孙付军1，靳光乾1，张敏2，虞慧娟2，钟方晓1，刘善新
1
（1.山东省中医药研究院，山东济南，250014；2.山东中医药大学，山东济南250014）
摘要：目的：通过藕节炒炭前后提取物、藕节不同提取部位及有效成分对小鼠凝血时间的影响观察，验证藕节炒炭 止血的科学性，确定藕节炭止血作用的有效部位，为探讨止血作用机制奠定基础。方法：采用小鼠凝血时间作为主要（毛
细玻管法）观察指标，分别对藕节炒炭前后受试液、藕节不同提取部位及有效成分进行了测定，18 22g 昆明种小鼠，按
体重、性别均衡、随机分组，分别给予相应受试药物。每天给药1次，连续10天。于最后一次给药后60min ，用毛细玻璃管自小鼠目外眦采血，自采血开始计时，观察自采血至出现血丝的时间作为凝血时间，比较受试药物组凝血时间的变化。结果：通过凝血时间试验，对生藕节提取物、藕节炭提取物进行
了凝血时间影响的筛选，确定藕节炒炭后止血作用优于生藕节的止血作用。在前次实验基础上对藕节石油醚提取部位、醋酸乙酯提取部位、水提取部位进行了凝血时间影响的筛
选，确定藕节止血作用的有效部位为醋酸乙酯部位和水提取部位。进一步观察藕节炭醋酸乙酯提取物、
3－表白桦脂酸对小鼠凝血时间的影响，提示两组受试药均能缩短小鼠凝血时间。结论：藕节炒炭后止血作用加强，醋酸乙脂提取部位、
水提取部位为藕节炭止血作用的主要活性部位，
3－表白桦脂酸为藕节炭止血作用的有效成分之一。关键词：藕节炭；炒炭；止血作用；活性部位；3－表白桦脂酸中图分类号：R285．4文献标识码：A 文章编号：1000－1719（2011）01－0177－02
Lotus Rhizome Node Carbonizing by Stir-frying Active Site
of Bleeding and Its Components of Effective Screening Study
百慕高科SUN Fu-jun 1，JIN Guang-qian 1，ZHANG Min 2，YU Hui-juan 2，ZHONG Fang-xiao 1，LIU Shan-xin 1（1.Shandong Academy of Chinese Medicine ，Jinan 250014，Shandong ，China ；2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine ，Jinan 250014，Shandong ，China ）
Abstract ：Objective ：To Oujie fried carbon before and after the extract ，Ou Jie and effective ingredients of different extracts of
mouse coagulation time of observation ，verification Oujie carbon bleeding scientific speculation to determine the role of an effective hemostatic Oujie carbon site ，to explore the mechanism of bleeding basis．Methods ：The blood coagulation time in mice as the pri-mary （glass capillary tube method ）to observe targets ，
respectively ，by the test solution before and after carbon Oujie fried ，Ou Jie and effective ingredients of different extracts were determined ，
18 22g Kunming mice ，according to body weight ，gender balance ，randomized subjects were given the appropriate drugs．Administered once a day for 10days．After administration in the last 60min ，with the capillary tube outer canthal childhood Shumu Blood samples were collected from the blood start running ，observe from the blood to appear bloodshot time as the clotting time compared drug group subjects clotting time changes．Results ：The blood coagulation time tests on raw Oujie extract ，extract carbon Oujie clotting time of the impact of screening ，to determine the role of Oujie fried charcoal to stop bleeding after the bleeding is superior to the role of raw Oujie
