GS、E-cadherin和β-catenin在肝细胞癌中的表达及其临床意义 周新木;陈丽荣
【摘 要】目的 探讨谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase GS)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和β-连环蛋白(β-catenin)在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 采用免疫组织化学Envision法检测182例肝细胞癌和92例癌旁肝组织中GS、E-cadherin和β-catenin的表达情况,并分析其与临床病理特征和预后的关系.结果 GS在肝细胞癌阳性表达率为77.5％,明显高于癌旁肝组织(4.3％),差异显著(P＜0.05)；肝细胞癌E-cadherin和β-catenin异常表达率分别为59.3％和58.8％,亦高于癌旁肝组织(30.4％和26.1％),差异显著(P＜0.05).肝细胞癌中GS的表达与TNM分期、转移和术后复发显著相关(P＜0.05)；E-cadherin和β-catenin异常表达与脉管内瘤栓、TNM分期、转移和术后复发显著相关(P＜0.05).肝细胞癌中GS表达与E-cadherin、β-catenin异常表达正相关.结论 肝细胞癌中GS的高表达,与E-cadherin和β-catenin表达的下调,可能是肝细胞癌侵袭和转移的重要机制之一,联合检测GS、E-cadherin和β-catenin可能有助于判断肝细胞癌的恶性程度、转移潜能及预后分析.%Objective To investigate the expression of glutamine synthetase(GS), E-cadherin and β-catenin in hepat 寻明胜
ocellular carcinoma and its relation to clinicopathological characterisitics and prognosis. Methods With the method of immunohistochemical Envision, the expressions of GS, E-cadherin and β-catenin were examined in 182 cases of hepatocellular carcinoma and 92 cases of adjacent non-neoplastic liver tissue. We then analyzed their relations to the clinicopathological data of hepatocellular carcinoma. Results In the hepatocellular carcinoma group,77. 5% samples expressed GS, significantly higher than in surrounding liver tissue (4. 3% P<0. 05). The expression of GS was positively correlated with TNM stage, tumor metastasis and recur-rence(P<0. 05). In hepatocellular carcinoma, aberrant expression of E-cadherin and β-catenin was 59. 3% and 58. 8% respectively, higher than in adjacent non-neoplastic liver tissue ( 30. 4% and 26. 1%, P<0. 05) . Aberrant expression of E-cadherin and β-catenin was related to vascular cancer embolus, TNM stage,tumor metastasis and recurrence(P<0. 05). The expression of GS correlated with aberrant expression of E-cadherin and β-catenin in hepatocellular carcinoma. Conclusion The overexpression of GS, E-cadherin and β-catenin may be important mechanisms which promote the invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma . Combined dete
ction of GS, E-cadherin and β-catenin may be helpful to judge the degree of malignancy and potential metastasis, and to evaluate the prognosis.
【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》
【年(卷),期】2013(022)002
【总页数】5页(P140-144)
【关键词】肝细胞癌;谷氨酰胺合成酶;E-钙粘蛋白;β-连环蛋白;免疫组织化学
【作 者】阿魏酸钠周新木;陈丽荣
【作者单位】浙江大学医学院附属第二医院病理科,杭州321000
【正文语种】中 文
【中图分类】R735.7
肝细胞癌是常见、高发的恶性肿瘤之一，在我国已经成为恶性肿瘤的第2位的杀手。由于肝
