理对苹果脱毒的影响
热处理对苹果茎尖分化的影响
热处理和对照（不进行热处理）同取!
大小的茎尖。从表可以看出，热处理对茎尖分化率的影响很大。热处理能显著降低茎尖分化
莱阳农学院学报卷
率，在长富和早乔纳金两个品种上表现出相同的规律。长富热处理后剥取的茎尖分化率只有，而对照的茎尖分化率达，热处理后茎尖分化率降低了，差异达极显著；早乔纳金对照的茎尖分化率达，热处理比对照降低了，差异也达到极显著水平。
热处理对苹果茎尖脱毒率的影响
热处理虽然极显著降低了苹果茎尖分化率，但能大幅度提高脱毒率（见表）。热处理比对照的脱毒率提高!，脱毒率提高
!，在两个品种间差别不大。
表热处理对苹果茎尖分化率和脱毒率的影响
品种处理分化率
脱除率脱除率长富热处理
早乔纳金热处理
热处理后茎尖的无病毒区增大，取较大茎尖即可获得较高的脱毒率，这样就可以避免因取小茎尖而带来的操作不便，从而提高工作效率。热处理后取!的茎尖，脱毒率可达到
以上。
小结
）苹果茎尖脱毒实验表明，茎尖分化率与茎尖大小成正比，脱毒率与茎尖大小成反比。茎尖越大，分化率越高，脱毒率越低；茎尖小，分化率虽然降低，脱毒率却明显提高。品种和培养基对茎尖分化也有影响。要想获得较高的脱毒率，必须取小茎尖（!）。
）热处理的茎尖分化率低于未经热处理的茎尖，并且差异显著。同样大小的茎尖，热处理后取较大茎尖（!）培养，脱毒率提高幅度在!，差异达到极显著水平，并且这种差异显著性与品种无关。苹果热处理后，可取较大的茎尖进行培养，从而降低取尖难度，提高工作效率，脱毒率在以上。
）苹果脱毒试管苗二次取尖的茎尖分化率有所降低，降低幅度因品种和茎尖大小有所差异。二次取尖能大幅度提高脱毒率，提高幅度与品种、茎尖大小和病毒种类有关。二次取尖可取较大茎尖（!）培养，省去了材料消毒这一步，既降低了成本，又简化了操作步骤，降低了工作难度，脱毒率达到以上，在实践中有很高的实用价值。
）热处理和二次取尖都可取较大茎尖!
培养，能大幅度提高脱毒率，但二者相比较来说，二次取尖操作起来要比对材料进行热处理简单的多。它不需要进行热处理的场所，材料所占体积也小，也无须对材料进行消毒，因此，二次取尖比对材料进行热处理有更高的实践应用价值。
参考文献：
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透解祛瘟颗粒获批临床使用［］王国平，刘福昌苹果病毒病害研究进展［］农牧情报研究，，（）：
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［］王国平，等几种木本指示植物对苹果潜隐病毒敏感性的研究［］北方果树，（）：
［］洪霓，等蛋白酶联法检测苹果褪绿叶斑病毒和茎沟病毒的研究［］中国果树，，（）：
期董淑英，等：苹果脱毒方法的比较研究
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