蒙药巴特目-7抗炎作用和急性毒性 卖验研克----以有效部住为研克对象*
*收稿日期:2018-10-08
修回日期：2019-07-01
*
内蒙古自洽区科技厅科技创新引导项目重点课题(KCBJ2018030)：洽疗急慢性肠炎蒙药巴特H -7胶囊的研制，负责人：李淑艳；内蒙古自治区 科技厅科技计划项目子课题(KJJH2017007)：蒙药巴特日七味九抑制肠炎作用研究及其有效物质成分筛选；负责人：李淑艳；内蒙古民族大学
国家民委-教育部重点实验室专项蒙医药标准化国际合作科技创新项目于课题(MDKBZH2018034)：蒙药巴特日-7味丸急慢性肠炎作用 机制研究，负责人：李淑艳。
dppp
* * 通讯作者：李淑艳，副教授，硕士生导师，主要研究方向：中蒙药质量标准及药效物质基础研究。
李淑红打包黎明2，李淑艳2**
(1.内蒙古民族大学护理学院通辽028000； 2.内蒙古民族大学蒙医药学院通辽028000)
摘 要：目的对蒙药巴特日-7有效部位的抗炎和急性毒性作用进行评价。方法以巴特日-7水提物为对 照，采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致小鼠足肿胀实验，对巴特日_7有效部位进行抗炎活性评价；采用 小鼠半数致死量(LDs 。)和最大耐受量实验，对其急性毒性进行评价。结果巴特日-7有效部位具有明显的抗炎 作用，抗炎作用与巴特日-7水提物之间无显著性差异(P > 0.05)□巴特日-7有效部位和水提物灌胃给药对小 鼠没有出现LDm 值；最大耐受量实验相当于临床成人(体重70 kg)安全用药剂量的120倍左右，均未出现急性毒 性现象。结论巴特日-7有效部位具有明显的抗炎作用，急性毒性较低，其作用机制有待进一步研究。
关键词：蒙药 巴特日-7 水提物 有效部位 抗炎作用 急性毒性
doi ： 10.11842/wst.2019.07.016 中图分类号:R285.6 文献标识码:A
蒙成药巴特日-7，系由草乌叶、诃子、多叶棘豆、
茜草、黑云香、银朱和麝香等七味药共同配合而成的水 丸制剂。具有杀粘、清热解毒的功效。对瘟疫、麻疹、
金瓶梅女主角痘疹、肠痛、胸痛、白喉塞等疾病具有作用叫 现 代药理实验证明巴特日-7具有抗病毒、抗菌叭镇痛冋
以及增强免疫等药理作用，特别是蒙医临床肠炎 的首选药物，具有蒙药抗生素之称。王希孟
蒙药传统给药方式以煎煮为主，因此，本实验以巴
特日-7水提物作为对照，为开辟巴特日-7新药，以巴 特日-7有效部位作为研究对象，对其巴特日-7有效部 位抗炎作用和安全方面进行了评价。通过巴特日-7
不同提取部位对小鼠单核巨噬(RAW264.7)细胞增殖 的影响、脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏
死因子(TNF-a)和白介素6(IL-6)的影响以及对体外 抗菌活性筛选等前期研究结果表明，巴特日-7有效部
灰姑娘的春天
位是乙酸乙酯-正丁醇部位。目前，对有效部位的化 学成分已进行了分析评价，目前缺乏药效学和相关安 全性评价方面的研究。本研究选择巴特日-7有效部
位为受试药物，以巴特日水提物为对照药，对巴特日-
7有效部位抗炎作用和急性毒性进行评价，为临床应
用和安全用药提供科学依据。
1材料与方法1.1实验动物
昆明种小鼠，体重18-22 g,%兼用(辽宁长生生 物技术有限公司，许可证号：SCXK-2015-0001) ； SPF
级大小鼠生长繁殖饲料喂养，自由饮水，适应3 d 后开 始实验，实验地点：内蒙古民族大学蒙医药学院动物实 验室。
2019第二十一卷第七期★Vol^lNo"
1.2主要仪器设备、药物及试剂