黑帮之地2．In the previous experiments on the basis of Oujie petroleum ether extracts ，ethyl acetate extracts ，water extracts had the impact of screening coagulation time to determine the role of an effective hemostatic Oujie site location for the ethyl acetate and water extracts．Further observation Oujie charcoal ethyl acetate extract ，3－Table betulinic acid effects on clotting time in mice ，suggesting that two groups of subjects are able to shorten the drug coagulation time in mice．Conclusion ：Oujie fried charcoal to stop bleeding after the greater role of ethyl acetate extracts ，water extracts of the role of major bleeding Oujie carbon active sites ，3－Table betulinic acid as a hemostatic effect of carbon Ou Jie ，one of the active ingredients．
Key words ：charred Oujie ；process /carbonizing by stir-frying ；pharmacodynamic /hemostatic effect ；active site ；3－Table bet-ulinic acid
收稿日期：2010－05－12基金项目：“十一五”国家科技支撑项目（2006BAI09B006－02）作者简介：孙付军（1977－），男，山东苍山人，助理研究员，学士，研究方
向：中药药理。
通讯作者：刘善新，副研究员。
藕节为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn．的
陆虎自由人
干燥根茎节部。始载于《本经》，列为上品。藕节炭系
藕节的炒炭品，收载于例版《中国药典》一部及《全国
中药炮制规范》。具有止血、散瘀的功能，用于咳血，
吐血，衄血，尿血，便血，崩漏，功能性子宫出血［1］
。为研究藕节炭的质量标准，探索藕节炭止血的有效部位
和成分，本文以小鼠凝血时间（毛细玻管法）为指标，
依次进行了藕节炒炭前后，藕节炭不同提取部位和有效成分进行了筛选和验证，报道如下。1材料
1.1受试药
1.1.1藕节炒炭前后受试液的提取及配制藕节购于济南市建联中药有限公司，经山东省中医药研究院钟方晓研究员鉴定为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn．的干燥根茎节部。藕节炭为生藕节500g ，炒成藕节炭。
生藕节和藕节炭水煎液，分别制备并定容至
0.488g/mL生药浓度的药液，备用。
1.1.2藕节炭不同部位的提取及配制取藕节炭粗颗粒100g，加入石油醚（60 90ħ）回流提取2次，每次加入600mL，回流2h，滤过，合并石油醚提取液，回收溶剂并蒸干。藕节炭残渣挥去石油醚后，再加醋酸乙酯回流提取2次，每次加入600mL，回流2h，滤过，合并醋酸乙酯提取液，回收溶剂并蒸干。以上二者提取物加土温－80制成混悬液（浓度为0.488g/mL生药）。藕节残渣挥去醋酸乙酯后，再加水煎煮2次，每次30min，滤过，合并水提液，浓缩成0.488g/mL生药浓度的药液。
1.1.3藕节炭醋酸乙酯部位的提取及配制同有效部位的筛选试验的药物提取制备方法。
1.1.43－表白桦脂酸的配制3－表白桦脂酸为从藕节炭醋酸乙酯部位提取分离得到的主要化学成分，取3－表白桦脂酸加土温80配置成
2.01mg/mL的水混悬液，相当生药0.48g/mL。
给药剂量：按照2005版《中国药典》藕节炭最大用量15g，计算小鼠临床等效量为1.95g/kg，灌胃浓度拟以5倍临床等效量给予，即9.75g/kg，给药体积按20mL/kg，即提取液浓度均以0.488g/mL生药量计算。
