杨宇石;石玉;郑美娟;冉立;毛大华;陈腾祥;钟愉;徐澍
【摘 要】目的 探讨乳腺癌中乙酰化转移酶P300和H3 K56乙酰化(H3 K56 ac)蛋白表达与新辅助化疗及临床病理特征的相关性.方法 应用免疫组化EnVision法检测57例乳腺癌组织化疗前、后及30例乳腺纤维腺病组织中P300和H3 K56ac的表达.结果 乳腺纤维腺病中P300和H3 K56 ac高表达率均高于化疗前乳腺癌组织(P＜0.05).化疗前P300表达与分子分型和肿瘤大小差异有显著性(P＜0.05),HER-2阳性乳腺癌中P300高表达率较高(P＜0.05),P300低表达时肿瘤直径较大(P＜0.05).化疗前P300表达与5年生存率差异有显著性,P300低表达提示预后较差(P＜0.05).化疗前后H3 K56 ac表达与乳腺癌临床病理特征差异无显著性(P＞0.05);化疗后H3K56ac和P300高表达率显著高于化疗前(P＜0.05);化疗前后两者蛋白表达均无明显相关性(P＞0.05).结论 化疗前P300低表达时乳腺癌预后较差,可作为评估预后的风险因素.
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2018(034)007
【总页数】5页(P747-751)中国职业经理人认证
【关键词】乳腺肿瘤;乙酰化转移酶P300;乙酰化H3K56蛋白;新辅助化疗
【作 者】杨宇石;石玉;郑美娟;冉立;毛大华;陈腾祥;钟愉;徐澍
【作者单位】贵州医科大学病理学教研室,贵阳550000;贵州医科大学病理学教研室,贵阳550000;贵州医科大学病理学教研室,贵阳550000;贵州医科大学病理学教研室,贵阳550000;贵州医科大学病理学教研室,贵阳550000;贵州医科大学病理学教研室,贵阳550000;贵州医科大学病理学教研室,贵阳550000;贵州医科大学病理学教研室,贵阳550000
【正文语种】中 文
【中图分类】R737.9
近年乳腺癌发病率呈逐年上升趋势，根据中国癌症协会统计2015年乳腺癌发病率位居女性好发肿瘤的第1位，病死率为第5位[1]。研究表明，恶性肿瘤可能是由遗传和表观遗传异常改变共同引起的疾病。表观遗传学修饰不同于基因突变，它不影响基因的序列，而是通过
改变基因转录的过程达到影响基因功能的作用[2]。表观遗传学修饰包括DNA甲基化、组蛋白乙酰化等。表观遗传学的异常改变常与肿瘤有关，因而与表观遗传学相关的蛋白可能具有潜在的临床诊疗和预后评估价值。P300属于乙酰化转移酶，在哺乳动物中被发现，可激活下游组蛋白发生乙酰化，已有研究发现P300参与调控细胞增殖、凋亡、分化、细胞周期和DNA修复[3]。H3K56乙酰化(H3K56ac)蛋白最先在酵母中被发现，H3K56可被P300催化后形成H3K56ac参与基因转录、DNA复制、DNA损伤修复以及避免表观遗传学沉默的功能[4]。目前，有关P300、H3K56ac的表达与乳腺实体肿瘤临床病理特征的关系尚未见报道。本实验旨在检测化疗前后乳腺癌组织中P300、H3K56ac的表达，分析两者在乳腺癌中经过化疗药物后表达的改变，初步探讨两者在乳腺癌中生物学功能及与临床病理特征的关系。
1 材料与方法
1.1 临床资料 随机选取2008～2010年贵州医科大学附属医院病理科存档的乳腺癌患者化疗前后蜡块57例，其中48例患者有复发转移资料。选择30例不伴乳腺导管增生性病变的乳腺纤维腺病为对照组，提取存档HE切片，按WHO(2012)乳腺病理学和遗传学分类标准经两
位乳腺病理主任医师采用双盲法进行诊断，结果显示患者均为乳腺浸润性导管癌并分级[4]。患者均为女性，年龄30～70岁，平均48岁，中位年龄47岁。其中Luminal A型12例(ER/PR阳性，且PR阳性率>20%，HER-2阴性，Ki-67增殖指数<20%)，Luminal B样HER-2阴性型11例(ER/PR阳性，且PR阳性率<20%，Ki-67增殖指数>20%，HER-2阴性)，Luminal B样HER-2阳性型16例(ER/PR阳性，HER-2阳性)，HER-2阳性型31例(ER和PR均阴性，HER-2阳性)，三阴型3例(ER、PR、HER-2均阴性)，分子分型根据乳腺癌St.Gallen共识进行。HER-2阳性患者均使用赫赛汀。
1.2 方法 兔抗人多克隆抗体P300(浓度1 ∶1 000)、H3K56ac(浓度1 ∶100)均购自Abcam公司，免疫组化染采用EnVision法。切片经脱蜡脱水后，柠酸盐(pH 6.0)高温高压修复3 min，PBS冲洗后封闭，一抗孵育过夜，复温40 min后PBS冲洗3次×3 min，二抗37 ℃ 孵育1 h(上海基因公司)，PBS冲洗后DAB显5 min，PBS代替一抗为阴性对照，苏木精复染后封固。
1.3 结果判断 P300和H3K56ac蛋白的细胞核中呈棕黄颗粒为阳性。根据P300和H3K56ac蛋白染强度进行计分：无着为0分、浅黄为1分、棕黄为2分、棕褐为3
分。根据细胞阳性率进行计分：1%～25%为1分、26%～50%为2分、51%～75%为3分、>75%为4分。两者得分相乘作为免疫组化结果评分(immunoreactive score, IRS)。根据IRS评分，将IRS≤8分判读为低表达组，≥9分者为高表达组[5]。
1.4 统计学分析 使用SPSS 22.0软件对所有数据进行统计学分析；使用χ2检验分析P300和H3K56ac表达与临床病理特征的关系；使用Spearman法分析化疗前后P300和H3K56ac表达的相关性；利用Kaplan-Meier法分析化疗前后P300及H3K56ac表达与预后的相关性；以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