旋转蒸发仪（N-1300，上海爱朗仪器有限公司）；型电子天平（AUY120D，日本岛津）。
巴特日-7，自制；草乌叶、多叶棘豆，采自内蒙古扎鲁特旗自然保护区罕山；茜草、诃子、麝香、黑云香和银朱等购买于泽强药典，由内蒙古民族大学布和巴特尔教授鉴定为正品。阿司匹林片（批号20151104，北京中新制药厂）；角叉菜胶（批号⑵H1120,Sigma公司）；二甲苯为分析纯。
1.3巴特日-7不同提取部位的制备
按处方比例（草乌叶250g、诃子250g、茜草100g、多叶棘豆100 g、黑云香100g、银朱50g、麝香0.5g）称取巴特日-7处方中各单味药材共7.5kg，加入10倍量95%乙醇回流提取（4hx3），合并提取液，减压浓缩法挥去溶剂，得巴特日-7乙醇提取物。将醇提物冷冻干燥挥去溶剂，用水悬浮后，分别用石油醛、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等溶剂萃取，依次得到514.5g石油醛提取物、372g氯仿提取物.602.25g乙酸乙酯提取物、213.75g正丁醇提取物J08.1g水残余部位，提取率分别为6.86%、4.96%、8.03%、2.85%和1.44%。依次取上述乙酸乙酯-正丁醇部位的干浸膏适量，加水配制成浓度为0.296g-mL-的供试液（用药剂量均按照生药量计算）。
按照处方比例配置巴特日-7共0.93kg，加入10倍量水煎煮1.5h，得到的药渣中分别加入8、6倍量水，再分别煎煮1、0.5h，合并提取液并浓缩，得522.6g巴特日-7水提物（简称巴特日-7），提取率为56.2%O取上述提取物加水配制成浓度为0.296g-mL1的供试液（用药量均按照生药量计算）。
1.4二甲苯所致小鼠耳廓肿胀实验
取80只昆明种小鼠（体重18-22g）,96兼用，随机均分为空白对照组（灌胃生理盐水20mL•kg'1）、阳性对照组（灌胃阿司匹林0.25g-kg-'）.巴特日-7低、中、高剂量组、有效部位低、中、高剂量组。巴特日-7和有效部位低、中、高剂量组的给药量均分别为0.74g-kg-.
1.48g-kg'1和
2.96g・kg"（以上给药量均按照生药剂量计算），用水溶解，每组10只。每日给药1次，共6d，最后给药1h后，在小鼠右耳的正反两面涂抹25|xL二甲苯致炎，左耳为对照。在致炎lh以后用颈椎脱臼的方法使动物处死，使用打孔器将每只小鼠左右耳相同部位冲下8-9mm的圆片，称重RF并对肿胀度和抑制率进行计算。肿胀度=肿胀耳重量-对照耳重量；抑制率（%）=（空白对照组动物耳肿胀-给药组动物耳肿胀）/空白对照组动物耳肿胀xlOO%o
1.5角叉菜胶致小鼠足肿胀实验
取80只昆明种小鼠（体重18-22g）,$5兼用，分组与给药方法同上述“2.2”相同。小鼠在末次灌胃给药1h后，对其每只小鼠右后足跖原的厚度进行测量，并且将1%浓度的角叉菜胶在小鼠右后足跖掌心皮下注射100“L致炎，然后用游标卡尺对小鼠致炎1、2、3、4、5,6h右后足跖厚度分别进行测量并计算叫肿胀度=动物右后足致炎后厚度-动物右后足致炎前厚度，抑制率=（空白对照组动物足跖肿胀度-给药组动物足跖肿胀）/空白对照组动物足跖肿胀xl00%o
1.6半数致死量（LDm）的测定
取70只昆明种小鼠（体重18-22g）,?6兼用，随机均分为空白对照组（灌胃生理盐水20mL-kg"），巴
特日-7低、中、高剂量组和有效部位低、中、高剂量组，每组10只。巴特日-7和有效部位低、中、高剂量组的给药量均分别为0.74g•kg-\3.70g-kg-\18.50g•kg-（以上给药量均按照生药剂量计算，以1：5：25比例配置），动物禁食不禁水12 h，并按体重以20mL-kg-灌胃给药，每日1次，共1周，停药后观察1周亠叫小鼠灌胃后12h内，对动物的毒性反应情况进行观察，包括动物外观、精神状态、行为、食欲、被毛、呼吸及口腔、眼、鼻是否岀现异常分泌物，并对动物体重变化以及死亡情况等进行详细记录。
