第一篇：关于细菌超声破碎的一些经验总结
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达，使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体，另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。 超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。
超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100。切记冰浴超声！
如何判断是否超声完全：根据网友的经验，一般有以下几个方面： 1，外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。2，液体的粘滞性：超声后菌液从头滴下不
粘连。
3，高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点）。沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。4，染：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染0.5分钟，镜检。超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。一些需要注意的问题：
1，蛋白以包涵体形式表达，追求的是高破碎率，要求细胞碎片很小，而另一种蛋白是可溶形式表达，所以细胞碎片不能很小，两种情况要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分离。2，如果超声时出现黑沉淀，说明超声功率太强。3，超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。4，尽量防止泡沫的产生。
第二篇：关于细菌超声破碎的一些经验总结范文
关于细菌超声破碎的一些经验总结.txt38当乌云布满天空时，悲观的人看到的是“黑云压城城欲摧”，乐观的人看到的是“甲光向日金鳞开”。无论处在什么厄运中，只要保持乐观的心态，总能到这样奇特的草莓。细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动
adr成就龙子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达，使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体，另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。
超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。
超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100。切记冰浴超声！
如何判断是否超声完全：根据网友的经验，一般有以下几个方面： 1，外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。2，液体的粘滞性：超声后菌液从头滴下不粘连。
3，高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点）。沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。
4，染：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染0.5分钟，镜检。超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。一些需要注意的问题：
1，蛋白以包涵体形式表达，追求的是高破碎率，要求细胞碎片很小，而另一种蛋白是可溶形式表达，所以细胞碎片不能很小，两种情况要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分离。2，如果超声时出现黑沉淀，说明超声功率太强。3，超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。4，尽量防止泡沫的产生。
第三篇：超声破碎仪
快速入门指南和操作步骤
我们建议您按照本指南中的步骤操作。我们不鼓励在一开始就测试自行设计的协议，因为这样做会很耗时，并且可能会误导仪器的性能。
目的：安装EpiSonic。请参阅用户手册中的第7页以获取完整的可视安装说明| 预计时间：15分钟
注意：开箱时请注意所有组件的位置，以便在运回时可以将所有组件快速重新包装到正确的位置。
2.用扳手拧紧（手拧不够，会影响结果）。
花龄盛会3.将流量管连接到样品处理喇叭上的黑接头。
4.将转换器电缆连接到转换器。通过顺时针转动紧固机构来锁定连接。再循环冷却器组件：
1.将电源适配器连接到循环冷却器。
2.将电源线连接到电源适配器。将电源线插入接地的电源插座。主要组装：
1.将流量管穿过隔音罩，并在转换器电缆穿过时将组装好的转换器放置在隔音罩的内座上。确保电缆不被卡住。
2.将管架（或可选的板架）放入样品处理喇叭。
3.在每个流量管的裸露端装上白配件。然后将水释放连接器连接到一个白配件。将线路滤波器连接到其他白配件。
4.将放水连接器连接到循环冷水机组的“电源”连接和管路过滤器，以再循环冷水机组的“返回”连接。
5.将转换器电缆连接到超声波发生器。通过顺时针转动紧固机构来锁定连接。6.将电源线连接至声波发生器。将电源线插入接地电源插座。验证：
虎屋目的：确保EpiSonic已经设置并正常工作| 预计时间：15分钟 1.将样品处理喇叭的容器填充到200毫升冷过滤水中。
2.打开循环冷却器。让水流入管道。在10分钟内确保冷水机的屏幕温度达到10°C。关闭冷水机组。
3.打开超声波发生器。手动运行振幅设置为20％的程序10秒钟。如果瓦特的输出读数低于
5瓦，那么您可能需要将转换器重新拧紧到超声处理喇叭。操作-0.2毫升管 目的：按照给定的步骤剪切你的样品 预计时间：30-45分钟
需要外部材料
EpiSonic™0.2 ml带帽试管（Cat＃EQC-1000-X02）感兴趣的DNA样品：
高质量的非降解基因组DNA 开始大小超过50kb 缓冲液：1×TE或Tris-HCl（10mM，pH8.0）+ EDTA（1mM）
注意：在任何形式的超声波处理过程中，偶尔溶液中的溶液可能会分离到管道或管道的内侧，这可能会影响剪切的DNA大小。为了达到最佳效果，在进行每20次超声波处理循环后，可以将样品短暂离心或轻轻敲下，以恢复孔底部的样品体积，特别是当溶液分离到管盖或管壁两侧时。
要么;染质样品的兴趣
来自细胞系的高质量，未降解的染质提取物 每管中30μlChIP缓冲液中含有4μg染质
缓冲区：可以使用任何常见的ChIP缓冲区;EpiSonic™ChIP缓冲液（建议使用EQC-1000-CCB型号，以获得最佳效果。
注意：染质的剪切结果可能受染质数量，细胞/组织类型，剪切缓冲液的洗涤剂浓度和样品粘度的影响。因此，用户可以根据实际情况进一步优化染质剪切条件。一般而言，样品粘度可能对超声处理结果具有显着的影响。强烈建议在超声处理前和超声过程中仔细均匀化染质样品。为获得最佳结果，在超声处理过程中每20个工作循环执行一次后，应将样品短暂离心，以恢复管底部的样品体积，尤其是当溶液分离到管盖或管壁两侧时。
声音程序
1.将200毫升过滤水加入样品处理喇叭。将管架放入样品处理喇叭。放置管架，使指孔与样品处理喇叭的橡胶边缘上的流量管连接孔对齐。
2.将循环冷却器设置为目标温度至少4°C。打开预冷几分钟，直到循环冷却器的读数温度读数为4°C。确保水完全流入流量管。
3.按照超声波发生器的屏幕指示导航屏幕。如有需要，请参阅用户手册第11页上的“操作”部
分以获得进一步的帮助。
4.将起始幅度设置为30％（稍后可能需要在步骤6中进行调整）。然后根据下表设置程序设置（阴影时间是需要输入到EpiSonic的设置）： DNA剪切：金童玉女的传说
对于染质剪切：
* 1占空比= 1脉冲开启时间+ 1脉冲关闭时间 提示：如果碎片太长，则一次增加5个占空比
5.将条带帽切成单个帽，然后盖上每个样品管。小心地将样品管（1-12）插入管架。管中的样品应完全浸没在水中（水位应比管中样品高2-3mm）。
提示：为了在同时运行少于12个样品的情况下提高重现性，请插入仅包含相当于样品量的缓冲液的模拟管，用于剩余未使用位置。
6.关闭声音机箱的盖子。按下“STOP / START”键开始超声处理程序。EpiSonic现在将在这些设置下运行。只要EpiSonic开始超声处理，快速调整幅度，直到它对应于约140瓦的平均功率输出。
同好家园
7.一旦程序完成，拿出管。如果液体收集在管壁的一侧，则将液体简单地离心到底部。DNA可以使用或以其他方式储存在-20℃。剪切后的染质可用于ChIP测定或以其他方式储存于-80℃。清理
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