杜香油2.1 P300、H3K56ac在乳腺癌及乳腺纤维腺病中的表达 P300在乳腺纤维腺病中高表达率为67.0%，高于化疗前乳腺浸润性导管癌中高表达率(29.8%)，差异有显著性(P<0.05，图1、2)。H3K56ac在乳腺纤维腺病中高表达率为57.0%，高于化疗前乳腺浸润性导管癌中的高表达率(15.7%)，差异有显著性(P<0.05，图3、4)。
武汉职业技术学院图书馆2.2 P300、H3K56ac表达与乳腺癌化疗前后的关系 P300在乳腺浸润性导管癌中化疗前高
表达率为29.8%，化疗后高表达率为59.6%，差异有显著性(P<0.05)。H3K56ac在乳腺浸润性导管癌中化疗前高表达率为15.7%，化疗后高表达率为47.4%，差异有显著性(P<0.05)。
东风烈
①②③④图1 乳腺纤维腺病中P300的表达，EnVision法 图2 乳腺癌中P300的表达，EnVision法 图3 乳腺纤维腺病中的H3K56ac表达，EnVision法 图4 乳腺癌中H3K56ac的表达，EnVision法
2.3 P300表达与乳腺癌临床病理特征的关系 化疗前后P300表达与患者月经状态、病理分级、淋巴结转移、复发转移，差异无显著性(P>0.05)。化疗前P300高表达率与分子分型差异有显著性，HER-2阳性型乳腺癌中P300高表达率高于其他分子分型(P<0.05)，化疗前P300表达状态与肿瘤大小差异有显著性，P300低表达时肿瘤直径较大(P<0.05，表1)。
2.4 H3K56ac表达与乳腺癌临床病理特征的关系 化疗前后H3K56ac表达与乳腺癌临床病理特征差异无显著性(P>0.05，表1)。
pubmed数据库2.5 P300与H3K56ac表达的相关性 化疗前P300和H3K56ac表达无明显相关性(r=0.138，P>0.05)，化疗后P300和H3K56ac表达无明显相关性(r=0.207，P>0.05)。
2.6 P300和H3K56ac表达与乳腺癌预后的关系 应用Kaplan-Meier法分析化疗前后P300、H3K56ac表达与乳腺浸润性导管癌患者预后的关系，结果显示：化疗前P300表达与患者5年生存率有关，P300低表达患者预后较差，P300高表达患者预后较好(P<0.05，图5)；化疗后P300及化疗前、后H3K56ac表达与患者预后均无关(P>0.05，图6～8)。
麦双尾蚜表1 P300、H3K56ac表达与乳腺癌临床病理特征的关系[n(%)]临床病理参数P300(化疗前)低表达高表达P值P300(化疗后)低表达高表达P值H3K56ac(化疗前)低表达高表达P值H3K56ac(化疗后)低表达高表达P值组织学分级 Ⅰ7(17.5)2(11.8)3(13.0)6(17.6)8(16.7)1(11.1)5(16.7)4(14.8) Ⅱ24(60.0)11(64.7)0.86216(69.6)19(55.9)0.50029(60.4)6(66.7)0.90617(56.7)18(66.7)0.713 Ⅲ9(22.5)4(23.5)4(17.4)9(26.5)11(22.9)2(22.2)8(26.6)5(18.5)肿瘤直径(cm) ≤29(22.5)9(52.9)6(26.1)12(35.3) 15(31.3)3(33.3)11(37.0)7(25.9) >2,<521(52.5)3(17.6)0.0310(43.5)14(41.2)0.72821(43.8)3(33.3)0.81610(33.4)14(51.9)0.367 ≥510(25.0)5(29.5)7(30.4)8(23.5)12(25.0)3(33.3)9(29.6)6(22.2)淋巴结转移 无10(25.0)4(23.5)0.9068(36.8)6(17.6)0.14011(22.9)3(33.3)0.5058(26.7)6(22.2)0.697 有30(75.0)13(76.5)15(65.2)28(82.4)37(77.1)6(66.7)22(73.3)21(77.8)分子分型 Luminal A型1
2(30.0)0(0.0)0.0048(34.8)4(11.8)0.19110(20.8)2(22.2)0.4876(20.0)6(22.2)0.545 Luminal B 样HER-2阴性型10(25.0)1(5.9)4(17.4)7(20.6)10(20.8)1(11.1)5(16.6)6(22.2) Luminal B 样HER-2阳性型10(25.0)6(35.3)5(21.7)11(32.4)12(25.0)4(44.4)8(26.7)8(29.6) HER-2阳性型6(15.0)9(52.9)6(26.1)9(26.4)13(27.1)2(22.2)8(26.7)7(26.0) 三阴型2(5.0)1(5.9)0(0.0)3(8.8)3(6.3)0(0.0)3(10.0)0(0.0)月经 未绝经13(32.5)5(31.2)0.8199(39.1)9(26.5)0.31316(33.3)2(22.2)0.51010(33.3)8(29.6)0.904 绝经27(67.5)12(68.8)14(60.9)25(73.5)32(66.7)7(77.8)20(66.7)19(70.4)复发与转移 有11(32.4)1(7.1)0.0816(35.3)6(19.4)0.37912(30.0)0(0.0)0.1746(23.1)6(27.3)0.915 无23(67.6)13(92.9)11(64.7)25(80.6)28(70.0)8(100.0)20(76.9)16(72.7)
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