1.7最大给药量实验
取昆明种小鼠30只（体重18-22g）,25兼用，随机均分为空白对照组（灌胃生理盐水20mL-kg'）.巴特日-7高剂量组（灌胃88.8g-kg1）.有效部位高剂量组（灌胃88.8g-kg'），每组10只，以上给药量均按照生药剂量计算，相当于临床成人用药剂量0.074g-（kg-d）-的120倍左右。将巴特日-7和乙酸乙酯-正丁醇部位个剂量药物用纯净水配制成为2.22g・m「，以小鼠能耐受的最大给药体积40mL-（kg-d）-'为给药标准，每日1次，共1周，停药后观察1周心叫
小鼠灌胃后，对动物的毒性反应何进行观察，记录死亡情况，毒性死亡的动物进行尸检，做组织病理学分析。
1.8统计学分析
实验结果用方±s表示，采用SPSS19.0统计软件进行数据处理，并采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,P<0.05为差异具有统计学意义；半数致死量（LDJ采用Bliss法（加权回归几率）计算叫
世界科学技术一中医药现代化★中药研究
表1巴特日-7有效部位对二甲苯所致小鼠
耳廓肿胀的影响(x±5,n=10)
组别剂量/(g*kg l )
肿胀度/mg 抑制率/%
空白对照组一
16.78±0.92
—阳性对照组
0.259.44±1.78"
43.70
巴特日-7低剂量组0.74
铝电池13.33±1.5520.56巴特日-7中剂量组 1.48
11.32±1.92*
32.53
巴特日-7高剂量组
2.9610.38±1.01"38.14有效部位低剂量组0.741
3.87±2.01
17.34
有效部位中剂量组
1.48
11.55±1.65*31.16有效部位高剂量组
2.96
10.68±1.34”
36.35
注：与空白对照组比较,*P < 0.05, **P <0.01。
2结果与分析
2.1对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
结果显示，与空白对照组比较，巴特日-7和有效
部位中剂量组和高剂量组能明显抑制小鼠对二甲苯所 致耳廓肿胀，并具有显著性差异(P < 0.01, P <
0.05)；与空白对照组比较，巴特日-7和有效部位低剂
量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀具有抑制效应，但无 显著性差异(P > 0.05)，耳肿胀抑制率与给药剂量呈 正比关系；巴特日-7与有效部位之间没有显著差异
(表1，图1，图2)。
2.2对角叉菜胶致小鼠足跖肿胀的影响
由表2可知，巴特日-7、有效部位不同剂量组在多 个时间点可明显抑制大鼠的足肿胀。其中，与空白对
照组比较，巴特日-7低剂量组在致炎后l 、2h 作用明 显，而中剂量组和高剂量组在致炎后1-5 h 对小鼠致
炎后足跖肿胀具有抑制作用(P < 0.05)0与空白对照 组比较，巴特日-7有效部位低、中和高剂量组在致炎
后1-5 h 作用明显，对小鼠足跖肿胀具有显著的抑制
图1巴特日-7有效部位对二甲苯所致小鼠
耳廓肿胀的影响(n= 10)
注：与空自对照组比较，*P < 0.05, **P < 0.01 o
图2巴特日-7有效部位对二甲苯所致小鼠耳
肿胀的抑制作用(n=10)
注：与空自对照组比较,*P < 0.05, **P < 0.01。
作用(P < 0.05)o 巴特日-7与有效部位各组之间没
有显著差异(表2，图3)。
2.3半数致死量(LDG 的测定