细胞癌易转移及复发，预后差，如何能在肝细胞癌尚未出现转移前及早预测、诊断，并及时采取有效措施就成为能否进一步提高肝细胞癌效果的关键。本研究采用免疫组织化学Envision法检测谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase GS）、E－钙粘蛋白（E－cad－herin）和β－连环蛋白（β－catenin）在肝细胞癌中的表达情况，探讨其与肝细胞癌临床病理及预后的关系。
材料和方法
1．一般资料
收集浙江大学医学院附属第二医院和浙江省丽水市中心医院2001年1月－2011年12月行肝细胞癌手术切除标本182例，及其相应的癌旁肝组织标本92例。全部病例均经手术和病理证实，术前均未行放疗或化疗，具有完整的病理资料。所有标本均经40g／L缓冲中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片。182例病例中男性143例，女性39例；年龄32－87岁，中位年龄58岁；肿瘤最大径＜5cm 125例，肿瘤最大径≥5cm 57例；高分化（Edmonson分级1－2）81例，低分化（Edmonson分级3－4）101例；脉管内瘤栓定义为HE组织切片检查于血管或淋巴管内见癌细胞者，有脉管内瘤栓55例，无脉管内瘤栓127例；
宪政经济学TNM分期Ⅰ和Ⅱ期117例，Ⅲ和Ⅳ期65例；肝外转移29例（肺15例，椎体10例，肋骨2例，肾上腺1例，脑1例），肝内转移12例，无转移141例；术后复发75例，术后无复发107例。
2．试剂
鼠抗人GS单克隆抗体（clone GS－6）购自美国Chemicon International Inc．公司。即用型免疫组化EnVision试剂盒（试剂盒号87－8963SuperpictureTM 3rd Gen IHC Dettion Kit）购自北京中杉公司。即用型鼠抗人E－cadherin（clone MAB－0589）和即用型鼠抗人β－catenin单克隆抗体（clone CAT－5H10）均购自福州迈新公司。
3实验方法
采用免疫组织化学EnVision二步法，石蜡切片经脱蜡，梯度酒精水化后，抗原热修复，用3%双氧水室温孵育20min，消除内源性过氧化物酶的活性，pH7．2磷酸盐缓冲液冲洗，加入一抗（GS 1∶450；E－cadherin 1∶50；β－catenin 1∶50），37℃恒温水箱孵育1h，PBS冲洗，滴加EnVisionTM通用型二抗50μl，置于37℃恒温水箱孵育25－30min。DAB显，
苏木素复染，封片，镜检。所有抗体阴性对照以PBS代替第一抗体。E－cadherin和β－catenin抗体阳性对照选择已知阳性标本为对照。
4．结果判断奉化市锦屏中学
小朵朵和大魔法师GS结果判断：GS阳性表达定位于细胞质，呈棕黄颗粒着。采用二级计分法，首先按染强度评分：无为0分，淡黄为1分，棕黄为2分，棕褐为3分；然后按阳性细胞率评分：肿瘤细胞内无阳性染者为0分，阳性细胞率＜10%为0分，10%－25%为1 分，＞25%－50%为2分，＞50%－75%为3分，＞75%为4分。将二者相加得综合免疫组化评分：≤3分为阴性，＞3为阳性。E－cadherin和β－catenin结果判断：于肿瘤细胞质或细胞核表达≥10%，称为异位表达；不表达或细胞膜表达＜10%称为细胞膜表达缺失；异位表达和细胞膜表达缺失统称为异常表达，单纯细胞膜表达为正常表达［1］，异常表达为阳性，正常表达为阴性。免疫组化结果由两位病理医师采用双盲法读片评定。
5．统计学方法
采用SPSS16．0软件进行数据分析。两样本率的比较采用四格表资料的χ2检验；多样本率
的比较采用行χ列表资料的χ2检验；参数间的相关性采用Spearman等级相关分析。以P＜0．05为有显著性差异。
结 果
1．肝细胞癌和癌旁肝组织中GS、E－cadherin、β－catenin的表达
舒曼童年情景GS在肝细胞癌细胞中呈棕黄颗粒，主要定位于细胞质（图1），阳性表达率为77．5%；癌旁肝组织表达率为4．3%，差异显著（P＜0．05）。E－cadherin和β－catenin在癌旁肝组织呈棕黄颗粒，定位于细胞膜，异常表达率分别为30．4%和26．1%；肝细胞癌中则主要表现出不同程度的细胞质和或细胞核显（图2，3），而细胞膜的显减少，表现为异位表达和表达缺失，异常表达率分别为59．3%和58．8%，与癌旁肝组织差异显著（P＜0．05）（表1）。
2．肝细胞癌 GS、E－cadherin、β－catenin表达与临床病理参数之间的关系
GS在肝细胞癌TNM分期Ⅲ＋Ⅳ组的阳性表达率明显高于Ⅰ＋Ⅱ组，差异显著（P＜0．05）；GS在肝外和肝内转移组中阳性表达率高于无转移组，差异显著（P＜0．05）；GS
在术后有复发组中阳性表达率高于术后无复发组，差异显著（P＜0．05）；而与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度和脉管内瘤栓无关（P＞0．05）。E－cadherin和β－catenin异常表达与脉管内瘤栓、TNM分期、转移和术后复发相关，差异显著（P＜0．05）；而与年龄、性别、肿瘤大小和分化程度无关（P＞0．05）（表2）。
图1 GS在肝细胞癌中阳性表达（Envision×100）图2 E－cadherin在肝细胞癌细胞质异常表达（Envision×100）图3 β－catenin在肝细胞癌细胞核异常表达（Envision×100）Fig．1Positive expression of GS in hepatocellular carcinoma（EnvisionTM×100）Fig．2Aberrant expression of E－cadherin in hepatocellular carcinoma cytoplasm（EnvisionTM×100）Fig．3Aberrant expression ofβ－catenin in hepatocellular carcinoma nucleus（EnvisionTM×100）
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