1.2动物环境
动物：18 22g昆明种小鼠，雌雄各半，SPF级，山东大学实验动物中心提供（第1、2批试验），合格证号：SCXK（鲁）20030004，No：0004117，0004177；山东鲁抗集团质监中心提供（第3批试验），合格证号：SCXK （鲁）20080002，No：0005882。
环境：山东省中医药研究院药理实验中心，许可证号：SYXK（鲁）20050052。
1.3仪器
YP电子天平，上海上天精密仪器有限公司产品。毛细玻璃管：内径0.5mm，长100mm，华西医科大学仪器厂产品。
同声传译2方法［2］与结果
2.1藕节炒炭前后凝血时间比较
2.1.1方法按体重、性别均衡、随机分为空白对照组、生藕节和藕节炭受试液组，每组10只，2个给药组分别给予相应生藕节提取液和藕节炭提取液。空白组给予同体积吐温－80水溶液（同给药组药物配制所加吐温－80浓度）。每天给药1次，连续10天。于最后一次给药后60min，用毛细玻璃管自小鼠目外眦采血，自采血开始计时，每30s截取一段，观察是否出现血丝，观察自采血至出现血丝的时间作为凝血时间，以秒为时间单位。数据以珋
xʃs表示凝血时间，t检验比较不同提取部位对凝血时间的影响。
2.1.2结果连续给药10天，观察2个提取液对小鼠凝血时间的影响，如表1所示，空白组凝血时间为201s，生藕节和藕节炭凝血时间分别为186.64s和161.25s，较空白对照组凝血时间缩短，两受试药组比较藕节炭凝血时间缩短较为明显。学习兴趣与学习习惯的培养
表1藕节炒炭前后对小鼠凝血时间的影响（n=10，珋xʃs）
组别剂量（g/kg）凝血时间（s）
空白组—201．00ʃ43．55
生藕节9．75186．64ʃ34．65
藕节炭9．75161．25ʃ39．65
2.2藕节炭不同提取部位凝血时间比较
2.2.1方法按体重、性别均衡、随机分为空白对照组，3个受试液组，3个受试液分别给予不同藕节炭提取液，空白组给予同体积吐温－80水溶液（同给药组药物配制所加吐温－80浓度）。给药方法、时间及凝血时间测定方法同2.1.1。
2.2.2结果连续给药10天，观察3个提取液对小鼠凝血时间的影响，如表2所示，空白组凝血时间为156.83s，藕节炭乙酸乙酯提取液和水煎液明显缩短凝血时间，较空白组凝血时间缩短，石油醚组凝血时间未见明显缩短。
表2藕节炭不同提取部位对小鼠凝血时间的影响（n=10，珋xʃs）组别剂量（g/kg）凝血时间（s）
空白组—166．83ʃ34．50
石油醚提取9．75178．17ʃ52．75
乙酸乙酯提取9．75134．83ʃ38．57水煎液9．75136．00ʃ26．32
2.3藕节炭醋酸乙酯部位和3－表白桦脂酸凝血时间比较
2.3.1方法按体重、性别均衡、随机分为空白对照组，藕节醋酸乙酯提取液组和表白桦脂酸组，2个受试液分别给予相应提取液，空白组给予同体积吐温－80水溶液（同给药组药物配制所加吐温－80浓度）。给药方法、时间及凝血时间测定方法同2.1.1。
2.3.2结果连续给药10天，观察醋酸乙酯提取物和表白桦脂酸对小鼠凝血时间的影响，如表3所示，空白组凝血时间为91.67s，藕节炭乙酸乙酯提取液和表白桦脂酸组可不同程度缩短凝血时间，表白桦脂酸组凝血时间较醋酸乙酯组短。
西门子s2000
表3藕节乙酸乙酯部位和有效成分对小鼠凝血时间的影响（n=10，珋xʃs）组别剂量（g/kg）凝血时间（s）
空白组—91．67ʃ28．05乙酸乙酯提取物9．7588．70ʃ25．60
3－表白桦脂酸0．040279．55ʃ15．21
3讨论
通过藕节炒炭前后对小鼠凝血时间的观察，提示藕节炒炭后凝血作用加强，符合传统中医理论炒炭止血的观点，本筛选试验验证了炒炭止血的科学性并为进行止血有效成分的研究和其止血作用机制的探讨奠定基础。
通过藕节炭有效部位的筛选试验，可见藕节炭的止血活性部位为醋酸乙酯部位和水提取部位，为进行止血有效成分的研究和其止血作用机制的探讨奠定基础。
第三批实验通过对藕节炭醋酸乙酯提取部位和分离得到的主要成分3－表白桦脂酸的凝血试验观察，结果进一步证实醋酸乙酯部位为凝血的有效部位，并初步表明3－表白桦脂酸可能是藕节炭止血作用的有效成分之一。
通过三次的筛选试验观察，可总结三点结论：首先藕节炒炭止血的传统用法具有一定的科学性；其次应用现代炮制手段对藕节炭不同提取部位观察其凝血作用，醋酸乙酯提取部位和水煎液部位为其有效部位，其有效成分可能为3－表白桦脂酸。其凝血机制尚需进一步研究。
参考文献
［1］黄泰康，丁志遵，赵守训，等．现代本草纲目［M］．北京：中国医药科技出版社，2006：3204－3206．
［2］陈奇．中药药理研究方法学［M］．北京：人民卫生出版社，1993：480－487．
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