巴特日-7和有效部位各剂量组灌胃给药后小鼠 未出现中毒反应，精神状态良好、呼吸正常、鼻、眼、口
表2巴特日-7有效部位对角叉菜胶致小鼠足跖肿胀的影响(x±s,n =10)
组别
剂量/(g-kg _l )
足肿胀抑制率(％)
lh 2h 3h 4h 5h 6 h
空白对照组—24.44±0.9821.4±0.6519.56±0.94
18.65±0.85
17.54±0.9816.0±0.76阳性对照组0.25
32.0±0.88"
36.7±1.11”32.01±0.63”26.33±0.87"23.76±0.73*
22.81 ±1.00*
巴特日-7低剂量组0.7426.62土1.02・24.3±1.00，22.51 ±0.75
21.33±1.11
20.98±1.2119.43±0.65巴特日-7中剂量组 1.4829.64±0.65“
27.34±0.78"26.12±0.54*24.76±0.84*21.54±0.6519.87±0.66
巴特日-7高剂量组
2.96
31.51±1.04"35.5±1.00"
30.63±0.76“25.26±0.44*
22.14±1.22*
20.00±0.77有效部位低剂量组0.7425.62±0.65*23.9±1.03*21.65±0.79*
20.61 ±1.4318.99±1.11
18.32 ±0.73
有效部位中剂量组 1.4828.14±0.55*
27.43±0.54*25.32±0.66*23.54±0.32*21.65±0.5518.65±0.65
有效部位高剂量组
2.96
30.34±1.22”33.4±0.90”29.76士 0.87，24.65±0.66*
22.44±1.54'19.65±0.76
注：与空白对照组比较，*P < 0.05, **P <0.01o
2019第二十一卷第七期★Vol.21No.7
图3巴特日-7有效部位对角叉菜胶致小鼠
足跖肿胀的影响(“=10)
表3巴特日-7有效部位各组小鼠LDa实验
体重变化(x±s,n=10)
剂量体重/g
/(g・k£)给药前给药后1周停药后1周空白对照组—19.99±0.3421.54±0.6523.12±0.87巴特日-7低剂量组0.7420.65±0.5422.05±0.5423.51±0.73巴特日-7中剂量组 3.7021.33±0.4523.98±0.8725.48±0.83巴特日-7高剂量组18.5020.76±0.5422.33±0.7323.88±0.61有效部位低剂量组0.7419.76±0.6621.43±0.5423.03±0.65有效部位中剂量组 3.7021.34±0.5523.00±0.4324.65±0.78有效部位高剂量组18.5020.65±0.4822.05±0.5323.77±0.76注：与空自对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
图4各组小鼠LDa实验体重变化(n=10.x±s)
腔等无异常分泌物。实验过程中，巴特日-7、有效部位组的各剂量组小鼠体重变化比较时.无显著性差异(P>0.05)(表3，图4)。
蒙药复方巴特日-7各单味药材均为低毒或无毒药材，故此复方毒性低，未能测得该复方的LD’。，因此，按照中药、天然药物急性毒性研究指导原则，进行最大给药量实验。
2.4最大给药量实验
原罪感给药后对动物观察了1周，结果动物精神状态、毛等无明显异常；呼吸无异常、口腔、眼、鼻均无异常分泌物。以小鼠作为实验对象，在最大给药体积和最大给药量的情况下，无法测得LD50o最大给药量实验中，给药量相当于临床成人用药剂量0.074g-(kg-d)-'的120倍左右，未出现毒性现象，表明巴特日-7药物毒性低，临床短期常用药量安全可靠。
3讨论
巴特日-7作为一种肠炎疾病的蒙药制剂，在蒙医临床上广泛使用，且效果良好。本方具有止痛、杀粘功能的草乌叶为君药；配以具有杀粘、止痛、消肿功能的多叶棘豆，杀粘、开窍功能的麝香，杀粘、止痛功能的黑云香为臣药；草乌叶(Aconiti Kusnezojfii Folium)为毛萇科植物北乌头Aconitumkiisnezoffii Reichb.的干燥叶，其主要含有总生物碱成分口，具有杀粘、清热、止痛、抗炎等功效°"；多叶棘豆(Herba Oxytropis myriophylla)
为豆科植物狐尾藻棘豆(Oxytropis myriophylla(pall) DC.)的干燥地上部分，其主要成分皿切含有黄酮类、木脂素类、酚甘类、三帖皂昔类以及生物碱类，具有杀黏、清热、止痛等功效脚；麝香为鹿科动物麝(Mosch-us moschiferus L)雄体香囊中的干燥分泌物。主要含有麝香酮、降麝香酮、麝香醇等成分，具有抗炎"抑、增强免疫功能冋等作用。本研究为阐明该复方药效成分、作用机制及进一步临床二次开发奠定基础。
作为新药资源使用之前，需要进行有效性和安全性评价。复方制剂提取并浓缩后会导致化学组分和有效成分量的变化，研究报道闻，相同的剂量下，活性部位筛选时巴特日-7与提取物乙酸乙酯-正丁醇部位(即有效部位)对RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞)增值和LPS刺激RAW264.7细胞释放TNF-a和1L-6的作用中均无明显差异。但是目前关于急性炎症动物模型和毒性研究未见报道。
炎症是机体对致炎因子引起的以防御为主的病理过程皿刊。急性炎症表现为红肿热痛等症状，并使毛细血管通透性增加而引起炎症渗出和肿胀。巴特日-7具有清热解毒、消“粘”功效。蒙药巴特日-7，为肠刺痛及粘热症常用主方，是蒙医临床肠炎的首选药物，在蒙医临床上使用的剂型是水丸制剂冋。本实验采用了急性炎症动物模型，为减少实验误差选择雄雌各半的昆明种小鼠，对其巴特日-7水提取物作为整体部位与巴特日-7活性部位(即有效部位)的抗炎作用进行
世界科学技术一中医药现代化★中药研究
了探讨。研究结果表明，巴特日-7高、中剂量组和有效部位高、中剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶所致足跖肿胀均有明显的抑制作用，但巴特日-7和有效部位之间均无显著性差异，其抑制作用与阳性对照组相当。巴特日-7低剂量组在2h后致炎作用逐渐减低，而有效部位低剂量组在3h后致炎作用逐渐降低，表明在相同的剂量下巴特日-7和有效部位产生抑制炎症的作用时间点是有差异的。说明其能够有效缓解炎症发生过程的早期症状，这可能与其明显抑制炎症早期血管通透性亢进和水肿有关，但具体的抗炎机制有待于进一步阐明。
急性毒性实验结果表明，小鼠对巴特日-7和乙酸乙酯-正丁醇提取部位(有效部位)的最大给药体积和最大给药量的情况下给药量相当于临床成人每公斤体
重日用药剂量0.074g的120倍左右，给药后小鼠未出现明显中毒现象，也无死亡现象，且该药对小鼠体重增加无明显影响，一般按体质量计算，小鼠最大给药量相当于成人临床用药量100倍以上则认为是较为安全的㈣。表明巴特日-7有效部位毒性小，在一定剂量内使用是安全的。同时显示出该药具有良好的开发利用前景。
实验结果表明，巴特日-7有效部位抗炎作用与急性毒性同巴特日-7整体部位比较，发现两者无统计学差异。本研究以期为巴特日-7的进一步开发利用提供了初步的药效学和毒理学基础，其临床应用的有效性及安全性尚需深入研究。
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